發(fā)布時(shí)間：2018-02-12 23:55

  本文關(guān)鍵詞： IRAK-M 香煙煙霧 肺部炎癥 T細(xì)胞 巨噬細(xì)胞 樹(shù)突狀細(xì)胞　出處：《北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院》2017年博士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

【摘要】：研究背景香煙煙霧被認(rèn)為是慢性阻塞性肺疾病發(fā)病的首要危險(xiǎn)因素,可以通過(guò)活化固有免疫及適應(yīng)性免疫細(xì)胞(比如,樹(shù)突狀細(xì)胞,巨噬細(xì)胞,T細(xì)胞,上皮細(xì)胞等)誘導(dǎo)氣道炎癥。IRAK-M廣泛表達(dá)上述免疫細(xì)胞,被認(rèn)為可負(fù)性調(diào)控TLR介導(dǎo)的NF-κB的活化。研究證實(shí)IRAK-M在多種疾病模型(比如肺纖維化,心肌梗塞等)中起到負(fù)性調(diào)節(jié)作用。但是結(jié)果并不完全一致。IRAK-M在機(jī)體免疫調(diào)節(jié)中的不同角色和其在香煙煙霧或者脂多糖LPS誘導(dǎo)肺部炎癥的作用尚未知。目的本研究旨在探討IRAK-M在香煙煙霧或LPS暴露誘導(dǎo)肺部炎癥的作用及機(jī)制。方法1、急性模型:將無(wú)特定病原體雄性小鼠(8-10周)隨機(jī)分為四組:正常對(duì)照組(Room Air)、香煙暴露組(CS)、脂多糖暴露組(LPS)以及香煙暴露+LPS組(CS+LPS)。(1)正常對(duì)照組小鼠暴露于過(guò)濾空氣,第四天霧化吸入生理鹽水;(2)CS組小鼠每天置于艙內(nèi),每次5支香煙,每天4次,兩次間隔30分鐘,連續(xù)暴露3天。第四天霧化吸入生理鹽水;(3)LPS組小鼠暴露于過(guò)濾空氣,第四天給予LPS霧化吸入(100μg/ml)半小時(shí);(4)LPS+CS組小鼠香煙暴露三天后第四天霧化吸入LPS,其他條件同CS及LPS組。各組分別包括WT和IRAK-M-/-小鼠。亞急性模型:小鼠每天置于艙內(nèi)給予香煙煙霧暴露或者空氣暴露,每次5支香煙,每天4次,兩次間隔30分鐘,連續(xù)暴露7周。2、采用Flexivent小鼠肺功能儀,測(cè)量小鼠氣道阻力。3、通過(guò)HE染色觀察肺部形態(tài)、炎癥及氣道周?chē)z原蛋白沉積情況,并進(jìn)行病理評(píng)分。4、使用光學(xué)顯微鏡計(jì)數(shù)支氣管肺泡灌洗液(BALF)中炎癥細(xì)胞總數(shù)以及通過(guò)細(xì)胞甩片吉姆薩染色進(jìn)行細(xì)胞分類(lèi)。5、分別采用Real-Time PCR方法及多因子檢測(cè)小鼠肺組織中炎癥因子mRNA及蛋白表達(dá)水平。6、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)小鼠肺組織及脾臟T細(xì)胞亞群分布。7、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)小鼠肺組織樹(shù)突狀細(xì)胞及巨噬細(xì)胞表面分子(CD11B,CD40,CD80,CD86,CD83)表達(dá)。結(jié)果第一部分IRAK-M對(duì)急性香煙煙霧或者LPS暴露誘導(dǎo)肺部炎癥免疫調(diào)節(jié)作用1、氣道阻力(Rn)CS組、LPS組與正常對(duì)照組比較,氣道阻力略增加,但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。CS+LPS組較正常對(duì)照組增加(P0.0001)。且CS+LPS組中IRAK-M-/-小鼠較WT小鼠氣道阻力增加(p=0.052),其他組中IRAK-M-/-小鼠較WT小鼠氣道阻力無(wú)差異。2、肺部炎癥肺組織HE染色顯示,相較于正常對(duì)照組,CS組、LPS組、CS+LPS小鼠肺組織上皮損傷、小氣道壁及肺實(shí)質(zhì)炎細(xì)胞浸潤(rùn)。但只有CS+LPS中IRAK-M-/-小鼠較WT小鼠肺部炎癥增加較明顯。3、BALF炎癥細(xì)胞總數(shù)相較于正常對(duì)照組,CS組、LPS組、CS+LPS組小鼠BALF中炎癥細(xì)胞總數(shù)增加(p0.05),但僅在CS+LPS組中,IRAK-M-/-小鼠較WT小鼠肺部炎癥細(xì)胞總數(shù)(1812±131×103/mlvs1149±132×103/ml;p0.01)明顯增加,以中性粒細(xì)胞數(shù)及淋巴細(xì)胞數(shù)增加為主。4、肺組織趨化因子或細(xì)胞因子蛋白表達(dá)水平與正常對(duì)照組相比CS+LPS組肺組織中炎癥因子蛋白水平明顯升高。在CS+LPS組中,IRAK-M-/-小鼠較WT小鼠肺組織中Th1相關(guān)細(xì)胞因子(TNF-α,IL-12,IFN-β,IFN-γ)、Th17(IL17A,IL6)相關(guān)細(xì)胞因子和上皮細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子(IL1β,IL-1α,GM-CSF,MCP-1)明顯升高(P0.001)。5、T細(xì)胞亞群與正常對(duì)照組相比CS+LPS組小鼠肺組織中Th17和Treg細(xì)胞比例升高(p0.05)。CS+LPS組中,IRAK-M-/-較WT小鼠肺組織中Th17細(xì)胞比例升高(4.32%±0.28%vs 2.54%±0.32%),Treg 比例(4.99%±0.46%vs 6.65%±0.42%)降低。6、樹(shù)突狀細(xì)胞及巨噬細(xì)胞表面分子表達(dá)CS+LPS組中IRAK-M-/-較WT小鼠肺組織樹(shù)突狀細(xì)胞表面CD40和CD86明顯增加(P0.05),其他表面分子(CD11B,CD80,CD83)無(wú)明顯差異。同時(shí)巨噬細(xì)胞表面CD40增加(P0.05),其他表面分子(CD11B,CD80,CD83,CD86)無(wú)明顯差異。第二部分IRAK-M對(duì)亞急性香煙煙霧暴露誘導(dǎo)肺部炎癥的免疫調(diào)節(jié)作用1、氣道阻力CS組與正常對(duì)照組比較,氣道阻力明顯升高。在CS組中,IRAK-M-/-小鼠較WT小鼠氣道阻力下降(P0.05)。2、肺部炎癥CS組與正常對(duì)照組比較,肺組織中炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、上皮損傷明顯升高。在CS組中,IRAK-M-/-小鼠較WT小鼠炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、上皮損傷減少。3、BALF炎癥細(xì)胞總數(shù)和正常對(duì)照組比較,CS組中BALF炎癥細(xì)胞總數(shù)明顯升高(P0.001)。在CS組中,IRAK-M-/-小鼠較 WT 小鼠 BALF 炎癥細(xì)胞總數(shù)(122.8±9.2 ×1 03/ml vs 202.8±22×103/ml;p0.01)減少。4、肺組織趨化因子或細(xì)胞因子蛋白表達(dá)水平和正常對(duì)照組比較,CS組中肺組織中炎癥因子蛋白水平明顯升高。在CS組中,IRAK-M-/-小鼠較WT小鼠肺組織中Th1相關(guān)細(xì)胞因子(TNF-α,IL-12,IFN-β,IFN-γ)、Th17細(xì)胞(IL17A,IL6)相關(guān)細(xì)胞因子和上皮細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子(IL1β,IL-1α,GM-CSF,MCP-1)明顯降低(P0.001)。5、T細(xì)胞亞群與正常對(duì)照組相比CS組小鼠肺組織中Th17和Treg細(xì)胞比例升高(p0.05)。CS組中,IRAK-M-/-較WT小鼠肺組織中Th17細(xì)胞比例降低(9.8%±0.4%vs 7.6%±0.6%;p0.05),Treg 比例(10.5%±1.0%vs15.0%±0.9%;p0.001)升高。6、樹(shù)突狀細(xì)胞及巨噬細(xì)胞表面分子表達(dá)CS組中IRAK-M-/-較WT小鼠肺組織樹(shù)突狀細(xì)胞表面CD11B減少(P0.05),其他表面分子(CD40,CD86,CD80,CD83)無(wú)明顯差異。同時(shí)巨噬細(xì)胞表面CD11B和CD86表達(dá)下調(diào)(P0.05),其他表面分子(CD80,CD83,CD40)無(wú)明顯差異。結(jié)論IRAK-M在CS或LPS誘導(dǎo)肺部炎癥中的作用效應(yīng)可能與暴露時(shí)長(zhǎng)有關(guān)。本研究證實(shí),在急性煙草和LPS暴露小鼠模型中,IRAK-M通過(guò)下調(diào)肺組織中Th17比例,促進(jìn)Treg細(xì)胞分化及下調(diào)DCs和巨噬細(xì)胞表面分子(CD40,CD86)表達(dá)進(jìn)一步減輕肺部炎癥。反之在亞急性香煙暴露模型中,IRAK-M可通過(guò)上調(diào)節(jié)肺組織中Th17細(xì)胞分化,上調(diào)Treg比例及DCs和巨噬細(xì)胞表面分子(CD11B,CD86)表達(dá)進(jìn)一步加重肺部炎癥。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R563

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本文編號(hào)：1506854