發(fā)布時間：2018-04-02 07:21

  本文選題：BMI指數(shù)　切入點：Angptl2　出處：《重慶醫(yī)科大學》2012年碩士論文

【摘要】：目的：了解不同級別肺損傷動物模型肺組織病理學評分及W/D差異；了解不同級別肺損傷動物模型外周血炎癥因子TNF-α、IL-lβ水平表達變化及其差異基本規(guī)律；了解不同級別肺損傷動物模型外肺組織中NF-κBp65mRNA水平，NF-κBp65核轉(zhuǎn)位比率三指標共同評價BMI導致表達的差異規(guī)律；通過W/D、肺損傷病理評分、TNF-α、IL-1β、NF-κBp65五個指標聯(lián)合評價肺損傷程度，并將BMI指數(shù)與肺損傷程度作相關性分析，期望證實BMI指數(shù)是發(fā)生ALI的獨立危險因子；通過分析不同BMI指數(shù)組Angptl2mRNA與蛋白水平，從Angptl2是肥胖的關鍵性脂源性炎癥因子角度出發(fā)，探討B(tài)MI與ALI相關性的可能機制通路。 方法：健康雄性SD大鼠36只,體質(zhì)量(168±31)g，由重慶醫(yī)科大學動物實驗中心提供，按完全隨機原則分為4組（n=9），C組（空白對照組）、OA組（普通大鼠OA造模組）采用普通飼料喂養(yǎng)，C-H組（高脂肥胖對照組）、O-H組（高脂肥胖油酸造模組）采用高脂飼料（20%豬油，10%奶粉，10%雞蛋，60%普通飼料）誘導肥胖模型。8周后測量體重指數(shù)BMI(Kg/m2)及血脂水平（mmol/L）。C組、C-H組采用尾靜脈注射生理鹽水作對照組，OA、O-H兩組采用尾靜脈注射油酸復制肺損傷模型,各組劑量均為0.1ml/kg，造模后4h通過觀察造模后大鼠的呼吸頻率、皮膚粘膜顏色、活動行為初步判斷造模成功與否，采用3.5%水合氯醛充分麻醉大鼠（10ml/kg），頸靜脈取血分離血漿備用；開胸后肉眼觀察肺組織出血、水腫情況取右肺固定部分作濕重/干重比值(W/D)、肺組織冰凍切片及病理學觀察，取左肺組織分裝凍存于負80℃冰箱備用,作肺組織炎癥因子含量TNF-α、IL-lβ及免疫熒光檢測NF-κBp65核轉(zhuǎn)位比率、半定量PCR法檢測肺組織NF-κBmRNA表達水平；Realtimequantitative-PCR法定量檢測肺組織Angptl2mRNA表達水平，Westernblot半定量檢測肺組織Angptl2蛋白表達。 結果： 1.大鼠呼吸頻率、皮膚粘膜、活動行為C組及C-H組大鼠一般情況好,精神狀態(tài)可，呼吸平穩(wěn),頻率分別為（44±12）、（42±8）次/分,無紫紺出現(xiàn),未見死亡。OA組大鼠于造模后1~4h呼吸頻率顯著增加,達（98±13）次/分,全身毛發(fā)豎立，紫紺出現(xiàn),未見死亡。0-H組大鼠造模后數(shù)分鐘呼吸頻率顯著增加(130±22)次/分,全身毛發(fā)豎立肺部哮鳴音顯著,口唇紫紺較OA組更為明顯,4h內(nèi)死亡一只。分別測得4組大鼠血脂、體重、身長,C組、OA組甘油三酯（TG）、BMI兩指標差異沒有統(tǒng)計學意義，C-H、O-H組TG及BMI指數(shù)較前兩組顯著升高，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05) 2.肺組織濕/干重、肺組織形態(tài)學觀察開胸后觀察肉眼下，C組肺組織表面光滑，淺粉紅色，無充血、水腫，C-H組可見肺組織較正常組肥大，表面可見黃色脂肪組織；OA模型組肺組織呈暗紅色，可見廣泛點狀或灶狀出血,病理可見肺水腫、肺出血、炎細胞浸潤等肺損傷典型改變；O-H組肺組織明顯增大成暗紅色,部分部位略成黃白色，大片灶狀區(qū)域，病理可見明顯水腫，大量炎細胞浸潤。參照文獻對4組大鼠肺損傷病理學評分結果示，，C-H組、O-H組及OA組均較C組升高差異具有統(tǒng)計學意義，且O-H組與OA組相比差異同樣具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），但從W/D數(shù)據(jù)顯示O-H與OA兩組差異并無統(tǒng)計學意義（P0.05） 3.各組血漿TNF-α、IL-1β含量差異肺組織勻漿上清液TNF-α、IL-1β的測定可評估肺組織炎癥反應程度。在造模后4hOA、O-H兩組TNF-αI、L-1β較對照組均明顯升高，且O-H組較OA升高更為明顯。 4.免疫熒光檢測NF-κBp65核轉(zhuǎn)位比率圓形綠色熒光代表NF-κBp65蛋白所在的陽性細胞圖像，熒光標記主要濃集胞核區(qū)。C組陽性細胞少，OA模型組核轉(zhuǎn)位陽性細胞增多，0-H組較OA組升高更為明顯（見圖2）。用ImageJ軟件測定每組圖片光密度值，O-H模型組光密度值高于OA組，差異有統(tǒng)計學意義（p0.05）;NF-ΚB電泳后顯示在348bp處，O-H組NF-ΚBmRNA表達較OA組顯著增加（p0.05）。 5.PCR半定量測定肺組織NF-κBp65mRNA表達量PCR結果顯示，C組NF-κBp65mRNA灰度值最低，OA模型組NF-κBp65mRNA灰度值增加，兩組之間差異具有統(tǒng)計學意義（p0.05）；O-H組較C-H組灰度值明顯增加，差異同樣具有統(tǒng)計學意義（p0.05））；同時O-H較OA組升高更為明顯（p0.05）。 6.BMI指數(shù)分別與肺組織W/D、病理評分、血漿炎癥因子TNF-α、IL-1β相關性分析BMI指數(shù)與上述指標均成正相關，與病理評分及IL-1β相關性最高，與W/D相關性不明顯。未造模組：BMI與W/D：0.62、病理評分：0.78、TNF-α：0.83、IL-1β：0.84；造模組：BMI與W/D：0.29、病理評分：0.85、TNF-α：0.65、IL-1β：0.79。 7.Realtimequantitative-PCR法定量檢測肺組織Angptl2mRNA表達水平,Westernblot法半定量檢測肺組織Angptl2mRNA表達水平Angptl2在肺組織中呈陽性表達，油酸造模后，OH組與CO組呈明顯升高狀態(tài),差異具有統(tǒng)一學意義。 8.免疫組化分析免疫組化結果顯示：該蛋白主要集中在肺泡壁外側(cè)或內(nèi)側(cè)，相同BMI水平，肺損傷組的Angptl2表達量增加，不同BMI水平，Angptl2在高BMI組即肺損傷程度嚴重組表達量增加；將OA組與O-H組相對比發(fā)現(xiàn)，在Angptl2的表達量越多的部位，肺泡壁塌陷程度越重、水腫液滲出越多，該蛋白在肺損傷程度重的組別表達更為廣泛、表達量更高，這一結果與RT-PCR、WesternBlot結果相一致。 結論： 1）BMI的升高可導致肺損傷模型病理學評分、大鼠外周血炎癥因子TNF-α、IL-lβ水平、肺組織中NF-κBp65mRNA水平升高； 2）BMI指數(shù)與肺損傷病理評分、TNF-α、IL-1β、NF-κBp65四個指標與肺損傷程度具有良好相關性，提示BMI指數(shù)可能是加重肺損傷的獨立危險因素； 3）不同BMI指數(shù)組別Angptl2蛋白表達存在差異，BMI的升高與Angptl2表達量的升高成正相關性； 4）肺損傷模型中肺泡壁塌陷程度越重、水腫液滲出越多的部位，Angptl2表達量也越多，提示Angptl2可能是導致BMI指數(shù)與肺損傷程度呈正相關性的炎癥蛋白。
[Abstract]:Objective : To investigate the pathological grading and W / D difference of lung tissues in lung injury models at different levels .
To investigate the expression of TNF - 偽 and IL - 1 in peripheral blood of rats with different levels of lung injury and their differences .
To investigate the level of NF - 魏B p65 mRNA and the nuclear translocation ratio of NF - 魏B P65 in lung tissues of different levels of lung injury .
The lung injury degree was evaluated by five indexes of W / D , pathological score of lung injury , TNF - 偽 , IL - 1尾 and NF - 魏B , and the correlation between BMI and lung injury was analyzed . It was expected to confirm that BMI was an independent risk factor for ALI ;
Based on the analysis of Angptl2mRNA and protein level in different BMI groups , the possible mechanism pathway of BMI and ALI was discussed from Angptl2 as the key lipid source inflammatory factor angle of obesity .

Methods : Thirty - six healthy male SD rats were randomly divided into four groups ( n = 9 ) , group C ( blank control group ) , OA group ( normal rat OA module group ) . The rats were fed with high fat diet ( 20 % lard , 10 % milk powder , 10 % eggs , 60 % ordinary feed ) .
After opening the chest , the lung tissue hemorrhage was observed with the naked eyes , the ratio of wet weight / dry weight ( W / D ) , lung tissue frozen section and pathology were observed . The left lung tissue was frozen and stored in the negative 80 鈩

本文編號：1699365