發(fā)布時間：2018-04-20 07:38

  本文選題：成纖維細胞 + 原代培養(yǎng)　； 參考：《醫(yī)學研究生學報》2014年02期

【摘要】：目的肌成纖維細胞(fibroblasts,FB)是器官纖維化形成過程中關鍵的靶細胞,以特異表達α-平滑肌肌動蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)和細胞基質(zhì)沉積為特征。文中比較胰蛋白酶消化法和組織貼壁法原代培養(yǎng)乳鼠肺FB的優(yōu)缺點,并報道體外肌FB分化模型的建立。方法分別采用胰蛋白酶消化法和組織貼壁法原代培養(yǎng)乳鼠肺FB,倒置相差顯微鏡觀察原代培養(yǎng),MTT法檢測細胞增殖,免疫細胞化學染色法鑒定細胞來源,采用轉(zhuǎn)化生長因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)誘導FB向肌FB分化。結(jié)果采用胰蛋白酶消化法和組織塊貼壁法均可以成功原代培養(yǎng)鼠胚肺FB,2種方法無論在形態(tài)、細胞增殖水平還是在細胞鑒定方面均無差異,但胰蛋白酶消化法在相同條件下能夠快速獲得較組織貼壁法更多的細胞,且2種方法獲得的FB在4代之內(nèi)均不表達α-SMA,需經(jīng)TGF-β1誘導分化為肌FB。隨TGF-β1誘導時間的延長,α-SMA和Ⅰ型膠原蛋白表達上調(diào)。結(jié)論胰酶消化法較組織貼壁法能快速、大量獲得純度較高的FB,4代以內(nèi)的乳鼠FB適合建立肌FB分化模型。
[Abstract]:Objective myofibroblast fibroblast (FB) is a key target cell in the process of organ fibrosis. It is characterized by the specific expression of 偽 -smooth muscle actin (偽 -SMA) and cell matrix deposition. In this paper, the advantages and disadvantages of trypsin digestion method and tissue adherence method in primary culture of FB in neonatal rat lung were compared, and the establishment of FB differentiation model of extracorporeal muscle was reported. Methods using trypsin digestion method and tissue adherence method, the primary cultured neonatal rat lung FB was cultured, the primary culture cell proliferation was detected by inverted phase contrast microscope, and the cell origin was identified by immunocytochemical staining. Transforming growth factor 尾 1(transforming growth factor- 尾 1 (TGF- 尾 1) was used to induce the differentiation of FB into muscle FB. Results there was no difference in morphology, cell proliferation and cell identification between the two methods of trypsin digestion and tissue mass adherence. However, more cells could be obtained by trypsin digestion under the same conditions than by tissue adherence method, and the FB obtained by both methods did not express 偽 -SMAwithin 4 passages, and it was necessary to differentiate into muscle FB by TGF- 尾 1. The expression of 偽 -SMA and type I collagen was up-regulated with the prolongation of TGF- 尾 1 induction time. Conclusion Pancreatic enzyme digestion is more rapid than tissue adherent method, and a large number of FB with high purity can be obtained in the fourth generation of FB, which is suitable for the establishment of muscle FB differentiation model.
【作者單位】： 河北聯(lián)合大學醫(yī)學實驗研究中心;河北聯(lián)合大學中醫(yī)學院;河北聯(lián)合大學病理學系;
【基金】：國家自然科學基金(81202162) 唐山市科技計劃項目(1313021092) 河北聯(lián)合大學博士科研項目(35757299)
【分類號】：R135.2;R563.9

【參考文獻】

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