本文選題：蛻皮甾酮 + 脂多糖�。� 參考：《南方醫(yī)科大學》2013年碩士論文

【摘要】：背景和目的 急性肺損傷的死亡率極高,嚴重危害人類的健康,尋找對急性肺損傷有療效的藥物,降低病死率,是目前國內(nèi)外學者共同關心的課題。急性肺損傷是由嚴重感染、休克、創(chuàng)傷等因素引起的以炎癥反應和肺泡毛細血管損傷為主要病理改變,臨床表現(xiàn)為進行性的呼吸困難和頑固性低氧血癥。內(nèi)毒素是首要致病因素,而Toll樣受體4(toll-like receptor4, TLR4)在機體抗感染的免疫炎癥反應中扮演著重要角色,是內(nèi)毒素信號向細胞內(nèi)傳導的“門戶蛋白”,激活NF-κB,進而誘導IL-1、IL-6、IL-8、TNF-a等多種細胞因子和化學因子的生成與釋放,引發(fā)以中性粒細胞浸潤、微血管內(nèi)皮細胞損傷與蛋白液體滲漏為特征的失控的炎癥反應。而機體在引發(fā)SIR的同時,又伴發(fā)了代償性抗炎反應(compensatory anti-inflammatory response, CAR),釋放內(nèi)源性抗炎介質(zhì)如IL-10、IL-11、IL-13、TGF-β等。如果SIR和CAR處于動態(tài)平衡,自穩(wěn)態(tài)則得以維持,利于ALI/ARDS'恢復。蛻皮甾酮(ecdysterone, EDS)是在動植物中提取的單體成分,目前所知其作用主要有：1)、促進核酸及蛋白質(zhì)的合成;2)、調(diào)節(jié)糖代謝：3)、調(diào)節(jié)脂代謝：4)、調(diào)節(jié)基因表達;5)、改善免疫功能：6)、抗氧化作用;7)、促進缺血區(qū)血管的生成和側(cè)支循環(huán)的建立;8)、促進多種細胞增殖的作用等。 本課題組前期研究證明蛻皮街酮能有效減輕脂多糖引起的肺損傷,但機制尚不清楚,為此,本課題擬以組織細胞水平和分子水平對脂多糖致急性肺損傷的保護作用機制研究。旨在證實EDS的生物學抗炎作用機制,對炎癥信號通路的干預作用,闡明EDS保護ALI的機理,為臨床應用EDS治療內(nèi)毒性急性肺損傷提供更堅實的理論基礎和實驗數(shù)據(jù)。 方法 1.采用腹腔注射LPS的方法復制大鼠內(nèi)毒性ALI模型,按隨機原則將120只wister大鼠分為空白對照組(control組)、ALI模型組(LPS組)和蛻皮甾酮低劑量組(LPS+EDS20mg/kg組)、蛻皮甾酮中劑量組(LPS+EDS30mg/kg組)、蛻皮甾酮高劑量組(LPS+EDS40mg/kg組)。各組根據(jù)注射脂多糖后觀察時間不同再分為2、4、24h共3個亞組,每組8只。大鼠腹腔注射3%戊巴比妥鈉(30mg/kg)待麻醉后,除control組外,其余各組大鼠均經(jīng)腹腔注射8mg/kg的脂多糖復制急性肺損傷模型。建模后2h、4h和24h,采血和采取肺組織標本備用。 2、對各組大鼠的Pa02、肺體指數(shù)、肺通透指數(shù)、BALF中性粒細胞計數(shù)進行觀測,采用電子顯微鏡觀察肺泡Ⅱ型上皮細胞的超微結(jié)構(gòu)變化,實時熒光定量RT-PCR和Western Blot分別檢測肺組織IL-10mRNA、TLR4mRNA和TLR4蛋白的表達,ABC-ELISA法測定血清TNF-α、IL-10含量的變化和以及肺組織SOD活性變化。 結(jié)果 1、與LPS組比較,LPS+EDS不同劑量治療組在同一時間點均不同程度抑制肺體指數(shù)、肺通透指數(shù)(LPI)、BALF中性粒細胞計數(shù)的增加和Pa02的下降(P0.05)。 2、在注射脂多糖24h后,LPS+EDS高劑量組見肺泡Ⅱ型上皮細胞相對不規(guī)則,細胞變性,少數(shù)崩解,表面微絨毛減少,胞漿內(nèi)線粒體腫脹,板層小體排空、空泡化程度較ALI模型組明顯輕。 3、LPS+EDS不同劑量治療組在2h、4h、24h各時間點IL-10mRNA表達與LPS組比較均明顯升高(P0.05)。LPS+EDS各治療組間在同一時間點IL-10mRNA的表達均有明顯差異,其中于4h、24h時間點IL-10mRNA的表達呈遞增趨勢(低劑量組中劑量組高劑量組),2h時間點高劑量組IL-10mRNA的表達分別顯著高于中、低劑量組(P0.05)。 4、Western免疫印跡法檢測顯示,與control組比較,LPS組在各時間點的TLR4蛋白表達均明顯增高,差異有統(tǒng)計學意義(均P0.05),其中4h表達最高。使用不同劑量EDS作用于建模后的大鼠,2、4、24h三個時間點分別與LPS組比較,各治療組均可顯著降低TLR4蛋白的表達(均P0.05)。經(jīng)SNK-q檢驗提示,各時間點LPS+EDS不同劑量治療組組間差異,均有統(tǒng)計學意義,2h時間點TLR4蛋白的表達呈遞減趨勢(低劑量組中劑量組高劑量組),差異有統(tǒng)計學意義(均P0.05),4h時間點中、高劑量組分別與低劑量組比較TLR4蛋白的表達顯著性降低(P0.05),24h時間點高劑量組與低劑量組比較有顯著性差異(P0.05),簡言之,EDS在一定的劑量范圍內(nèi)可顯著降低TLR4蛋白表達,并呈劑量正相關性 5、LPS+EDS不同劑量治療組在2、4、24h各時間點TLR4mRNA表達與LPS組分別比較均明顯降低,差異有統(tǒng)計學意義(均P0.05)。LPS+EDS各治療組在同一時間點組間TLR4mRNA的表達差異,均有統(tǒng)計學意義(均P0.05),其中于4h時間點TLR4mRNA的、表達呈遞減趨勢(低劑量組中劑量組高劑量組),三組間兩兩比較,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05)；2h時間點中、高劑量組分別與低劑量組比較TLR4mRNA的表達有顯著性降低(P0.05)；24h時間點高劑量組與低劑量組比較有明顯差異(P0.05)。 6、ELISA結(jié)果顯示,與LPS組比較,LPS+EDS各治療組在不同時間點均可顯著升高血清IL-10的含量(P0.05)。與LPS組比較,LPS+EDS各治療組在不同時間點均可顯著降低血清TNF-α的含量和顯著增加肺組織SOD活性(均P0.05)。 結(jié)論 1、蛻皮甾酮尾靜脈注射對LPS誘導的ALI具有保護作用,改善肺泡Ⅱ型上皮細胞的損傷,上調(diào)肺組織IL-10mRNA,下調(diào)炎癥通路中TLR4蛋白和mRNA的表達,從而抑制肺部局部炎癥反應；其中EDS在一定的劑量范圍內(nèi)對TLR4蛋白和mRNA表達的影響,呈劑量正相關性 2、減輕血清中TNF-a水平和增加IL-10水平等全身炎癥因子和抗炎因子的表達,調(diào)節(jié)SIR和CAR的動態(tài)平衡,間接抑制肺部炎癥反應的過度表達。
[Abstract]:Background and Purpose

The mortality of acute lung injury is very high , which seriously endangers the health of human beings . It is a subject of common concern to scholars at home and abroad . Acute lung injury is the main pathological change caused by the factors such as severe infection , shock , wound and so on . The clinical manifestation is progressive dyspnea and refractory hypoxia . The endotoxin is the primary pathogenic factor , and Toll - like receptor4 ( TLR ) plays an important role in the immune inflammatory response of the body ' s anti - infection , and it is the " portal protein " that the endotoxin signal conducts in the cell . ( 1 ) To promote the synthesis of IL - 10 , IL - 11 , IL - 13 and TGF - 尾 .

In this study , we prove that ecdysone can effectively reduce the lung injury induced by lipopolysaccharide , but the mechanism is not clear . To prove the mechanism of EDS ' biological anti - inflammatory action mechanism , the mechanism of EDS to protect ALI is demonstrated , which provides a more solid theoretical basis and experimental data for the clinical application of EDS in the treatment of acute lung injury .

method

1 . The rats were randomly divided into two groups : control group , ALI model group ( LPS group ) and ecdysterone ( LPS + EDS20mg / kg group ) , ecdysterone group ( LPS + EDS30mg / kg group ) and ecdysterone high dose group ( LPS + EDS40mg / kg group ) .

2 . The changes of serum TNF - 偽 , IL - 10 and the changes of serum TNF - 偽 and IL - 10 were measured by means of real - time fluorescence quantitative RT - PCR and Western Blot . The changes of serum TNF - 偽 and IL - 10 and the changes of SOD activity in lung tissues were measured by means of real - time RT - PCR and Western Blot .

Results

1 . Compared with LPS group , LPS + EDS treatment group inhibited lung volume index , lung permeability index ( lpi ) , neutrophil count in BALF and decreased Pa02 at the same time point ( P0.05 ) .

2 . After 24 hours of LPS injection , the LPS + EDS high dose group showed that alveolar type 鈪，

本文編號：1918041