本文選題：G-MDSCs + 哮喘　； 參考：《南方醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：研究背景髓源抑制細(xì)胞(MDSCs)由不成熟巨噬細(xì)胞、粒細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞等髓系細(xì)胞組成,其對(duì)T細(xì)胞功能有很強(qiáng)抑制作用。MDSCs可分為兩種表型:粒細(xì)胞型(G-MDSCs)和單核細(xì)胞型(M-MDSCs),兩者在細(xì)胞增殖及免疫抑制功能機(jī)制上不盡相同。我們前期研究在哮喘動(dòng)物模型中發(fā)現(xiàn)MDSCs參與了哮喘發(fā)生與發(fā)展。在給哮喘小鼠過(guò)繼轉(zhuǎn)移脂多糖誘導(dǎo)的不同表型MDSCs發(fā)現(xiàn):G-MDSCs能減輕氣道炎癥。那么,G-MDSCs在哮喘急性期及臨床緩解期患者外周血分布情況如何?是否與哮喘氣道炎癥的發(fā)生有關(guān)?本研究在前期動(dòng)物實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上,擬進(jìn)一步探討其在哮喘患者外周血所占比例情況,為G-MDSCs作為哮喘急性發(fā)作臨床指標(biāo)做初步探索。近來(lái),MDSCs因可進(jìn)行體內(nèi)誘導(dǎo)、體外擴(kuò)增、自體和異體移植而日益成為免疫治療關(guān)注的熱點(diǎn),但體外誘導(dǎo)效率較低及較難獲得單一表型MDSCs大大限制其臨床應(yīng)用。課題組前期雖已成功用LPS體內(nèi)誘導(dǎo)MDSCs生成,但誘導(dǎo)成功后需進(jìn)一步分離提純,步驟復(fù)雜。如前所述,我們已經(jīng)探討G-MDSCs與哮喘小鼠氣道炎癥關(guān)系及其在哮喘患者外周血情況。那么,為了進(jìn)一步闡明其在哮喘中的作用,并用于哮喘等免疫性疾病的治療,建立高效G-MDSCs體外誘導(dǎo)體系值得研究。因此,本研究擬采用粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)體外定向誘導(dǎo)G-MDSCs,尋找體外誘導(dǎo)純化的最佳條件,同時(shí)探索誘導(dǎo)信號(hào)通路,為建立有效的G-MDSCs誘導(dǎo)體系及推進(jìn)其臨床應(yīng)用打下基礎(chǔ)。第一部分G-MDSCs在哮喘患者外周血水平觀察目的研究哮喘患者外周血MDSCs及其不同表型G-MDSCs和M-MDSCs所占比例情況。方法收集就診于南方醫(yī)科大學(xué)珠江醫(yī)院33例哮喘急性期患者,16例緩解期哮喘患者和15例健康對(duì)照者外周靜脈血5ml;將血標(biāo)本處理后用抗體標(biāo)記,流式細(xì)胞儀檢測(cè)MDSCs及其不同表型所占比例。結(jié)果1.三組 FeNO、PEF、MMEF%pred、MEF75%pred 和 MEF50%pred 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P0.05)。2.MDSCs占外周血單個(gè)核細(xì)胞比例在急性期哮喘組中最高,三組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.003),而G-MDSCs及M-MDSCs所占比例無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均P0.05)。3.各組G-MDSCs所占比例均高于M-MDSCs,且差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P0.05)。結(jié)論MDSCs占外周血單核細(xì)胞比例在急性期哮喘組最高,而其不同表型并無(wú)差異。G-MDSCs在哮喘患者或是正常人中均為主要表型。第二部分G-MDSCs體外誘導(dǎo)分化條件及免疫抑制功能研究目的探討G-CSF體外誘導(dǎo)骨髓細(xì)胞定向分化成G-MDSCs適宜條件及其對(duì)T細(xì)胞免疫抑制功能研究。方法于BALB/c小鼠無(wú)菌獲取骨髓細(xì)胞,利用GM-CSF聯(lián)合不同濃度梯度G-CSF,加或不加脂多糖(LPS)體外刺激骨髓細(xì)胞,在不同時(shí)間點(diǎn)用流式檢測(cè)MDSCs及其不同表型所占比例;用不同濃度GM-CSF加或不加G-CSF刺激骨髓細(xì)胞,流式檢測(cè)G-MDSCs比例;用誘導(dǎo)分化MDSCs與CFSE標(biāo)記淋巴細(xì)胞共培養(yǎng),流式檢測(cè)淋巴細(xì)胞增殖率。結(jié)果1.隨G-CSF濃度增加,G-MDSCs所占比例明顯增加,各組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.001),G-CSF(50ng/ml)為最適濃度,且第5天增多最為明顯(均P0.001)。2.G-CSF聯(lián)合LPS組G-MDSCs比例較無(wú)LPS組減少(均P0.05)。3.MDSCs與T細(xì)胞共培養(yǎng)組較無(wú)MDSCs組T細(xì)胞增值率下降(均P0.05)。結(jié)論G-CSF體外可誘導(dǎo)MDSCs生成,且促進(jìn)G-MDSCs表型分化,50ng/ml G-CSF刺激時(shí)間5天為適宜誘導(dǎo)條件,誘導(dǎo)生成的MDSCs具有免疫抑制功能。第三部分G-CSF體外定向誘導(dǎo)G-MDSCs信號(hào)通路機(jī)制研究目的探討G-CSF體外誘導(dǎo)骨髓細(xì)胞定向分化成G-MDSCs信號(hào)通路。方法不同濃度梯度G-CSF(0,5,10,50,100ng/ml)刺激骨髓細(xì)胞,3-5天后收集細(xì)胞,分別提取核酸及蛋白,用RT-PCR和Western blot檢測(cè)STAT3、C/EBPβ表達(dá)量。結(jié)果1.STAT3和C/EBP β mRNA表達(dá)情況:各組STAT3 mRNA表達(dá)量無(wú)明顯區(qū)別(P00.24),C/EBP β在各組表達(dá)量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.002),除5ng/ml組以外,其余較對(duì)照組均有顯著增加,50ng/ml組最明顯(P0.001,P0.001,P=0.003 和 P=0.001)。2.STAT3和C/EBP β蛋白表達(dá)情況:總STAT3在各組無(wú)明顯差異(P=0.739),p-STAT3隨劑量增加而上升,其中50ng/ml組最顯著(均P0.001)。C/EBPβ及p-C/EBPβ在各組差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.018和P=0.03),50ng/ml組升高最為明顯。結(jié)論p-STAT3與p-C/EBPβ表達(dá)量隨濃度增高增加,且兩者變化趨勢(shì)相同,G-CSF可能是通過(guò)STAT3/C/EBPβ日信號(hào)通路調(diào)控G-MDSCs定向分化。
[Abstract]:In order to further clarify the role of G - MDSCs in the pathogenesis of asthma , it was found that G - MDSCs were involved in the pathogenesis and development of asthma . The results showed that G - CSF could induce MDSCs to differentiate into G - MDSCs in vitro . The results showed that G - CSF could induce MDSCs to differentiate into G - MDSCs .

【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R562.25

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本文編號(hào)：1847980