本文關(guān)鍵詞：慢性電刺激對成肌分化的C2C12細(xì)胞肌型轉(zhuǎn)換的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《第三軍醫(yī)大學(xué)》 2012年

慢性電刺激對成肌分化的C2C12細(xì)胞肌型轉(zhuǎn)換的影響

歐娜  

【摘要】：【背景和目的】 阻塞型睡眠呼吸暫停綜合征(obstructive sleep apnea-hypopnea syndrome, OSAHS)是呼吸科的常見病、多發(fā)病，其特點(diǎn)為睡眠期間反復(fù)發(fā)生上氣道阻塞并引起呼吸暫停。表現(xiàn)為口鼻腔氣流停止而胸腹呼吸動作尚存在。是一種累及多系統(tǒng)并造成多器官損害的睡眠呼吸疾病。有人提出假說，認(rèn)為OSAHS主要由于上呼吸道橫紋肌適應(yīng)性下降，在非清醒狀態(tài)下(如睡眠)不能保持呼吸道的開放。目前認(rèn)為舌根松弛、肥厚或者舌體肥厚導(dǎo)致睡眠期間舌后墜是OSAHS的常見病因之一。頦舌肌是最重要的上氣道擴(kuò)張肌，，其正常收縮使舌體前移，阻止咽腔縮小并對抗氣流阻力，維持氣道通暢。據(jù)臨床和基礎(chǔ)研究證實(shí)，頦舌肌功能異�？蓪�(dǎo)致上氣道陷閉，并且是引發(fā)OSAHS的最主要原因之一，因此，改善頦舌肌功能是有效、合理治療OSAHS的關(guān)鍵所在。 骨骼肌可塑性強(qiáng)，多種外界刺激可致其肌纖維構(gòu)成及其功能發(fā)生轉(zhuǎn)變已是不爭的事實(shí)，而模仿通常用來支配慢收縮肌的神經(jīng)沖動方式發(fā)展而來的慢性低頻電刺激(Chronic low frequency electrical stimulation, CLFS)就是有效手段之一，我們前期的研究發(fā)現(xiàn)在慢性電刺激后，低壓缺氧兔頦舌肌的肌球蛋白重鏈(myosin heavychain,MHC)“由快向慢”轉(zhuǎn)變(MHC由II型向I型轉(zhuǎn)變)，這種轉(zhuǎn)變在低頻復(fù)合生理頻率的電刺激時變化趨勢非常顯著。我們進(jìn)一步的研究表明，CESLPF誘導(dǎo)慢性低壓缺氧兔頦舌肌肌球蛋白重鏈由MHC IIb型向MHC IIa和MHC I型轉(zhuǎn)變，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(SR) Ca~(2+)的攝取-釋放功能顯著增強(qiáng)，這種變化在超低頻復(fù)合生理頻率刺激組的變化更加顯著。目前變頻電刺激引起的骨骼肌的肌纖維類型轉(zhuǎn)變機(jī)制尚不明確。鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶(CaN)和Ca~(2+)/鈣調(diào)蛋白依賴的蛋白激酶(CaMK)在骨骼肌肌纖維類型轉(zhuǎn)變通路中起重要作用，但慢性變頻電刺激所致MHC肌型轉(zhuǎn)換是否與此有關(guān)尚未見詳細(xì)報(bào)道。 因此，本研究以小鼠骨骼肌成肌細(xì)胞系C2C12細(xì)胞成肌分化為模型，研究CaN在MHC類型重構(gòu)中的作用，探討慢性變頻電刺激應(yīng)用于臨床治療OSAHS的可能機(jī)制。 【研究方法】 一、建立C2C12細(xì)胞成肌分化模型 1.成肌細(xì)胞C2C12細(xì)胞系在含10%胎牛血清的DMEM增殖培養(yǎng)液(growthmedium, GM)中擴(kuò)增培養(yǎng)； 2.待C2C12細(xì)胞生長至70%～80%融合時，改用含2%馬血清的DMEM分化培養(yǎng)液(differentiation medium, DM)誘導(dǎo)C2C12細(xì)胞分化。細(xì)胞培養(yǎng)于37℃，5%CO2，飽和濕度細(xì)胞培養(yǎng)箱中。 二、C2C12肌球蛋白重鏈MHC各亞型肌纖維比例的鑒定 C2C12肌細(xì)胞模型構(gòu)建成功后，采用請PCR和Western-blot分別檢測C2C12細(xì)胞MHC亞型的mRNA和蛋白的表達(dá)。 三、體外低頻復(fù)合生理頻率模型的建立 我們采用自制變頻電刺激儀建立體外低頻復(fù)合生理頻率模型，將經(jīng)馬血清誘導(dǎo)分化的C2C12成肌細(xì)胞分為3組，分別為分化對照組、KN93(6μMol)組和CsA(8μMol)組，電刺激的頻率采用(10+40Hz)進(jìn)行刺激，每天刺激1.5h，共刺激2天。 四、低頻及低頻復(fù)合生理頻率對C2C12MHC亞型表達(dá)的影響 1.采用半定量反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(Reverse ranscription-polymerase chainreaction，RT-PCR)分析各組C2C12MHC各亞型mRNA表達(dá)的變化 2.采用Western印跡法分析各組兔頦舌肌MHC各亞型蛋白表達(dá)的變化 五、鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶活性的檢測 對鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶活性的檢測采用比色法進(jìn)行。檢測方法按照CaN活性比色法定量檢測試劑盒說明書進(jìn)行。 【研究結(jié)果】 1.成肌細(xì)胞C2C12經(jīng)過誘導(dǎo)分化后出現(xiàn)肌管，細(xì)胞分化好，說明我們建立的成肌分化模型成功。 2.RT-PCR和Western-blot檢測結(jié)果顯示：分化對照組MHCⅠ型和MHCⅡ型均有表達(dá)，KN93及CSA組MHCⅠ型明顯被抑制。 3. RT-PCR檢測結(jié)果顯示，低頻及低頻復(fù)合生理頻率電刺激后,10Hz電刺激時，CsA組和KN93組細(xì)胞MHC I的mRNA表達(dá)均有顯著降低(P0.05)，以CsA組MHCI的表達(dá)降低最為明顯；當(dāng)采用復(fù)合生理頻率刺激時，CsA和KN93對MHC I表達(dá)的抑制作用被完全逆轉(zhuǎn)，與正常對照組相比無顯著差異(P0.05) 4.Western-blot檢測結(jié)果顯示：抑制劑KN93和CsA處理后，MHC I的表達(dá)顯著降低，MHC IIb顯著增加；CsA組經(jīng)低頻復(fù)合生理頻率電刺激可以抑制MHC IIb的表達(dá)，但對MHC I的提升不明顯，該結(jié)果與PCR檢測結(jié)果一致。 5. CsA可以顯著抑制CaN的酶活性。在C2C12細(xì)胞經(jīng)復(fù)合生理頻率刺激后，CaN的活性有所提高，但仍低于對照組(P0.05)。 【全文結(jié)論】 1.成肌細(xì)胞C2C12可以分化成肌管,是體外研究骨骼肌成肌細(xì)胞增殖、分化和功能理想的研究模型； 2.KN93及CsA兩種抑制劑可以抑制MHCI型的表達(dá),這種現(xiàn)象對以后研究成肌細(xì)胞的分化及轉(zhuǎn)型是有幫助的； 3.低頻復(fù)合生理頻率電刺激可以逆轉(zhuǎn)CsA及KN93對MHCI型的抑制作用。這種變化可能緣于慢性電刺激所致的肌纖維類型轉(zhuǎn)變及其相應(yīng)MHC亞型合成改變； 4.低頻復(fù)合生理頻率電刺激能夠部分逆轉(zhuǎn)CsA抑制CaN活性之后導(dǎo)致的C2C12骨骼肌細(xì)胞內(nèi)肌球蛋白的類型改變，同時CESLPF還能增強(qiáng)C2C12肌細(xì)胞內(nèi)CaN的活性； 5.低頻復(fù)合生理頻率慢性電刺激有望成為一種針對OSAHS的新的治療手段，但在臨床上的具體應(yīng)用還有待進(jìn)一步研究。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R56
【目錄】：

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【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 安寧;;骨骼肌纖維類型與遺傳和運(yùn)動訓(xùn)練關(guān)系研究狀況[J];搏擊(體育論壇);2011年11期

2 張妮;劉熙;劉剛;;低頻復(fù)合生理頻率電刺激對慢性低壓缺氧兔頦舌肌肌球蛋白重鏈表達(dá)的影響[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2010年13期

3 朱道立;;骨骼肌肌纖維類型的轉(zhuǎn)變及其調(diào)控機(jī)制[J];生物學(xué)教學(xué);2009年10期

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前7條

1 劉熙;劉剛;張妮;歐娜;張鵬;;LPCES對慢性低壓缺氧兔頦舌肌肌球蛋白重鏈和SR Ca~(2+)攝取-釋放動力學(xué)的影響[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2011年07期

2 歐娜;劉剛;姜帆;鄒仲敏;劉熙;;慢性電刺激對成肌分化的C2C12細(xì)胞肌型轉(zhuǎn)換的影響[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2012年08期

3 張勇;孫璀;;鈣調(diào)磷酸酶-活化T細(xì)胞核因子信號途徑在骨骼肌細(xì)胞生長和發(fā)育中生理作用的研究進(jìn)展[J];動物營養(yǎng)學(xué)報(bào);2011年04期

4 朱赟婕;陳暉;;牙齦卟啉單胞菌與冠心病之間的關(guān)系[J];國際口腔醫(yī)學(xué)雜志;2012年06期

5 趙秀峰;徐曉陽;閆旭潔;;肌酸補(bǔ)充和電刺激對C_2C_(12)肌管糖攝入的效應(yīng)及機(jī)制研究[J];北京體育大學(xué)學(xué)報(bào);2013年02期

6 張勇;孫璀;鄧科;朱宇旌;崔巖;陶亮;邵彩梅;;肥育豬背最長肌中CaN、NFAT和CaM蛋白表達(dá)量與剪切力的相關(guān)性研究[J];沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào);2011年06期

7 李文霞;沈小梅;陳俠;張巨艷;陰文杰;;鈣調(diào)磷酸酶在老齡大鼠心肌缺血再灌注損傷所致細(xì)胞凋亡中的作用[J];中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志;2009年09期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 郭曉華;Moesin蛋白磷酸化在晚期糖基化終產(chǎn)物介導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞反應(yīng)中的作用及機(jī)制[D];南方醫(yī)科大學(xué);2009年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前9條

1 余淑英;東亞三角渦蟲肌球蛋白必需輕鏈（DjElc）基因的表達(dá)及功能分析[D];山東理工大學(xué);2011年

2 劉熙;超低頻及超低頻復(fù)合生理頻率慢性電刺激對低壓缺氧兔頦舌肌結(jié)構(gòu)和功能影響的研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2011年

3 李文霞;鈣調(diào)磷酸酶在老齡大鼠心肌缺血再灌注中調(diào)控P38MAPK信號通路的機(jī)制研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2009年

4 張艷艷;不同運(yùn)動負(fù)荷下腓腸肌和比目魚肌肌聲特性的研究[D];陜西師范大學(xué);2010年

5 張妮;低頻復(fù)合生理頻率慢性電刺激對阻塞性睡眠呼吸暫停兔頦舌肌結(jié)構(gòu)和功能影響的研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2010年

6 丁婷婷;偏側(cè)咀嚼對大鼠咬肌PGC-1α表達(dá)及細(xì)胞凋亡影響的研究[D];山東大學(xué);2012年

7 葉偉峰;鉛暴露大鼠腦區(qū)鈣離子/鈣調(diào)素關(guān)聯(lián)信號通路及藥物調(diào)控研究[D];浙江大學(xué);2012年

8 周永洲;肌音匹配方法的肌肉疲勞研究[D];陜西師范大學(xué);2013年

9 張貝貝;一個大白豬群肌纖維性狀的測定及其與候選基因SNP的關(guān)聯(lián)分析[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

【二級參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 李江華;劉承宜;;骨骼肌纖維類型在不同的條件下的轉(zhuǎn)化研究[J];首都體育學(xué)院學(xué)報(bào);2008年02期

2 趙黎明;李兵;修清玉;沈俊;張慧;劉秋紅;;持續(xù)氣道正壓通氣對阻塞性睡眠呼吸暫停綜合征小型豬血漿NO、ET濃度及心肌結(jié)構(gòu)的影響[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2009年06期

3 鄧永紅;李軍梅;劉剛;;低頻復(fù)合生理頻率慢性電刺激對肺氣腫兔膈肌力學(xué)特性的影響[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2008年06期

4 李東穎;任文君;;肌球蛋白結(jié)構(gòu)和功能變化與運(yùn)動的影響[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2007年32期

5 邴宇紅;邵宏偉;洪麗梅;;阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征發(fā)生慢性高碳酸血癥的相關(guān)因素探討[J];中國冶金工業(yè)醫(yī)學(xué)雜志;2008年03期

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 高曉明,張昕,顧蘊(yùn)輝;不同頻率電刺激延髓中縫核對血壓的影響[J];北京大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);1987年01期

2 鄭煜;徐美麗;楊世若;;電刺激家兔“人中”穴區(qū)對膈神經(jīng)放電的影響及其機(jī)制的初步探討[J];四川生理科學(xué)雜志;1987年01期

3 ;主題索引(第八卷)[J];國外醫(yī)學(xué).物理醫(yī)學(xué)與康復(fù)學(xué)分冊;1988年04期

4 程國璋;王承棓;;胃腸電起搏研究進(jìn)展[J];國際骨科學(xué)雜志;1988年03期

5 陳宗偉;卿德華;鄭煜;;家兔臂旁內(nèi)側(cè)核在“人中”穴呼吸效應(yīng)中的作用[J];四川生理科學(xué)雜志;1989年01期

6 廉南,曾曉蓉,曹均告,嚴(yán)清明,白光興;耳穴肝區(qū)電刺激對肝癌鎮(zhèn)痛作用的臨床觀察[J];四川中醫(yī);1994年02期

7 陳履平，韓祖斌，楊秀珍，王宏偉，劉振田，宋誼;不同振動頻率對實(shí)驗(yàn)性骨折愈合的影響[J];中華外科雜志;1994年04期

8 唐正榮;高壓脈沖電刺激增強(qiáng)肌力的效果[J];國外醫(yī)學(xué).物理醫(yī)學(xué)與康復(fù)學(xué)分冊;1994年03期

9 呂受卿;中風(fēng)病人痛相關(guān)和電刺激體感誘發(fā)電位[J];國外醫(yī)學(xué).神經(jīng)病學(xué)神經(jīng)外科學(xué)分冊;1996年02期

10 任玉玲,郭懷宸,白靜萍,宋新光;電刺激與磁刺激運(yùn)動誘發(fā)電位的比較研究[J];臨床腦電學(xué)雜志;1996年04期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 林治鉞;梁化樓;Richard W.Mocallum;;利用子波變換法消除胃電記錄中的電刺激干擾[A];中華醫(yī)學(xué)會2001年全國胃電圖和胃腸動力研討會論文摘要集[C];2001年

2 張錦華;蔣紅;王謹(jǐn);江云;胡興越;;吉蘭-巴雷綜合征患者F波檢測中的A波[A];2006年浙江省神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2006年

3 姚一;王逢鵬;方贇;張小斌;劉敏;江建東;黃德志;劉小偉;譚啟富;沈七襄;高鵬;蔡鐵良;;術(shù)中電刺激腦功能識別定位在癲癇手術(shù)的應(yīng)用[A];中國醫(yī)師協(xié)會神經(jīng)外科醫(yī)師分會第六屆全國代表大會論文匯編[C];2011年

4 蔡躍新;伍少玲;燕鐵斌;;透皮與經(jīng)皮穴位電刺激對健康人體感誘發(fā)電位的影響[A];廣東省康復(fù)醫(yī)學(xué)會、廣東社會學(xué)會健康研究專業(yè)委員會2007年學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2007年

5 龔玲;伍國鋒;趙萍;杜立;趙晶;;低頻電刺激丘腦底核對杏仁核點(diǎn)燃大鼠模型海馬GLu和GABA的影響[A];第十一屆全國神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2008年

6 孫磊;戴玉田;黃興;孫則禹;;神經(jīng)斷端電刺激對大鼠陰莖海綿體神經(jīng)再生影響的研究[A];21世紀(jì)男科學(xué)——中華醫(yī)學(xué)會第五次全國男科學(xué)學(xué)術(shù)會議論文集[C];2004年

7 毛玉瑢;黃東鋒;徐光青;劉鵬;許燕玲;江澤;;神經(jīng)肌肉電刺激在腦卒中偏癱肢體中的分期治療[A];中國康復(fù)醫(yī)學(xué)會第九屆全國腦血管病康復(fù)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2005年

8 王斌;;經(jīng)皮顱電刺激對疼痛和β-內(nèi)啡肽的即刻影響——標(biāo)準(zhǔn)安慰-對照研究[A];中國康復(fù)醫(yī)學(xué)會第五屆全國康復(fù)治療學(xué)術(shù)會議論文集[C];2006年

9 郭蘇梅;;電刺激小腦頂核治療頸性眩暈的臨床研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第九次全國物理醫(yī)學(xué)與康復(fù)學(xué)學(xué)術(shù)會議論文集[C];2007年

10 鄭文武;張曉剛;李韞;何全;;小腦頂核電刺激對犬心房顫動防治作用的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會心血管病學(xué)分會第十次全國心血管病學(xué)術(shù)會議匯編[C];2008年

中國重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 記者 李學(xué)梅;[N];新華每日電訊;2008年

2 蘇州市農(nóng)科所 高建峰;[N];江蘇科技報(bào);2001年

3 艾平編譯;[N];大眾科技報(bào);2001年

4 實(shí)習(xí)生 涂玨東 通訊員　童心;[N];科技日報(bào);2006年

5 仇玉青;[N];健康報(bào);2003年

6 姚向陽;[N];中國醫(yī)藥報(bào);2004年

7 擷華;[N];醫(yī)藥養(yǎng)生保健報(bào);2007年

8 吳玉華;[N];健康報(bào);2006年

9 健康時報(bào)記者 趙晴晴;[N];健康時報(bào);2010年

10 胥曉琦;[N];中國中醫(yī)藥報(bào);2003年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 張潤峰;FNS對MI大鼠HRV和心臟神經(jīng)重構(gòu)的作用及部分機(jī)制探討[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2004年

2 劉愛國;電刺激對豚鼠聽神經(jīng)興奮性影響[D];復(fù)旦大學(xué);2003年

3 申震;慢傳輸型便秘犬行電刺激及小腸、結(jié)腸吻合術(shù)治療的實(shí)驗(yàn)研究[D];吉林大學(xué);2008年

4 李江;延遲性、多次經(jīng)鞏膜電刺激對軸突橫斷的視網(wǎng)膜節(jié)細(xì)胞的神經(jīng)保護(hù)作用[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2009年

5 李龍坤;尿路功能障礙的電刺激研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2002年

6 姜葦;子宮肌電信號的分析與子宮收縮機(jī)理的研究[D];天津大學(xué);2004年

7 王爽;低頻率電刺激深部腦區(qū)對杏仁核電點(diǎn)燃癲癇的作用[D];浙江大學(xué);2008年

8 王文波;大壁虎運(yùn)動人工誘導(dǎo)的基礎(chǔ)研究[D];南京航空航天大學(xué);2008年

9 李翠萍;胃電刺激對ICC表型及ICC-ENS突觸連接可塑性的影響[D];華中科技大學(xué);2008年

10 朱寧喜;動眼神經(jīng)損傷后神經(jīng)再生和電刺激對其作用的研究[D];山東大學(xué);2009年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 馬舜堯;電刺激經(jīng)絡(luò)導(dǎo)通法及刺激裝置的研究[D];天津大學(xué);2004年

2 趙民;復(fù)合物理因子促周圍神經(jīng)再生的實(shí)驗(yàn)研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2005年

3 尉賢林;柔性督脈儀的研制[D];浙江大學(xué);2006年

4 楊文進(jìn);伏隔核電刺激對嗎啡誘導(dǎo)的大鼠條件性位置偏愛行為形成的影響[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2006年

5 蔣天裕;踝關(guān)節(jié)主動運(yùn)動及腓總神經(jīng)電刺激的腦功能成像研究[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2003年

6 周繼宏;間接電刺激小腦頂核區(qū)對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷的影響[D];中國醫(yī)科大學(xué);2004年

7 姚冰;電刺激大鼠韁核引起的呼吸效應(yīng)[D];吉林大學(xué);2004年

8 趙慶華;柿蒂提取物抑制大鼠離體膈肌收縮的作用機(jī)制及其有效部位的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2005年

9 聶惠貞;電刺激大鼠中腦腹側(cè)被蓋區(qū)建立精神分裂癥動物模型及其生物學(xué)機(jī)制研究[D];青島大學(xué);2005年

10 胡杰;踝關(guān)節(jié)主動運(yùn)動與腓總神經(jīng)電刺激對中樞神經(jīng)的影響[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2004年

  本文關(guān)鍵詞：慢性電刺激對成肌分化的C2C12細(xì)胞肌型轉(zhuǎn)換的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：202489