本文選題：硫酸酯酶修飾因子 + 原核表達(dá)載體�。� 參考：《中國(guó)科技論文》2014年09期

【摘要】：構(gòu)建人硫酸酯酶修飾因子2(SUMF2)基因各亞型的融合表達(dá)載體并在大腸桿菌中誘導(dǎo)表達(dá)pPET-SUMF2各亞型的融合蛋白。用EcoRI和XhoI雙酶切人SUMF2各種亞型基因及質(zhì)粒pPET-30a;將2種酶切產(chǎn)物按常規(guī)方法連接、轉(zhuǎn)化至大腸桿菌DH5α。挑取菌落培養(yǎng),提取質(zhì)粒進(jìn)行驗(yàn)證。將構(gòu)建成功的pPET-SUMF2各亞型重組表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至BL21(DE3)中,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后,SDS-PAGE電泳分析以及Western blot檢測(cè)SUMF2各亞型的融合蛋白表達(dá)。成功構(gòu)建了pPET-SUMF2各亞型的重組表達(dá)質(zhì)粒,并成功誘導(dǎo)SUMF2各亞型融合蛋白的表達(dá),Western blot結(jié)果顯示在預(yù)期位置有特異蛋白條帶表達(dá),并在BL21(DE3)內(nèi)表達(dá)了SUMF2各亞型的融合蛋白,為進(jìn)一步研究SUMF2的功能以及SUMF2與哮喘發(fā)病的關(guān)系奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:The fusion expression vector of human sulfate-modifying factor 2 (SUMF2) gene subtype was constructed and the fusion protein of pPET-SUMF2 subtype was induced and expressed in Escherichia coli. Human SUMF2 subtype genes and plasmids pPET-30awere digested with EcoRI and XhoI, and the two products were ligated into E. coli DH5 偽 by routine method. The colony culture was carried out and the plasmid was extracted for verification. The recombinant expression plasmid pPET-SUMF2 was transformed into BL21 (DE3). After induced by IPTG, SDS-PAGE electrophoresis and Western blot were used to detect the expression of fusion protein of SUMF2 subtype. The recombinant expression plasmid of each subtype of pPET-SUMF2 was successfully constructed, and the expression of subtype fusion protein of SUMF2 was induced successfully. The results of Western blot showed that there were specific protein bands in the expected position, and the fusion protein of each subtype of SUMF2 was expressed in BL21 (DE3). It lays a foundation for further study of the function of SUMF2 and the relationship between SUMF2 and asthma.
【作者單位】： 哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第四醫(yī)院檢驗(yàn)科;
【基金】：高等學(xué)校博士學(xué)科點(diǎn)專項(xiàng)科研基金資助項(xiàng)目(20112307110021) 國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81171657)
【分類號(hào)】：R562.25

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2079526