本文選題：血管生成素1 + 基因治療��； 參考：《復(fù)旦大學(xué)》2013年碩士論文

【摘要】：研究的背景及目的： 光氣是一種重要的化學(xué)物質(zhì)被廣泛的運(yùn)用于現(xiàn)代工業(yè)。作為一種高毒性的化學(xué)制品,可以導(dǎo)致急性肺損傷,肺水腫,甚至于死亡。目前基因治療已經(jīng)成為一種新型的治療急性肺損傷的方法。血管生成素1(Ang1)是拯救內(nèi)皮及維持內(nèi)皮穩(wěn)定性方面的決定性因子,其可能的原理是減少內(nèi)皮的滲出和削弱內(nèi)皮的炎癥。本課題中,我們觀察光氣吸入引起的急性肺損傷的病理改變,假設(shè)Ang1基因治療能逐漸降低炎癥因子導(dǎo)致的肺血管的滲出。 方法： 1.選取SPF級雄性SD大鼠(180-220g)60只隨機(jī)分為6組,光氣組暴露于濃度為8.33g/m3光氣5min造成急性肺損傷模型,空氣組則放入相同體積的容器內(nèi),吸入5min空氣；設(shè)空氣對照組三組,分別為：空氣組,空氣+Ad組,空氣+Ad/Ang1組；,光氣組三組,分別為：光氣組,光氣+Ad組,光氣+Ad/Ang1組。腺病毒在吸入相應(yīng)氣體后1小時(shí),由尾靜脈注射干預(yù)。 2.氣體(空氣,光氣)暴露5min,36小時(shí)后,取右肺下葉行濕／干比檢測,取部分右肺上葉石蠟固定,HE染色行病理學(xué)檢查,部分右肺上葉OCT包埋,新鮮冰凍切片觀察免疫熒光,取右肺中葉行Western blot檢測肺組中Ang1蛋白含量,RT-PCR法檢測肺組中Ang1,IL-1β,IL-17和VEGF mRNA含量。 3.左肺行肺泡灌洗,取部分肺泡灌洗液行粒細(xì)胞計(jì)數(shù)。ELISA法檢測肺水中Ang1, IL-1β, IL-17和VEGF的濃度。 4.腹主動(dòng)脈采血,離心后取血清,ELISA法檢測血清中Ang1,IL-1β,IL-17和VEGF的濃度。 結(jié)果： 1.光氣暴露組肺組織內(nèi)及血清中的Ang1是呈下降趨勢的。 2.通過腺病毒尾靜脈注射法可以成功轉(zhuǎn)染動(dòng)物,且病毒本身對動(dòng)物無致病性。 3.腺病毒所攜帶的目的基因可以在動(dòng)物體內(nèi)得到表達(dá),肺組織中Ang1蛋白水平, mRNA水平以及血清中Angl水平均高于空白腺病毒對照組。 4.外源性的Ang1可以一定程度上緩解光氣引起的急性肺損傷,如減少了肺泡灌洗液中的粒細(xì)胞數(shù),肺濕／干比等。 5.Angl可以下調(diào)某些炎癥因子,如IL-1β,IL-17。 結(jié)論： 1.腺病毒攜帶Angl目的基因轉(zhuǎn)染動(dòng)物模型制造成功,且腺病毒本身對動(dòng)物無明顯影響。 2.Angl肺內(nèi)高表達(dá),發(fā)揮其抗炎和穩(wěn)定血管減輕滲漏的作用,腺病毒介導(dǎo)的Angl基因治療不失為一種可行性的干預(yù)光氣引起的急性肺損傷的方法。
[Abstract]:Background and objectives of the study:Phosgene is an important chemical substance which is widely used in modern industry.As a highly toxic chemical, it can lead to acute lung injury, pulmonary edema, and even death.Gene therapy has become a new therapy for acute lung injury.Angiopoietin 1Ang1) is a decisive factor in saving endothelium and maintaining endothelial stability. Its possible mechanism is to reduce endothelial exudation and weaken endothelial inflammation.In this study, we observed the pathological changes of acute lung injury induced by phosgene inhalation, assuming that Ang1 gene therapy could gradually reduce pulmonary vascular exudation induced by inflammatory factors.Methods:1.60 male SD rats of SPF grade were randomly divided into 6 groups. The phosgene group was exposed to 8.33g/m3 phosgene 5min to induce acute lung injury model, the air group was put into the same volume container and inhaled the 5min air, and the air control group was divided into three groups.They were air group, air Ad group, air Ad/Ang1 group and phosgene group. They were phosgene group, phosgene Ad group and phosgene Ad/Ang1 group.Adenovirus was injected into the tail vein for 1 hour after inhalation of the corresponding gas.2.After exposure to air (air, phosgene) for 36 hours, the lower lobe of the right lung was taken for wet / dry ratio detection, the paraffin fixed part of the upper lobe of the right lung was stained with HE for pathological examination, the OCT was embedded in the upper lobe of the right lung, and the immunofluorescence was observed by fresh frozen sections.The content of Ang1 protein in lung group was detected by Western blot. The contents of IL-17 and VEGF mRNA in lung group were detected by reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR).3.The concentration of Ang1, IL-1 尾, IL-17 and VEGF in lung water was detected by Elisa and granulocyte count in partial alveolar lavage fluid.4.Blood samples were collected from abdominal aorta and serum levels of IL-17 and VEGF were determined by Elisa after centrifugation.Results:1.In phosgene exposure group, Ang1 in lung tissue and serum showed a decreasing trend.2.Adenovirus tail vein injection can successfully transfect animals, and the virus itself has no pathogenicity to animals.3.The target gene carried by adenovirus could be expressed in animals. The levels of Ang1 protein, mRNA and serum Angl in lung tissue were higher than those in control group.4.Exogenous Ang1 can alleviate acute lung injury induced by phosgene to some extent, such as reducing the number of granulocytes in alveolar lavage fluid and lung wet / dry ratio.5.Angl can down-regulate some inflammatory factors, such as IL-1 尾 -IL-17.Conclusion:1.Adenovirus carrying Angl gene was successfully transfected into animal model, and adenovirus itself had no obvious effect on animal.Angl gene therapy mediated by adenovirus is a feasible method to interfere with phosgene induced acute lung injury.
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R563.8

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