本文關(guān)鍵詞： 組織蛋白酶B 矽肺 差異表達(dá)基因 電子克隆　出處：《中國(guó)工業(yè)醫(yī)學(xué)雜志》2014年02期 　論文類(lèi)型：期刊論文

【摘要】：目的探討差異表達(dá)基因組織蛋白酶B在大鼠矽肺模型中的作用。方法對(duì)以往經(jīng)抑制消減雜交篩選得到的一條編號(hào)為ES110708的差異表達(dá)序列標(biāo)簽(EST)作為種子序列,通過(guò)電子克隆進(jìn)行延伸,并在大鼠矽肺模型中用RT-PCR方法進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果篩選得到的大鼠矽肺差異表達(dá)EST經(jīng)電子克隆延伸得到了含有完整開(kāi)放讀碼框架(ORF)的cDNA序列,長(zhǎng)度為1977bp,比原來(lái)的EST片段(172bp)延伸了1805 bp。其ORF預(yù)測(cè)為1020 bp,符合Kozak規(guī)則。將ORF序列進(jìn)行同源性檢索,其與序列號(hào)為NM022597.2的cDNA部分序列完全同源,說(shuō)明所測(cè)ORF屬于序列NM022597.2。該序列代表的基因是組織蛋白酶B。經(jīng)RT-PCR驗(yàn)證,實(shí)驗(yàn)組大鼠肺組織Cathepsin B mRNA表達(dá)量明顯上調(diào)。15 d、30 d、60 d時(shí),其吸光度(A)值分別為對(duì)照組的4.133、6.639、4.981倍,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論電子克隆能有效延伸EST序列直至全長(zhǎng)cDNA序列,差異表達(dá)基因組織蛋白酶B可能參與了矽肺的發(fā)生與發(fā)展。
[Abstract]:Objective to investigate the role of differentially expressed cathepsin B (cathepsin B) in rat model of silicosis. Methods A differentially expressed sequence label named ES110708, which was selected by suppression subtractive hybridization, was used as seed sequence. The rat silicosis differential expression EST was amplified by electronic cloning and verified by RT-PCR method in the rat silicosis model. Results the cDNA sequence with complete open reading frame was obtained by electronic cloning extension of rat silicosis differential expression EST. The length is 1977bp, which extends 1805 BP compared with the original EST fragment 172bp. its ORF prediction is 1020 BP, which conforms to the Kozak rule. The homology search of ORF sequence is completely homologous to the partial sequence of cDNA with sequence number NM022597.2. The results showed that the ORF belonged to the sequence NM022597.2.The gene represented by this sequence was cathepsin B. the expression of Cathepsin B mRNA in lung tissue of experimental group was significantly up-regulated at 30 d ~ 60 d, and the absorbance of Cathepsin B was 4.981 times higher than that of control group, respectively, after 30 d ~ (60 d) upregulation, as compared with that of control group, NM022597.2.The expression of Cathepsin B mRNA in lung tissue of experimental group was 4.133 times higher than that of control. Conclusion Electronic cloning can effectively extend the EST sequence to the full-length cDNA sequence, and the differentially expressed cathepsin B may be involved in the genesis and development of silicosis.
【作者單位】： 河北聯(lián)合大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病理學(xué)系;唐山市眼科醫(yī)院病理科;淄博市中心醫(yī)院病理科;
【基金】：河北省科學(xué)技術(shù)研究與發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(09276192D)
【分類(lèi)號(hào)】：R135.2

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本文編號(hào)：1523374