本文關(guān)鍵詞： Ac-SDKP 特發(fā)性肺間質(zhì)纖維化(IPF) 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(ERS) 上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)　出處：《山西醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

【摘要】：目的:通過(guò)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)和體外實(shí)驗(yàn),探討特發(fā)性肺間質(zhì)纖維化(IPF)病程中,Ac-SDKP通過(guò)抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激進(jìn)而干預(yù)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化過(guò)程而延緩肺纖維化發(fā)展的作用機(jī)制。方法:體內(nèi)實(shí)驗(yàn):將24只健康雄性C57BL/6小鼠(體重25±2g)隨機(jī)分為3組:假手術(shù)對(duì)照組(N組,n=8只)、肺纖維化模型組(M組,n=8只)、肺纖維化+Ac-SDKP干預(yù)治療組(P組,n=8只)。M組及P組小鼠采用氣管內(nèi)注入博來(lái)霉素(5 mg/kg,共配制成50μl混合溶液)法制備小鼠肺纖維化模型,21天后于P組小鼠腹腔內(nèi)埋入Ac-SDKP藥物微量釋放泵(內(nèi)含Ac-SDKP混合溶液:Ac-SDKP 800 ug.kg-1.d-1,冰乙酸0.1 M,卡托普利100 mg.kg-1.d-1,溶液配制劑量經(jīng)查詢(xún)大量國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)而定),持續(xù)干預(yù)21天。N組造模方法同M組,氣管內(nèi)注入等體積(50μl)0.9%氯化鈉生理鹽水。N組和M組小鼠于造模完成后第21天處死,而P組小鼠于Ac-SDKP干預(yù)治療后第21天處死,取肺組織,染色并觀察其病理學(xué)變化;羥脯氨酸含量測(cè)定,判斷肺纖維化模型制備是否成功并評(píng)估肺組織纖維化嚴(yán)重程度;Western Blot、免疫組化法檢測(cè)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白GRP78、CHOP,間質(zhì)組織標(biāo)志物Vimentin,上皮組織標(biāo)志物E-cadherin蛋白水平表達(dá)的變化。體外實(shí)驗(yàn):體外培養(yǎng)人Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞株(A549細(xì)胞),并于無(wú)血清同步化處理24小時(shí)后給予TGF-β干預(yù)24小時(shí),模擬體外肺纖維化病理改變及EMT相關(guān)細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化,并于給予Ac-SDKP(80 mmol/L)干預(yù)24小時(shí)后收集細(xì)胞,細(xì)胞分組如下:正常對(duì)照組(N組)、TGF-β干預(yù)組(T組)、TGF-β+Ac-SDKP干預(yù)組(T+A組)、單獨(dú)ac-sdkp干預(yù)組(a組)。使用倒置相差顯微鏡觀察各組細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化并拍照,qrt-pcr檢測(cè)各組細(xì)胞中g(shù)rp78、chop、vimentin、e-cadherin等指標(biāo)mrna水平表達(dá)的變化。結(jié)果:體內(nèi)實(shí)驗(yàn):1、肉眼觀察:n組小鼠肺組織呈淡粉色,表面及切面光滑,未見(jiàn)結(jié)節(jié)形成及明顯出血點(diǎn);m組小鼠雙肺色澤晦暗,表面及切面均可見(jiàn)散在小結(jié)節(jié)及大小不等出血點(diǎn);p組小鼠肺組織表面亦可見(jiàn)上述異常表現(xiàn),但較m組小鼠變化為輕。2、he及masson染色:m組小鼠肺組織出現(xiàn)明顯纖維化改變。與m組相比,p組小鼠肺纖維化程度有所減輕,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。3、羥脯氨酸含量測(cè)定(hyp):m組小鼠肺組織hyp含量較n組明顯升高;p組較m組降低,而較n組仍有所升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。4、免疫組化結(jié)果:(1)n組小鼠肺組織中,e-cadherin表達(dá)部位及表達(dá)量較多,m組較n組表達(dá)明顯減少,p組e-cadherin陽(yáng)性表達(dá)量居于n組與m組之間,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);(2)n組小鼠肺組織中,vimentin僅少量陽(yáng)性表達(dá)且表達(dá)范圍較小,而m組中,vimentin的表達(dá)量較n組明顯增加且廣泛表達(dá)于肺泡細(xì)胞胞漿及肺組織間質(zhì)基質(zhì)中,p組vimentin陽(yáng)性表達(dá)量居于n組與m組之間,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);(3)chop及grp78廣泛表達(dá)于支氣管上皮細(xì)胞、肺泡上皮細(xì)胞及血管內(nèi)皮細(xì)胞,且m組表達(dá)量均高于n組,而p組表達(dá)量則介于n組與m組之間(p0.05)。5、westernblot結(jié)果:與n組比較,m組chop、grp78、vimentin表達(dá)量均升高;e-cadherin的表達(dá)量降低;而p組各指標(biāo)蛋白陽(yáng)性表達(dá)量均介于n組與m組之間,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。體外實(shí)驗(yàn):1、a549細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化:經(jīng)tgf-β干預(yù)后,細(xì)胞呈紡錘樣、成纖維細(xì)胞樣形態(tài)改變。2、qrt-pcr結(jié)果:與n組比較,m組chop、grp78、vimentinmrna表達(dá)量均升高,e-cadherinmrna的表達(dá)量降低,而p組各指標(biāo)mrna表達(dá)量均介于n組與m組之間,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。結(jié)論:在肺間質(zhì)纖維化發(fā)病過(guò)程中,ac-sdkp可能通過(guò)抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(ers)減緩上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT),從而發(fā)揮其抗肺間質(zhì)纖維化的作用。
[Abstract]:Objective : To investigate the effect of Ac - SDKP on the development of idiopathic pulmonary fibrosis ( IPF ) by in vivo and in vitro experiments . Methods : Twenty - four healthy male C57BL / 6 mice ( 25 鹵 2g ) were randomly divided into three groups : sham operation control group ( n = 8 ) , pulmonary fibrosis model group ( M group , n = 8 ) , pulmonary fibrosis + Ac - SDKP intervention group ( group P , n = 8 ) . The changes of expression of grp78 , CHOP , vimentin , e - cadherin in group M and group M were determined by Western Blot and immunohistochemistry . The expression of E - cadherin in group p group was significantly higher than that in n group ( p < 0.05 ) . The expression of e - cadherin in group p group was significantly higher than that in group n and m group ( p < 0.05 ) . Conclusion : In the pathogenesis of pulmonary interstitial fibrosis , ac - sdkp may play an important role in resisting pulmonary interstitial fibrosis by inhibiting the endoplasmic reticulum stress ( ers ) to slow the epithelial - mesenchymal transition ( EMT ) .

【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R563

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 ;Antifibrotic effect of N-acetyl-seryl-aspartyl-lysyl-proline on bile duct ligation induced liver fibrosis in rats[J];World Journal of Gastroenterology;2012年37期

，

本文編號(hào)：1524987