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《南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院》 2013年

DAPT對肺成纖維細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化中Wnt信號通路影響研究

龔文穎  

【摘要】：目的： 研究γ-分泌酶抑制劑DAPT阻斷Notch信號通路后，Wnt信號通路中的wnt1、β-catenin及肌成纖維細(xì)胞標(biāo)志因子α-SMA的表達(dá)變化，探討Wnt/-catenin信號通路與Notch信號通路之間存在直接或間接的相互作用以及Wnt/-catenin信號通路在DAPT抑制肺成纖維細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化中的作用表達(dá)。 方法： （1）從出生2-3天SD大鼠的幼鼠中取得肺組織，采用胰酶消化法分離培養(yǎng)出肺成纖維細(xì)胞，并使用波形蛋白（Vimentin）免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測培養(yǎng)至第三代肺成纖維細(xì)胞的純度；（2）予無血清的DMEM培養(yǎng)基同步培養(yǎng)細(xì)胞24h，并將其分為對照組、TGF-β1組、TGF-β1+DAPT組；（3）分別在TGF-β1組和TGF-β1+DAPT組中加入5ng/ml TGF-β1誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化為肌成纖維細(xì)胞，并在TGF-β1+DAPT組中加入500nmol/L的DAPT抑制纖維細(xì)胞增殖，并作用于肺成纖維細(xì)胞24h，觀察其形態(tài)學(xué)改變；（4）分別采用RT-PCR法檢測α-SMA、wnt1及β-catenin的mRNA表達(dá)變化，Western blot法檢測β-catenin的蛋白表達(dá)變化；（5）采用SPASS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，兩樣本均數(shù)間比較采用t檢驗(yàn)，多樣本間均數(shù)比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。 結(jié)果： （1）Vimentin免疫細(xì)胞化學(xué)檢測：幾乎所有第三代細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)均可見棕黃色顆粒，證明使用胰酶消化至第三代細(xì)胞幾乎全為肺成纖維細(xì)胞；（2）α-SMAmRNA表達(dá)：對照組α-SMA mRNA值（0.3850.015）、TGF-β1組（0.615±0.025）、TGF-β1+DAPT組（0.3450.027），其中TGF-β1組α-SMA mRNA值較對照組和TGF-β1+DAPT組明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p0.05），但對照組較TGF-β1+DAPT組無明顯差異，即差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p0.05）；（3）wnt1mRNA值表達(dá)：對照組wnt1mRNA值（0.233±0.005）、TGF-β1組（0.257±0.010）、TGF-β1+DAPT組（0.209±0.016），可知TGF-β1組wnt1mRNA值較對照組和TGF-β1+DAPT組顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p0.05）；（4）β-catenin mRNA和蛋白表達(dá)：對照組β-catenin mRNA和蛋白相對吸光光度值（0.984±0.031和0.352±0.023）、TGF-β1組（1.248±0.021和0.431±0.014）、TGF-β1+DAPT組（0.895±0.056和0.102±0.024），可見TGF-β1組較對照組和TGF-β1+DAPT組明顯升高，，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p0.05）。 結(jié)論： （1）TGF-β1可誘導(dǎo)肺成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化為肌成纖維細(xì)胞，在轉(zhuǎn)化過程中α-SMA、β-catenin、wnt1表達(dá)增高；（2）DAPT阻斷Notch信號通路后，影響了成纖維細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化中Wnt/β-catenin信號通路，下調(diào)α-SMA、β-catenin、wnt1的mRNA及蛋白表達(dá)；（3）Wnt/β-catenin信號通路與Notch信號通路之間可能存在相互關(guān)系。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R563
【目錄】：

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本文編號：203352