本文選題：蛻皮甾酮 + 脂多糖��； 參考：《南方醫(yī)科大學(xué)》2013年碩士論文

【摘要】：背景和目的 急性肺損傷的死亡率極高,嚴(yán)重危害人類的健康,尋找對(duì)急性肺損傷有療效的藥物,降低病死率,是目前國(guó)內(nèi)外學(xué)者共同關(guān)心的課題。急性肺損傷是由嚴(yán)重感染、休克、創(chuàng)傷等因素引起的以炎癥反應(yīng)和肺泡毛細(xì)血管損傷為主要病理改變,臨床表現(xiàn)為進(jìn)行性的呼吸困難和頑固性低氧血癥。內(nèi)毒素是首要致病因素,而Toll樣受體4(toll-like receptor4, TLR4)在機(jī)體抗感染的免疫炎癥反應(yīng)中扮演著重要角色,是內(nèi)毒素信號(hào)向細(xì)胞內(nèi)傳導(dǎo)的“門戶蛋白”,激活NF-κB,進(jìn)而誘導(dǎo)IL-1、IL-6、IL-8、TNF-a等多種細(xì)胞因子和化學(xué)因子的生成與釋放,引發(fā)以中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)、微血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷與蛋白液體滲漏為特征的失控的炎癥反應(yīng)。而機(jī)體在引發(fā)SIR的同時(shí),又伴發(fā)了代償性抗炎反應(yīng)(compensatory anti-inflammatory response, CAR),釋放內(nèi)源性抗炎介質(zhì)如IL-10、IL-11、IL-13、TGF-β等。如果SIR和CAR處于動(dòng)態(tài)平衡,自穩(wěn)態(tài)則得以維持,利于ALI/ARDS'恢復(fù)。蛻皮甾酮(ecdysterone, EDS)是在動(dòng)植物中提取的單體成分,目前所知其作用主要有：1)、促進(jìn)核酸及蛋白質(zhì)的合成;2)、調(diào)節(jié)糖代謝：3)、調(diào)節(jié)脂代謝：4)、調(diào)節(jié)基因表達(dá);5)、改善免疫功能：6)、抗氧化作用;7)、促進(jìn)缺血區(qū)血管的生成和側(cè)支循環(huán)的建立;8)、促進(jìn)多種細(xì)胞增殖的作用等。 本課題組前期研究證明蛻皮街酮能有效減輕脂多糖引起的肺損傷,但機(jī)制尚不清楚,為此,本課題擬以組織細(xì)胞水平和分子水平對(duì)脂多糖致急性肺損傷的保護(hù)作用機(jī)制研究。旨在證實(shí)EDS的生物學(xué)抗炎作用機(jī)制,對(duì)炎癥信號(hào)通路的干預(yù)作用,闡明EDS保護(hù)ALI的機(jī)理,為臨床應(yīng)用EDS治療內(nèi)毒性急性肺損傷提供更堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。 方法 1.采用腹腔注射LPS的方法復(fù)制大鼠內(nèi)毒性ALI模型,按隨機(jī)原則將120只wister大鼠分為空白對(duì)照組(control組)、ALI模型組(LPS組)和蛻皮甾酮低劑量組(LPS+EDS20mg/kg組)、蛻皮甾酮中劑量組(LPS+EDS30mg/kg組)、蛻皮甾酮高劑量組(LPS+EDS40mg/kg組)。各組根據(jù)注射脂多糖后觀察時(shí)間不同再分為2、4、24h共3個(gè)亞組,每組8只。大鼠腹腔注射3%戊巴比妥鈉(30mg/kg)待麻醉后,除control組外,其余各組大鼠均經(jīng)腹腔注射8mg/kg的脂多糖復(fù)制急性肺損傷模型。建模后2h、4h和24h,采血和采取肺組織標(biāo)本備用。 2、對(duì)各組大鼠的Pa02、肺體指數(shù)、肺通透指數(shù)、BALF中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)進(jìn)行觀測(cè),采用電子顯微鏡觀察肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)變化,實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR和Western Blot分別檢測(cè)肺組織IL-10mRNA、TLR4mRNA和TLR4蛋白的表達(dá),ABC-ELISA法測(cè)定血清TNF-α、IL-10含量的變化和以及肺組織SOD活性變化。 結(jié)果 1、與LPS組比較,LPS+EDS不同劑量治療組在同一時(shí)間點(diǎn)均不同程度抑制肺體指數(shù)、肺通透指數(shù)(LPI)、BALF中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)的增加和Pa02的下降(P0.05)。 2、在注射脂多糖24h后,LPS+EDS高劑量組見(jiàn)肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞相對(duì)不規(guī)則,細(xì)胞變性,少數(shù)崩解,表面微絨毛減少,胞漿內(nèi)線粒體腫脹,板層小體排空、空泡化程度較ALI模型組明顯輕。 3、LPS+EDS不同劑量治療組在2h、4h、24h各時(shí)間點(diǎn)IL-10mRNA表達(dá)與LPS組比較均明顯升高(P0.05)。LPS+EDS各治療組間在同一時(shí)間點(diǎn)IL-10mRNA的表達(dá)均有明顯差異,其中于4h、24h時(shí)間點(diǎn)IL-10mRNA的表達(dá)呈遞增趨勢(shì)(低劑量組中劑量組高劑量組),2h時(shí)間點(diǎn)高劑量組IL-10mRNA的表達(dá)分別顯著高于中、低劑量組(P0.05)。 4、Western免疫印跡法檢測(cè)顯示,與control組比較,LPS組在各時(shí)間點(diǎn)的TLR4蛋白表達(dá)均明顯增高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P0.05),其中4h表達(dá)最高。使用不同劑量EDS作用于建模后的大鼠,2、4、24h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)分別與LPS組比較,各治療組均可顯著降低TLR4蛋白的表達(dá)(均P0.05)。經(jīng)SNK-q檢驗(yàn)提示,各時(shí)間點(diǎn)LPS+EDS不同劑量治療組組間差異,均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,2h時(shí)間點(diǎn)TLR4蛋白的表達(dá)呈遞減趨勢(shì)(低劑量組中劑量組高劑量組),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P0.05),4h時(shí)間點(diǎn)中、高劑量組分別與低劑量組比較TLR4蛋白的表達(dá)顯著性降低(P0.05),24h時(shí)間點(diǎn)高劑量組與低劑量組比較有顯著性差異(P0.05),簡(jiǎn)言之,EDS在一定的劑量范圍內(nèi)可顯著降低TLR4蛋白表達(dá),并呈劑量正相關(guān)性 5、LPS+EDS不同劑量治療組在2、4、24h各時(shí)間點(diǎn)TLR4mRNA表達(dá)與LPS組分別比較均明顯降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P0.05)。LPS+EDS各治療組在同一時(shí)間點(diǎn)組間TLR4mRNA的表達(dá)差異,均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P0.05),其中于4h時(shí)間點(diǎn)TLR4mRNA的、表達(dá)呈遞減趨勢(shì)(低劑量組中劑量組高劑量組),三組間兩兩比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；2h時(shí)間點(diǎn)中、高劑量組分別與低劑量組比較TLR4mRNA的表達(dá)有顯著性降低(P0.05)；24h時(shí)間點(diǎn)高劑量組與低劑量組比較有明顯差異(P0.05)。 6、ELISA結(jié)果顯示,與LPS組比較,LPS+EDS各治療組在不同時(shí)間點(diǎn)均可顯著升高血清IL-10的含量(P0.05)。與LPS組比較,LPS+EDS各治療組在不同時(shí)間點(diǎn)均可顯著降低血清TNF-α的含量和顯著增加肺組織SOD活性(均P0.05)。 結(jié)論 1、蛻皮甾酮尾靜脈注射對(duì)LPS誘導(dǎo)的ALI具有保護(hù)作用,改善肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞的損傷,上調(diào)肺組織IL-10mRNA,下調(diào)炎癥通路中TLR4蛋白和mRNA的表達(dá),從而抑制肺部局部炎癥反應(yīng)；其中EDS在一定的劑量范圍內(nèi)對(duì)TLR4蛋白和mRNA表達(dá)的影響,呈劑量正相關(guān)性 2、減輕血清中TNF-a水平和增加IL-10水平等全身炎癥因子和抗炎因子的表達(dá),調(diào)節(jié)SIR和CAR的動(dòng)態(tài)平衡,間接抑制肺部炎癥反應(yīng)的過(guò)度表達(dá)。
[Abstract]:Background and Purpose

The mortality of acute lung injury is very high , which seriously endangers the health of human beings . It is a subject of common concern to scholars at home and abroad . Acute lung injury is the main pathological change caused by the factors such as severe infection , shock , wound and so on . The clinical manifestation is progressive dyspnea and refractory hypoxia . The endotoxin is the primary pathogenic factor , and Toll - like receptor4 ( TLR ) plays an important role in the immune inflammatory response of the body ' s anti - infection , and it is the " portal protein " that the endotoxin signal conducts in the cell . ( 1 ) To promote the synthesis of IL - 10 , IL - 11 , IL - 13 and TGF - 尾 .

In this study , we prove that ecdysone can effectively reduce the lung injury induced by lipopolysaccharide , but the mechanism is not clear . To prove the mechanism of EDS ' biological anti - inflammatory action mechanism , the mechanism of EDS to protect ALI is demonstrated , which provides a more solid theoretical basis and experimental data for the clinical application of EDS in the treatment of acute lung injury .

method

1 . The rats were randomly divided into two groups : control group , ALI model group ( LPS group ) and ecdysterone ( LPS + EDS20mg / kg group ) , ecdysterone group ( LPS + EDS30mg / kg group ) and ecdysterone high dose group ( LPS + EDS40mg / kg group ) .

2 . The changes of serum TNF - 偽 , IL - 10 and the changes of serum TNF - 偽 and IL - 10 were measured by means of real - time fluorescence quantitative RT - PCR and Western Blot . The changes of serum TNF - 偽 and IL - 10 and the changes of SOD activity in lung tissues were measured by means of real - time RT - PCR and Western Blot .

Results

1 . Compared with LPS group , LPS + EDS treatment group inhibited lung volume index , lung permeability index ( lpi ) , neutrophil count in BALF and decreased Pa02 at the same time point ( P0.05 ) .

2 . After 24 hours of LPS injection , the LPS + EDS high dose group showed that alveolar type 鈪，

本文編號(hào)：1918041