本文關(guān)鍵詞：白細(xì)胞介素1β對(duì)骨髓中性粒細(xì)胞與嗜酸性粒細(xì)胞分化的調(diào)控及其相關(guān)機(jī)制，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《浙江大學(xué)》 2014年

白細(xì)胞介素1β對(duì)骨髓中性粒細(xì)胞與嗜酸性粒細(xì)胞分化的調(diào)控及其相關(guān)機(jī)制

金嫣  

【摘要】：哮喘是由多種細(xì)胞及細(xì)胞組分,包括嗜酸性粒細(xì)胞(Eos)、中性粒細(xì)胞(Neut)、淋巴細(xì)胞、肥大細(xì)胞等炎癥細(xì)胞及炎癥介質(zhì)、細(xì)胞因子等所形成的氣道內(nèi)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、黏液分泌增多、氣道高反應(yīng)性(AHR)、成纖維細(xì)胞及上皮細(xì)胞增生、平滑肌細(xì)胞肥大及氣道重塑,其本質(zhì)是一種慢性氣道炎癥。一直以來,多項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)哮喘是以Th2細(xì)胞反應(yīng)為主的嗜酸性粒細(xì)胞性氣道炎癥,對(duì)激素治療效果明顯,而臨床上發(fā)現(xiàn)以中性粒細(xì)胞性氣道炎癥為主的哮喘患者對(duì)激素治療效果不明顯,甚至出現(xiàn)惡化的表現(xiàn),這部分哮喘又稱之為中性粒細(xì)胞性哮喘,即難治性哮喘、重癥哮喘。由此可見,氣道嗜酸性粒細(xì)胞及中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)在哮喘的病理生理過程及臨床癥狀的發(fā)展中起關(guān)鍵作用,阻斷氣道嗜酸性粒細(xì)胞及中性粒細(xì)胞性炎癥對(duì)哮喘的治療有決定性意義。 白細(xì)胞介素Iβ (IL-1β)是IL-1家族的成員之一,作為一種重要的前炎癥因子參與多種疾病的發(fā)生發(fā)展。多項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)IL-1β在哮喘尤其是重癥哮喘的發(fā)病過程中發(fā)揮重要的作用,而且與氣道內(nèi)嗜酸性粒細(xì)胞及中性粒細(xì)胞的升高密切相關(guān),盡管其機(jī)制并不明確。甚至臨床研究認(rèn)為IL-1β可以作為區(qū)別哮喘和慢性阻塞性肺疾病(COPD)的生物學(xué)標(biāo)記。另外,有文獻(xiàn)報(bào)道IL-1β干預(yù)后可以引起骨髓造血干祖細(xì)胞向髓系的分化,由此我們假設(shè)IL-1β是否可以直接參與骨髓造血干祖細(xì)胞向Neut及Eos分化的調(diào)控,從而為IL-1β在哮喘發(fā)病機(jī)制的探究做鋪墊,開拓新的視野,為哮喘的臨床治療提供新的防治靶點(diǎn)。 目的：探討IL-1p對(duì)骨髓造血干祖細(xì)胞向中性粒細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞分化的調(diào)控及其相關(guān)機(jī)制,從而為IL-1p在哮喘的發(fā)病機(jī)制提供新的理論契機(jī)。 方法：健康同周齡WT小鼠與IL-1R敲除(IL-1R-/-)小鼠,分為四組：WT小鼠生理鹽水對(duì)照組(WT-NS組),WT小鼠LPS模型組(WT-LPS組),IL-1R-/-小鼠生理鹽水對(duì)照組(IL-1R-/--NS組)及IL-1R-/-小鼠LPS模型組(IL-1R-/--LPS組)。氣道滴注脂多糖(LPS)(lmg/kg小鼠)或者生理鹽水(NS),24小時(shí)內(nèi)檢測(cè)支氣管肺泡灌洗液(BALF)和外周血中性粒細(xì)胞比例；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)和分析骨髓中性粒細(xì)胞(Gr-1+CD11b+),并進(jìn)一步分析原始中性粒細(xì)胞(Pro/mye, Gr-1intCD11bint),非成熟中性粒細(xì)胞(imNeut, Gr-lhiCD11blo)及成熟中性粒細(xì)胞(mNeut, Gr-lhiCD11bhi)這三群細(xì)胞的比例。其中原始中性粒細(xì)胞(Pro/mye)包括原幼粒細(xì)胞和中幼粒細(xì)胞,非成熟中性粒細(xì)胞(imNeut)包括晚幼粒細(xì)胞和桿狀粒中性粒細(xì)胞,成熟中性粒細(xì)胞(mNeut)即分葉核中性粒細(xì)胞。利用IL-1-/-小鼠與WT小鼠構(gòu)建骨髓移植及Neut炎癥模型：健康C57BL/6雌鼠作為受體鼠先接受化療,腹腔注射白消胺(BU),30mg/kg,每日1次,連續(xù)4天,腹腔注射環(huán)磷酰胺(CTX),50mg/kg,每日1次,連續(xù)2天,中間休息1天后,第8天,提取同周齡的供體鼠(IL-1R4-雄鼠與WT雄鼠)的骨髓細(xì)胞,按2-4×107cells/小鼠為受體雌鼠進(jìn)行尾靜脈注射,待第21天受體鼠骨髓造血系統(tǒng)基本恢復(fù)進(jìn)行造模,隨機(jī)分為四組：WT小鼠回輸生理鹽水對(duì)照組(WT-WT-NS組)、WT小鼠回輸LPS模型組(WT-WT-LPS組)、敲除小鼠回輸生理鹽水對(duì)照組(IL-1R-/--WT-NS組)、敲除小鼠回輸LPS模型組(IL-IR-/--WT-LPS組),氣道滴注NS及LPS (1ug/g小鼠)24時(shí)內(nèi)進(jìn)行模型處理,檢測(cè)方法同上。體外Neut克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)IL-1p對(duì)Neut分化的影響,液態(tài)培養(yǎng)誘導(dǎo)骨髓Neut分化并流式檢測(cè)Neut、Annexin V/PI、E.coli吞噬等進(jìn)一步研究IL-1β干預(yù)對(duì)Neut分化、凋亡及功能的影響。實(shí)時(shí)定量PCR (Q-PCR)檢測(cè)骨髓Neut分化過程中關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子，包括G-CSFR、C/EBPε、PU.1及C/EBPa的hRNA表達(dá)。同時(shí),體外半固態(tài)及液態(tài)培養(yǎng)檢測(cè)IL-1β對(duì)嗜酸性粒細(xì)胞(Eos)分化的影響：Eos半固態(tài)克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)并比較對(duì)照組(IL-5)及實(shí)驗(yàn)組(IL-5+IL-1β)Eos的克隆形成情況；流式檢測(cè)液態(tài)誘導(dǎo)Eos分化過程中IL-5和或IL-1β干預(yù)后Eos的(SiglecF+)水平,并利用BrdU方法檢測(cè)Eos增殖及凋亡水平；Q-PCR檢測(cè)Eos分化過程中關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子GATA-1及重要調(diào)控分子MBP-1的表達(dá)。 結(jié)果：在Neut炎癥模型中,與WT-LPS組相比,IL-1R-/--LPS組BALF-Neut,總數(shù)有下降趨勢(shì),盡管沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05,P=0.0571),外周血Neut比例明顯降低(P0.05),骨髓Pro/mye比例無明顯變化(P0.05),但是骨髓imNeut比例明顯增加(P0.05),mNeut比例明顯降低(P0.001)。利用IL-1R-/-小鼠與WT小鼠進(jìn)行骨髓移植并構(gòu)建Neut炎癥模型,比較IL-IR-/--WT-LPS組與WT-WT-LPS組,前者BALF-Neut比例有下降趨勢(shì),盡管沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05,P=0.0503),外周血Neut炎癥明顯緩解(P0.01),骨髓Pro/mye比例無明顯變化(P0.05),骨髓imNeut比例變化也不明顯(P0.05),而mNeut比例明顯降低(P0.001)。中性粒細(xì)胞體外誘導(dǎo)分化液態(tài)培養(yǎng)結(jié)果發(fā)現(xiàn),IL-1p單獨(dú)干預(yù)對(duì)Neut的分化無明顯影響(P0.05),而在G-CSF的協(xié)同作用下可以明顯促進(jìn)Neut的分化(P0.001),但對(duì)Neut凋亡抑制作用不明顯(P0.05),并對(duì)Neut吞噬功能也有一定的促進(jìn)作用(P0.05)。體外半固態(tài)培養(yǎng)發(fā)現(xiàn),IL-1β在G-CSF協(xié)同的作用下明顯促進(jìn)Neut-CFU的形成(P0.01)。Q-PCR檢測(cè)Neut分化過程中關(guān)鍵的轉(zhuǎn)錄因子,結(jié)果發(fā)現(xiàn)與WT-NS組相比,WT-LPS組G-CSFR、C/EBPe、PU.1及C/EBPα的mRNA表達(dá)水平升高(P0.05),而IL-1R-/-LPS組骨髓G-CSFR、C/EBPs、PU.1及C/EBPα的mRNA表達(dá)水平與IL-1R-/--NS組比較則無明顯變化(P0.05)。嗜酸性粒細(xì)胞體外半固態(tài)及液態(tài)培養(yǎng)結(jié)果：Eos半固態(tài)克隆形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組(IL-5)Eo-CFU數(shù)量與對(duì)照組(IL-5)相比無明顯變化(P0.05);Eos液態(tài)培養(yǎng)誘導(dǎo)分化,第8-10天收集細(xì)胞流式檢測(cè)Eos分化水平及凋亡情況,結(jié)果顯示在IL-5的作用下,Eos逐漸分化成熟,但I(xiàn)L-1p干預(yù)后并不影響Eos的分化(P0.05),且實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組中Eos相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子(GATA-1)及重要調(diào)控蛋白(MBP-1)的mRNA表達(dá)也無明顯差別(P0.05)。Eos液態(tài)培養(yǎng)第10天進(jìn)行BrdU流式檢測(cè)發(fā)現(xiàn),盡管實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比S期細(xì)胞比例無明顯差別,但凋亡細(xì)胞群卻明顯減少。結(jié)論：IL-1p在G-CSF協(xié)同作用下明顯促進(jìn)Neut的分化,這一作用可能是通過上調(diào)G-CSFR、C/EBPε、PU.1及C/EBPα的表達(dá)而實(shí)現(xiàn),而單獨(dú)作用影響不明顯。同時(shí),IL-1β還能促進(jìn)Neut的吞噬功能,但對(duì)其凋亡無明顯影響。另外,IL-1p不影響骨髓Eos的分化與增殖,但是能抑制Eos的凋亡。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R562.25
【目錄】：

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8 王成彬;黃振國;李洛誼;葉偉基;林偉基;叢玉隆;;嗜酸性粒細(xì)胞與支氣管上皮細(xì)胞相互活化誘導(dǎo)細(xì)胞表面粘附分子表達(dá)及其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七次全國檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議資料匯編[C];2008年

9 雷霏;董震;;變應(yīng)性疾病中水通道蛋白1在嗜酸性粒細(xì)胞遷移趨化中的作用[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十次全國耳鼻咽喉-頭頸外科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編（上）[C];2007年

10 林進(jìn);徐立勤;徐丹怡;孫德本;;Churg-Strauss綜合征患者血清嗜酸性粒細(xì)胞陽離子蛋白水平的測(cè)定[A];浙江省醫(yī)學(xué)會(huì)2008年風(fēng)濕病年會(huì)論文匯編[C];2008年

中國重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 李傳寶;[N];家庭醫(yī)生報(bào);2006年

2 王振坤;[N];家庭醫(yī)生報(bào);2007年

3 武漢大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬中山醫(yī)院主任醫(yī)師 李定國;[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2005年

4 許關(guān)煜 李敏華;[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2013年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 陳鴻鵠;腸道派氏結(jié)嗜酸性粒細(xì)胞亞群的發(fā)現(xiàn)及其黏膜免疫調(diào)控功能與機(jī)制的研究[D];浙江大學(xué);2013年

2 楊文鈺;人類胚胎干細(xì)胞/誘導(dǎo)型多潛能干細(xì)胞向功能成熟嗜酸性粒細(xì)胞分化的研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2011年

3 汪誠;膜連蛋白Ⅰ參與地塞米松上調(diào)A549細(xì)胞吞噬凋亡的嗜酸性粒細(xì)胞[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2007年

4 趙衛(wèi)東;根除幽門螺桿菌及藥物治療對(duì)功能性消化不良影響的研究[D];山東大學(xué);2013年

5 顧紅英;兒童功能性消化不良流行病學(xué)和發(fā)病機(jī)制的研究[D];蘇州大學(xué);2012年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 楊清然;高嗜酸性粒細(xì)胞綜合征7例臨床分析[D];吉林大學(xué);2012年

2 郭君;嗜酸性粒細(xì)胞抗腫瘤作用及其機(jī)制的初步研究[D];蘭州大學(xué);2008年

3 盧會(huì)秀;嗜酸性粒細(xì)胞及伴嗜酸性粒細(xì)胞增多性疾病[D];河北醫(yī)科大學(xué);2010年

4 鞏靜;白細(xì)胞介素18在卵清蛋白誘發(fā)的小鼠哮喘模型中對(duì)嗜酸性粒細(xì)胞肺內(nèi)募集作用的研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2007年

5 安方玉;嗜酸性粒細(xì)胞增高模型小鼠的抗腫瘤及免疫調(diào)節(jié)活性研究[D];蘭州大學(xué);2008年

6 伍天愛;三伏穴位敷貼對(duì)哮喘模型大鼠嗜酸性粒細(xì)胞凋亡影響的實(shí)驗(yàn)研究[D];湖北中醫(yī)學(xué)院;2006年

7 方文琦;嗜酸性粒細(xì)胞在鼻息肉組織中聚集與外周血中百分比的臨床觀察[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2014年

8 徐文娟;嗜酸性粒細(xì)胞陽性AECOPD對(duì)糖皮質(zhì)激素治療反應(yīng)[D];遵義醫(yī)學(xué)院;2014年

9 高偉;嗜酸性粒細(xì)胞陽離子蛋白抗體的制備及初步應(yīng)用[D];長(zhǎng)春理工大學(xué);2010年

10 田衛(wèi)花;嗜酸性粒細(xì)胞對(duì)淋巴細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞活性影響的實(shí)驗(yàn)研究[D];蘭州大學(xué);2008年

  本文關(guān)鍵詞：白細(xì)胞介素1β對(duì)骨髓中性粒細(xì)胞與嗜酸性粒細(xì)胞分化的調(diào)控及其相關(guān)機(jī)制，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：171300