本文選題：脂多糖 + 急性肺損傷��； 參考：《華中科技大學(xué)》2014年博士論文

【摘要】：第一部分Maresin1抑制脂多糖誘導(dǎo)的急性肺損傷模型中性粒細(xì)胞的粘附 目的：探討Maresin1(MaR1)對(duì)脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)誘導(dǎo)的小鼠急性肺損傷(acute lung injury, ALI)模型炎癥反應(yīng)的影響及其機(jī)制。 方法：128只雄性SPF級(jí)BALB/c小鼠隨機(jī)分為4組：(1)假手術(shù)組(sham)：小鼠經(jīng)口氣管插管滴入生理鹽水,1小時(shí)后尾靜脈注射生理鹽水。(2)脂多糖組(LPS)：小鼠經(jīng)口氣管插管滴入LPS (3mg/kg),1小時(shí)后尾靜脈注射生理鹽水。(3)MaRl小劑量組(LPS+LD-MaRl)：小鼠經(jīng)口氣管插管滴入LPS (3mg/kg)1小時(shí)后尾靜脈注射MaRl (O.lng/只)。(4)MaRl大劑量組(LPS+HD-MaRl):小鼠經(jīng)口氣管插管滴入LPS (3mg/kg),1小時(shí)后尾靜脈注射MaRl (1ng/只)四組小鼠在氣管給藥后24小時(shí)處死。抽取動(dòng)脈血監(jiān)測(cè)血?dú)�。觀察小鼠肺組織病理學(xué)改變,肺泡灌洗液(broncheoalveolar lavage fluid, BALF)中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞數(shù)目的變化,以及肺組織濕干重比。分光光度計(jì)法檢測(cè)BALF總蛋白含量與肺組織髓過(guò)氧化物酶活性。ELISA法檢測(cè)BALF炎癥細(xì)胞因子TNF-α, IL-1β, IL-6, KC, IL-10, MCP-5, MIP-la和MIP-1γ。免疫組化法觀察肺組織中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)。流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)中性粒細(xì)胞與血小板之間的粘附。Western blotting檢測(cè)肺組織ICAM-1,P-選擇素和CD24的表達(dá)。 結(jié)果：大劑量MaRl能顯著減輕LPS誘導(dǎo)的肺損傷和肺水腫,抑制中性粒細(xì)胞浸潤(rùn),改善氧合功能。同時(shí)大劑量MaRl能下調(diào)促炎癥細(xì)胞因子(TNF-α, IL-1β, IL-6, KC)和趨化因子(KC, MCP-5, MIP-la, MIP-1γ)的表達(dá),上調(diào)抗炎癥細(xì)胞因子IL-10的表達(dá)。流式細(xì)胞學(xué)結(jié)果證實(shí)MaRl能抑制中性粒細(xì)胞和血小板之間的相互作用。肺組織Western blotting證實(shí)MaRl能減少ICAM-1, P-選擇素和CD24的表達(dá)。 結(jié)論：大劑量的MaR1能顯著改善LPS誘導(dǎo)的肺組織結(jié)構(gòu)的破壞和氧合功能障礙,下調(diào)中性粒細(xì)胞的粘附作用,降低促炎癥細(xì)胞因子的表達(dá),從而減輕LPS誘導(dǎo)的ALI的炎癥反應(yīng)。 第二部分Maresin1促進(jìn)中性粒細(xì)胞凋亡及其機(jī)制研究 目的：研究MaRl對(duì)人中性粒細(xì)胞凋亡的影響并探討其可能機(jī)制。 方法：通過(guò)Percoll非連續(xù)密度梯度離心法,分離人中性粒細(xì)胞進(jìn)行體外離體培養(yǎng)。用含MaRl (1-100nM)或/和caspase廣譜抑制劑(z-VAD-fink)處理30min后,加入LPS (100-500ng/ml)處理。給予LPS后24小時(shí),流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)中性粒細(xì)胞凋亡和中性粒細(xì)胞caspase-3的活性。Western blotting檢測(cè)中性粒細(xì)胞p-ERK1/2, p-p38, p-AKT, Bcl-2和Mcl-1的表達(dá)。 結(jié)果：MaRl (1-10nM)不影響中性粒細(xì)胞凋亡,而高濃度100nM MaRl能顯著抑制中性粒細(xì)胞凋亡。LPS可呈劑量依賴性地抑制中性粒細(xì)胞凋亡,500ng/mlLPS抑制中性粒細(xì)胞凋亡最強(qiáng)。盡管MaRl1nM也能拮抗LPS抑制中性粒細(xì)胞凋亡的作用,但在MaRl10nM時(shí)拮抗作用最強(qiáng)。同時(shí),z-VAD-fink可明顯抑制MaRl促進(jìn)中性粒細(xì)胞凋亡和上調(diào)caspase-3表達(dá)的作用。Western blotting結(jié)果顯示,LPS可誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞的ERK1/2,p38,AKT磷酸化,作用30min時(shí)最為顯著；lOnM MaRl處理30min后,可明顯抑制LPS誘導(dǎo)的ERK1/2, p38, AKT的磷酸化。此外,lOnM MaR1處理2小時(shí)后,可明顯抑制LPS上調(diào)的Bcl-2和Mcl-1的表達(dá)。 結(jié)論：MaRl能拮抗LPS抑制中性粒細(xì)胞凋亡的作用,其作用機(jī)制可能是通過(guò)阻斷LPS誘導(dǎo)ERK1/2, p38, AKT磷酸化,和Bcl-2和Mcl-1的表達(dá),最終激活中性粒細(xì)胞caspase-3活性來(lái)實(shí)現(xiàn)。 第三部分Maresin1通過(guò)促進(jìn)中性粒細(xì)胞凋亡加速急性肺損傷炎癥消退 目的：探討MaR1對(duì)LPS誘導(dǎo)的小鼠ALI炎癥消退的影響及其機(jī)制的研究。 方法：實(shí)驗(yàn)分為兩部分。第一部分探討MaRl是否能促進(jìn)LPS誘導(dǎo)的小鼠ALI炎癥消退。80只雄性SPF級(jí)BALB/c小鼠隨機(jī)分為兩組：LPS組和LPS+MaRl組。經(jīng)口氣管內(nèi)滴注LPS (3mg/kg)制備小鼠ALI模型。24小時(shí)后尾靜脈注射MaRl (1ng/只)或生理鹽水。分別于不同的天數(shù)處死小鼠：0、1、2、4、7天(每次處死8只)。觀察小鼠肺組織病理學(xué)改變,BALF中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞數(shù)目的變化,以及肺組織濕干重比。分光光度計(jì)法檢鋇BALF,總蛋白的含量。第二部分探討MaRl能否通過(guò)促進(jìn)中性粒細(xì)胞凋亡,從而發(fā)揮促進(jìn)ALI炎癥消退。128只雄性SPF級(jí)BALB/c小鼠隨機(jī)分為四組：假手術(shù)組,LPS組,LPS+MaRl治療組,LPS+MaRl+caspase廣譜抑制劑組。除假手術(shù)組,每只小鼠氣管內(nèi)滴注LPS(3mg/kg),24小時(shí)后尾靜脈注射MaRl (1ng/只)或生理鹽水。同時(shí)腹腔注射caspase廣譜抑制劑：z-VAD-fink (10μg/kg),分別于4小時(shí)后和8小時(shí)后再腹腔追加z-VAD-fmk,其余組給予等體積的生理鹽水。給予MaRl24小時(shí)后,流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)中性粒細(xì)胞凋亡和中性粒細(xì)胞caspase-3的活性。觀察小鼠肺組織病理學(xué)改變,BALF中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞細(xì)胞數(shù)目的變化,以及巨噬細(xì)胞吞噬凋亡小體；分光光度計(jì)法檢測(cè)BALF,總蛋白含量和肺組織髓過(guò)氧化物酶活性;ELISA法檢測(cè)BALF炎癥因子TNF-α, IL-1β, IL-10, MCP-5,MIP-1γ。 結(jié)果：第一部分結(jié)果顯示氣管內(nèi)滴注LPS后,肺組織結(jié)構(gòu)紊亂,中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)以及肺水腫在24小時(shí)達(dá)炎癥高峰。24小時(shí)后肺損傷逐漸減輕,至第7天肺損傷基本恢復(fù)正常。在炎癥高峰期(24小時(shí)),尾靜脈注射MaRl明顯減輕了LPS誘導(dǎo)的肺損傷。肺損傷在第4天基本恢復(fù)正常。第二部分結(jié)果顯示MaRl能促進(jìn)BALF中性粒細(xì)胞凋亡并上調(diào)中性粒細(xì)胞caspase-3的表達(dá)。同時(shí)MaRl能減輕肺組織病理學(xué)損傷,減少中性粒細(xì)胞浸潤(rùn),降低肺組織髓過(guò)氧化物酶的活性和抑制BALF炎癥因子TNF-α, IL-1β, MCP-5, MIp-1γ的產(chǎn)生,促進(jìn)抗炎癥細(xì)胞因子IL-10的產(chǎn)生。相反,z-VAD-fmk可部分拮抗MaRl的促凋亡作用,同時(shí)顯著抑制MaRl對(duì)急性肺損傷的保護(hù)作用。 結(jié)論：MaRl通過(guò)促進(jìn)中性粒細(xì)胞凋亡,從而加速LPS誘導(dǎo)的小鼠ALI炎癥消退。
[Abstract]:first part maresinl inhibits lipopolysaccharide - induced adhesion of lipopolysaccharide - induced acute lung injury model neutrophils

Objective : To investigate the effect and mechanism of Maresinl ( MaR1 ) on the inflammatory response of lipopolysaccharide ( LPS ) induced acute lung injury ( ALI ) model in mice .

Methods : 128 male SPF BALB / c mice were randomly divided into four groups : ( 1 ) sham operation group ( sham ) : mice were injected with normal saline at the end of 1 hour after tracheal intubation .

Results : Large dose of MaR1 can significantly reduce LPS - induced lung injury and pulmonary edema , inhibit neutrophil infiltration and improve oxygenation . At the same time , the large dose of MaR1 can downregulate the expression of pro - inflammatory cytokines ( TNF - 偽 , IL - 1尾 , IL - 6 , KC ) and chemokine ( KC , MCP - 5 , MIP - la , MIP - 1 緯 ) . The results of flow cytometry confirm that MaR1 can inhibit the interaction between neutrophils and platelets . The expression of ICAM - 1 , P - selectin and CD24 can be reduced by Western blotting .

Conclusion : The large dose of MaR1 can significantly improve the damage and oxygenation of LPS - induced lung tissue structures , regulate the adhesion of neutrophils , decrease the expression of pro - inflammatory cytokines , and reduce the inflammatory response of LPS - induced ALI .

Study on the Effect of the Second Part Maresinl on Neutrophils Apoptosis and Its Mechanism ;

Objective : To study the effect of MaR1 on human neutrophil apoptosis and to explore its possible mechanism .

Methods : In vitro ex vivo culture of human neutrophils was carried out by means of the continuous density gradient centrifugation . After treated with MaR1 ( 1 - 100 nM ) or / and caspase - wide - spectrum inhibitor ( z - VAD - fink ) for 30 min , LPS ( 100 - 500 ng / ml ) was added . 24 hours after LPS administration , the activity of neutrophil apoptosis and neutrophil caspase - 3 was detected by flow cytometry . Western blotting was used to detect the expression of neutrophil p - 1 / 2 , p - p38 , p - p38 , Bcl - 2 and Mcl - 1 .

Results : MaR1 ( 1 - 10 nM ) did not influence the apoptosis of neutrophils , while the high concentration of 100 nM MaR1 could significantly inhibit the apoptosis of neutrophils .
After treated with lOnM MaR1 for 30 min , LPS - induced phosphorylation of 1 / 2 , p38MAPK was significantly inhibited . In addition , the expression of Bcl - 2 and Mcl - 1 up - regulated by LPS could be significantly inhibited after lOnM MaR1 treatment for 2 hours .

Conclusion : MaR1 can inhibit LPS from inhibiting neutrophil apoptosis . The mechanism of action may be by blocking LPS - induced phosphorylation of 1 / 2 , p38 , the phosphorylation of p38 , and the expression of Bcl - 2 and Mcl - 1 , and finally activating the activity of caspase - 3 .

The third part Maresin1 accelerates the inflammation of acute lung injury by promoting neutrophil apoptosis .

Objective : To investigate the effect of MaR1 on LPS - induced ALI inflammation and its mechanism .

Methods : The mice were divided into two groups : LPS group and LPS + MaR1 group . The rats were sacrificed at 0 , 1 , 2 , 4 , 7 days after intravenous injection of LPS ( 3 mg / kg ) .
TNF - 偽 , IL - 1尾 , IL - 10 , MCP - 5 , MIP - 1 緯 were detected by ELISA .

Results : In the first part , LPS - induced lung injury was observed in the lungs after LPS injection . The lung injury was gradually reduced after 24 hours . The lung injury was reduced gradually to the 7th day . The results showed that MaR1 could promote the apoptosis of BALF neutrophils and increase the expression of TNF - 偽 , IL - 1尾 , MCP - 5 , MIp - 1 緯 .

Conclusion : MaR1 accelerates LPS - induced ALI inflammation by promoting neutrophil apoptosis .
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R563.8

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2059172