本文關(guān)鍵詞：內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在矽肺患者肺泡巨噬細(xì)胞凋亡中的作用，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《華北理工大學(xué)》 2015年

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在矽肺患者肺泡巨噬細(xì)胞凋亡中的作用

孫海霞  

【摘要】：目的初步探討矽肺患者肺泡巨噬細(xì)胞(AM)中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激信號(hào)分子的表達(dá)規(guī)律。通過阻斷ATF6、IRE-1、PERK三條通路,比較阻斷前后GRP78、ATF6、IRE-1、PERK、CHOP、Caspase-4、Caspase-3 m RNA及GRP78、Caspase-3蛋白相對(duì)表達(dá)水平變化,探討內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在矽肺患者肺泡巨噬細(xì)胞凋亡中的作用。方法選取在中國(guó)煤礦工人北戴河療養(yǎng)院進(jìn)行大容量肺灌洗的矽肺壹期、貳期、叁期男性患者23、25、24例分別設(shè)為矽肺壹期、貳期、叁期組,以8例診斷為觀察對(duì)象的男性矽塵作業(yè)工人為對(duì)照組,所有研究對(duì)象均排除患有肺炎、活動(dòng)性肺結(jié)核、肺心病等肺部疾病、傳染性疾病以及其他部位纖維化性疾病的病人。收集研究對(duì)象的全肺灌洗回收液,分離、純化AM,將純化后的AM分為4組:未處理組、ATF6抑制劑組、IRE-1抑制劑組和PERK抑制劑組,繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞24h,提取RNA和蛋白,采用實(shí)時(shí)定量熒光聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Real Time PCR,RT-PCR)檢測(cè)AM中葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78(GRP78)、C/EBP同源蛋白(CHOP)、ATF6、IRE-1、PERK、天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-4和Caspase-3 m RNA相對(duì)表達(dá)水平。采用免疫印跡法(Western Blot)方法檢測(cè)AM中GRP78蛋白和Caspase-3蛋白表相對(duì)表達(dá)水平。結(jié)果1矽肺患者內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激信號(hào)分子m RNA及蛋白表達(dá)規(guī)律。本研究發(fā)現(xiàn)矽肺患者AM的GRP78和Caspase-3 m RNA及蛋白表達(dá)水平均高于對(duì)照組(P0.05),矽肺叁期組GRP78 m RNA及蛋白表達(dá)水平低于矽肺貳期組。Caspase-3 m RNA及蛋白相對(duì)表達(dá)水平隨著矽肺期別的增加呈上升趨勢(shì),矽肺貳期組和叁期組高于矽肺壹期組(P0.05)。CHOP和Caspase-4 m RNA表達(dá)水平高于對(duì)照組,且隨著矽肺期別的增加呈上升趨勢(shì),矽肺貳期、叁期組高于矽肺壹期組(P0.05)。ATF6、IRE-1和PERK m RNA與GRP78 m RNA變化趨勢(shì)一致,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2吸煙和粉塵暴露因素對(duì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激信號(hào)分子m RNA及蛋白表達(dá)的影響。200支~組和400支~組矽肺患者AM中GRP78 m RNA和蛋白相對(duì)表達(dá)水平高于0支組,400支~組低于200支~組(P0.05)。200支~組和400支~組矽肺患者AM中Caspase-3 m RNA和蛋白相對(duì)表達(dá)水平高于0支組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。200支~組和400~支組矽肺患者AM中CHOP和Caspase-4m RNA表達(dá)水平高于0組(P0.05)。Caspase-3蛋白在未脫塵組的相對(duì)表達(dá)水平高于脫塵組(P0.05)。Caspase-3和CHOP m RNA表達(dá)水平在接塵工齡≥15年組高于15年組(P0.05)。CHOP、Caspase-4和Caspase-3 m RNA在未脫塵組的相對(duì)表達(dá)水平高于脫塵組(P0.05)。3經(jīng)多因素研究發(fā)現(xiàn),矽肺期別是影響GRP78和CHOP m RNA表達(dá)的因素,矽肺期別、吸煙指數(shù)和GRP78 m RNA是Caspase-4 m RNA表達(dá)的影響因素,矽肺期別、吸煙指數(shù)是Caspase-3 m RNA和蛋白表達(dá)的影響因素。4不同處理因素對(duì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激信號(hào)分子表達(dá)水平的影響經(jīng)3種抑制劑處理后,GRP78和Caspase-3 m RNA及蛋白表達(dá)水平均低于未處理組(P0.05)。CHOP和Caspase-4m RNA表達(dá)水平均低于未處理組,GRP78 m RNA在觀察對(duì)象、矽肺貳期組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。CHOP、Caspase-4和Caspase-3 m RNA在矽肺貳期組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論矽肺患者肺泡巨噬細(xì)胞發(fā)生內(nèi)質(zhì)網(wǎng)過度應(yīng)激,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激程度隨著矽肺期別的增加而增強(qiáng);影響Caspase-4 m RNA表達(dá)的因素為矽肺期別、吸煙指數(shù)和GRP78 m RNA表達(dá)水平;阻斷三條通路后,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激程度與肺泡巨噬細(xì)胞凋亡程度均減輕,說明內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激通路在矽肺患者肺泡巨噬細(xì)胞凋亡過程中發(fā)揮重要作用。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：華北理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R135.2
【目錄】：

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10 韓亞鳳;內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在矽肺患者肺泡巨噬細(xì)胞自噬中的作用研究[D];華北理工大學(xué);2015年

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