本文選題：VEGF　切入點(diǎn)：VEGFR-1　出處：《東北師范大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：VEGF屬于血管內(nèi)皮生長因子家族,VEGF與VEGFR-1和VEGFR-2相結(jié)合發(fā)揮生物學(xué)作用,VEGF調(diào)控內(nèi)皮細(xì)胞分化、增殖,并且調(diào)節(jié)血管生成,具有血管滲漏活性。肺臟是血管分布最多的器官之一,在肺臟的發(fā)育及成熟過程中VEGF發(fā)揮重要的作用。因此本文建立了肺特異性抑制VEGF的小鼠模型(phSPC-rtTRtg/+/VEGFtetO/tetO小鼠),利用飼喂強(qiáng)力霉素,可逆、肺特異抑制vegf基因的轉(zhuǎn)錄,對小鼠肺發(fā)育、肺結(jié)構(gòu)及肺功能的調(diào)節(jié)作用進(jìn)行了系統(tǒng)研究。實(shí)驗(yàn)分兩組進(jìn)行,即正在發(fā)育小鼠和成熟小鼠組,每組又分為飼喂四環(huán)素食料的轉(zhuǎn)基因組和野生型對照鼠組。經(jīng)過一段時間的加藥處理,通過實(shí)時定量PCR檢測了phSPC-rtTRtg/+/VEGFtetO/tetO成熟小鼠肺組織rtTR基因和vegf基因以及未成熟鼠肺vegf基因mRNA相對表達(dá)水平,其表達(dá)量(CT值)如下:成熟鼠rtTR基因循環(huán)數(shù)為tg(tg/+):22.05±0.14,wt(+/+):25.86±0.03,P(0.028)0.05,轉(zhuǎn)基因鼠rtTR基因相對表達(dá)量為野生型的11.02倍,表達(dá)顯著,但在腎臟組織中與野生型沒有區(qū)別。成熟鼠肺vegf基因循環(huán)數(shù)為tg(tg/+)1:23.79±0.02,tg(tg/+)2:22.47±0.036,wt(+/+):21.93±0.006,P1(0.004)0.01,P2(0.005)0.01,轉(zhuǎn)基因鼠vegf基因相對表達(dá)量分別為野生型的27%和51%,轉(zhuǎn)基因鼠vegf基因表達(dá)抑制效果極顯著。未成熟鼠肺vegf基因循環(huán)數(shù)為tg(tg/+)1:22.01±0.085,tg(tg/+)2:21.86±0.071,wt(+/+):21.6±0.02,P1(0.055)0.05,P2(0.176)0.05,轉(zhuǎn)基因鼠vegf基因相對表達(dá)量分別為野生型的85%和81%,雖對vegf的表達(dá)抑制效果沒有成鼠肺顯著,但vegf相對表達(dá)水平仍有所下降。此外western blot結(jié)果顯示肺組織VEGF蛋白表達(dá)量降低,由此可知我們的phSPC-rtTRtg/+/VEGFtetO/tetO小鼠的確能夠肺特異性抑制VEGF來模擬肺組織VEGF異常表達(dá)的生理狀態(tài)。在肺臟VEGF表達(dá)下調(diào)后,我們Real time PCR檢測了mRNA相對表達(dá)量,結(jié)果如下:成熟鼠肺中vegfr-1的循環(huán)數(shù)為tg(tg/+)1:24.41±0.178,tg(tg/+)2:24.98±0.004,wt(+/+):24.15±0.06,P1(0.462)0.05,P2(0.043)0.05,轉(zhuǎn)基因鼠vegfr-1的相對表達(dá)量分別為野生型的90%和73%,隨VEGF的下調(diào)vegfr-1的表達(dá)也下降,但下降程度存在個體差異。vegfr-2表達(dá)未受影響。Sp-c的循環(huán)數(shù)為tg(tg/+)1:18.89±0.018,tg(tg/+)2:16.63±0.012,wt(+/+):15.8±0.113,P1(0.027)0.05,P2(0.077)0.05,轉(zhuǎn)基因鼠Sp-c相對表達(dá)量分別為野生型的10%和38%,Sp-c基因的表達(dá)受VEGF表達(dá)下調(diào)的影響,表達(dá)量下降程度存在個體差異。而未成熟鼠肺中vegfr-1表達(dá)量不受影響,vegfr-2循環(huán)數(shù)為tg(tg/+):24.43±0.025,wt(+/+):23.95±0.022,P(0.004)0.05,轉(zhuǎn)基因鼠vegfr-2相對表達(dá)量為野生型的85%,表達(dá)顯著下降。未成熟鼠肺Sp-c表達(dá)量并未受VEGF下調(diào)的影響。我們對phSPC-rtTRtg/+/VEGFtetO/tetO鼠的肺組織結(jié)構(gòu)進(jìn)行了分析(HE染色),結(jié)果發(fā)現(xiàn)與野生型相比,轉(zhuǎn)基因鼠VEGF受到抑制之后成熟鼠肺肺泡化程度不完全,肺間質(zhì)細(xì)胞增多,肺泡隔膜變厚,肺泡腔變大。肺支氣管上皮細(xì)胞同樣受影響,VEGF表達(dá)下降后支氣管上皮細(xì)胞排布不整齊,氣管絨毛變短,這些結(jié)果表明VEGF促進(jìn)成熟鼠肺結(jié)構(gòu)的形成和維持。與此相反,VEGF限制未成熟鼠肺的發(fā)育。結(jié)果發(fā)現(xiàn)與野生型相比,轉(zhuǎn)基因鼠肺VEGF抑制之后反而會促進(jìn)其肺泡化,肺泡隔膜變薄,氣管分支完全。另外支氣管上皮細(xì)胞分布變均勻,氣管絨毛變短,血管肌肉層變厚。此外我們還檢測了phSPC-rtTRtg/+/VEGFtetO/tetO鼠的呼吸速率,發(fā)現(xiàn)肺特異性抑制VEGF之后小鼠呼吸變短促,提高呼吸頻率和呼吸速率,消耗單位體積空氣所用時間變短,這說明VEGF對小鼠肺臟呼吸功能也具有影響。結(jié)論:(1)小鼠肺特異抑制VEGF后導(dǎo)致肺組織形態(tài)結(jié)構(gòu)、功能發(fā)生變化,這表明VEGF對小鼠肺臟發(fā)育及成熟具有重要的作用,其作用隨肺臟的發(fā)育階段不同而有所不同,因此在一些疾病的診斷中可通過檢測VEGF表達(dá)水平來進(jìn)行預(yù)后。(2)VEGF調(diào)控的呼吸作用,抑制VEGF會使小鼠呼吸短促,呼吸頻率增加,增加呼吸速率,因此VEGF與呼吸性炎癥的發(fā)生有關(guān)聯(lián)。
[Abstract]:VEGF belongs to the vascular endothelial growth factor family, VEGF and VEGFR-1 combination of VEGFR-2 and its biological effects, regulation of endothelial cell differentiation, proliferation of VEGF, and the regulation of angiogenesis, vascular leakage has activity. The lung is one of the organs most vascular distribution, in the development and maturation of lung in VEGF play an important role. It is established in this paper. A mouse model of lung specific inhibition of VEGF (phSPC-rtTRtg/+/VEGFtetO/tetO mice), by feeding doxycycline, reversible suppression of VEGF gene transcription in mouse lung specific lung development, regulation of lung structure and lung function were studied. The experiments were divided into two groups, namely developing mice and adult mice group, each group was divided into transgenic food fed tetracycline and wild type control mice group. After drug treatment for a period of time, through real-time quantitative PCR detection of phSPC-rtTRtg/+/VEGFte tO/tetO鎴愮啛灝忛紶鑲虹粍緇噐tTR鍩哄洜鍜寁egf鍩哄洜浠ュ強(qiáng)鏈垚鐔熼紶鑲簐egf鍩哄洜mRNA鐩稿琛ㄨ揪姘村鉤,鍏惰〃杈鵑噺(CT鍊，

本文編號：1673741