本文選題：急性肺損傷/急性呼吸窘迫綜合征 + II型肺泡上皮細胞��； 參考：《中國人民解放軍醫(yī)學院》2013年碩士論文

【摘要】：目的 ALI/ARDS患者肺泡液體清除相關(guān)離子通道表達和功能活性下降，肺泡液體清除能力受損，肺泡腔內(nèi)液體積聚增加，是導(dǎo)致呼吸窘迫的直接原因，與疾病預(yù)后差相關(guān)。通過改善肺泡液體清除能力，可能是未來救治ALI/ARDS的新思路。本研究探討全氟化碳對脂多糖誘導(dǎo)的肺泡液體清除相關(guān)離子通道表達及功能下調(diào)的保護作用。 方法 （1）利用超聲細胞破碎儀制備PFC-in-DMEN；采用不同體積比的PFC-in-DMEM（0%，10%，30%，50%）作用A549細胞0.5h、1h、2h、4h，優(yōu)化PFC作用最佳濃度和作用時間;（2）用LPS（10ug/ml）干預(yù)A549細胞，建立肺損傷細胞模型；（3）A549細胞分別采用DMEM培養(yǎng)基、LPS（10ug/ml）、10%PFC-in-DMEM、10%PFC-in-DMEM~+LPS（10ug/ml）干預(yù)4h，采用實時定量PCR（qPCR）檢測ENaC-α、β、γ,Na~+-K~+-ATPase-α1,β1,CNG1-α和AQP3mRNA的變化;western-blot檢測ENaC-α、Na~+-K~+-ATPase-α1的蛋白表達變化；采用細胞Na~+-K~+-ATPase酶活性檢測試劑盒分析A549細胞Na~+-K~+-ATPase活性。 結(jié)果 （1）10%PFC作用A549細胞4h ENaC-α和Na~+-K~+-ATPase-α1mRNA表達的水平最高；（2）LPS(10ug/ml)增加1L-1β、IL-6和TNF-α的mRNA表達，4h達到最高峰，，6h呈下降趨勢，但仍高于對照組。LPS作用0.5h時ENaC-α和Na~+-K~+-ATPase-α1mRNA輕度上升，1h后呈逐漸下降趨勢，但均無統(tǒng)計學差異，4h下降最明顯（分別P=0.037，P=0.046）；（3）與對照組比較，LPS組ENaC-α、β,Na~+-K~+-ATPase-α1、β1的mRNA的表達和6h的ENaC-α、Na~+-K~+-ATPase-α1蛋白的表達明顯降低，而ENaC-γ、CNG1-α、和AQP3無明顯降低。（4）與LPS比較，PFC~+LPS作用4h能顯著上調(diào)ENaC-α、γ,Na~+-K~+-ATPase-α1,β1和CNG1-α的mRNA表達，顯著上調(diào)ENaC-α、Na~+-K~+-ATPase-α1的蛋白表達；（5）與LPS比較，PFC~+LPS作用4h能顯著上調(diào)Na~+-K~+-ATPase活性（P=0.045）。 結(jié)論 1．10ug/ml LPS能導(dǎo)致A549細胞產(chǎn)生大量IL-1β、IL-6和TNF-α等前炎癥因子，并使肺泡液體清除相關(guān)離子通道ENaC-α、β,Na~+-K~+-ATPase-α1、β1的mRNA的表達和6h的ENaC-α、Na~+-K~+-ATPase-α1蛋白的表達下降，表明ALI細胞模型成功，并可用于ALI時肺泡液體清除相關(guān)細胞研究。 2. PFC能直接提高正常A549細胞肺泡液體清除相關(guān)離子通道ENaC-γ和CNG1αmRNA和ENaC-α和Na~+-K~+-ATPase-α1蛋白的表達。 3. PFC可能通過增加肺泡液體清除相關(guān)離子通道ENaC-α、γ,Na~+-K~+-ATPase-α1,β1和CNG1-α mRNA和ENaC-α和Na~+-K~+-ATPase-α1蛋白表達及增強Na~+-K~+-ATPase酶活性，以降低LPS對肺泡上皮液體清除能力的損傷。
[Abstract]:Objective in ALI / ARDS patients, the expression and functional activity of alveolar fluid clearance related ion channels decreased, the alveolar fluid clearance ability was impaired, and the accumulation of fluid in alveolar cavity was increased, which was the direct cause of respiratory distress and was related to the poor prognosis of the disease. By improving alveolar fluid clearance, it may be a new way to cure ALI / ARDS in the future. The aim of this study was to investigate the protective effect of perfluorocarbon on lipopolysaccharide-induced alveolar fluid clearance related ion channel expression and function down-regulation. Methods (1) PFC-in-DMEN was prepared by ultrasonic cell fragmentation instrument, PFC-in-DMEMN with different volume ratio (PFC-in-DMEMN) was used to treat A549 cells for 0.5 h, 1 h and 2 h for 4 h, and the optimal concentration and time of PFC treatment were optimized (P < 0.05). LPS10ugrml) was used to interfere with A549 cells to establish lung injury cell model. The cells were treated with PFC-in-DMEM10ugml / ml and PFC-in-DMEM ~ LPS-10ugP / ml for 4 h respectively. The protein expression of ENAC- 偽, 尾, 緯 Na-K-ATPase- 偽, 尾 _ 1CNG1- 偽 and AQP3 mRNA were detected by real-time quantitative PCRQPCR- 偽, 尾 _ 1CNG1- 偽 and AQP3 mRNA, and the protein expression of ENaC- 偽 Na ~ -K ~ -ATPase- 偽 _ 1 was analyzed by cell Na ~ -K ~ -ATPase activity assay kit. Results the highest level of ENAC- 偽 and Na ~ -K~ -ATPase- 偽 _ 1 mRNA expression was observed in A549 cells treated with PFC for 4 h. The increase of 1L-1 尾 -IL-6 and TNF- 偽 mRNA expression in A549 cells reached its peak at 6 h and decreased at 4 h. However, the mRNA of ENAC- 偽 and Na ~ -K- ATPase- 偽 _ 1 increased slightly at 0.5 h after treatment with LPS, but there was no significant difference in the decrease of ENAC- 偽 and Na ~ -K- ATPase- 偽 _ 1 mRNA for 4 h (P 0.037%, P 0.046%, respectively). (3) compared with the control group, the mRNA expression of ENaC- 偽, 尾 -Na ~ -K ~ -ATPase- 偽 _ 1, 尾 _ 1 in LPS group and the expression of ENAC- 偽 -K ~ -ATPase- 偽 _ 1 protein in LPS group were significantly decreased, but the mRNA expression of ENAC- 緯 -CNG1- 偽 and AQP3 were not significantly decreased in LPS group. Compared with LPS, PFC ~ LPS could significantly up-regulate the mRNA expression of ENAC- 偽, 緯 -Na ~ -K ~ -ATPase- 偽 _ 1, 尾 _ 1 and CNG1- 偽. The protein expression of ENAC- 偽 -Na ~ -K ~ -ATPase- 偽 _ 1 was upregulated significantly. Compared with LPS, PFC ~ LPS could significantly upregulate the activity of Na ~ -K ~ -ATPase for 4 h. Conclusion 1.10ug/ml can induce the production of proinflammatory cytokines such as IL-1 尾 -IL-6 and TNF- 偽 in A549 cells, and make alveolar fluid clear ENaC- 偽, 尾 -Na ~ -K ~ -ATPase- 偽 1, 尾 1 mRNA expression and decrease the expression of ENAC- 偽 Na ~ -K ~ -Pase- 偽 1 protein in A549 cells at 6 h, indicating that the ALI cell model is successful. And can be used in Ali alveolar fluid clearance of related cells. 2. PFC could directly increase the expression of ENaC- 緯 and CNG1 偽 mRNA and protein of ENAC- 偽 and Na-K- ATPase- 偽 in alveolar fluid scavenging channels of normal A549 cells. 3. PFC may increase the expression of ENaC- 偽, 緯 -Na ~ -K ~ -ATPase- 偽 _ 1, 尾 _ 1 and CNG1- 偽 mRNA and the protein expression of ENAC- 偽 and Na ~ -K ~ -ATPase- 偽 _ 1, and enhance the activity of Na ~ -K ~ -ATPase enzyme in alveolar epithelial fluid clearance by increasing alveolar fluid scavenging channels, so as to reduce the injury of LPS to alveolar epithelial fluid clearance.
【學位授予單位】：中國人民解放軍醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R563.8

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本文編號：2045420