本文關(guān)鍵詞： 慢性阻塞性肺疾病 吸煙 NE al-AT 布地奈德 熒光定量PCR　出處：《河北醫(yī)科大學(xué)》2012年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的：觀察中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶（neutronphil elastase，NE）和α1-抗胰蛋白酶（alpha1antitrypsin，al-AT）在慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)大鼠肺組織及肺泡灌洗液中的表達(dá)，探討NE和al-AT在COPD發(fā)病中的作用及吸入糖皮質(zhì)激素對(duì)其的影響。 方法： 1采用煙熏法建立COPD動(dòng)物模型。將30只大鼠分為三組:對(duì)照組、煙霧暴露組及布地奈德組。除對(duì)照組外，另外兩組大鼠每日在熏煙箱內(nèi)煙霧暴露，每日2次，每一次吸煙20支（1h），持續(xù)總共4個(gè)月，在最后一個(gè)月給予布地奈德組布地奈德霧化治療。測量大鼠體重、肺功能、左右心室比值、支氣管肺泡灌洗液（bronchveolarlavage fluid，BALF）中白細(xì)胞數(shù)量及分類，并且對(duì)肺組織病理形態(tài)學(xué)進(jìn)行觀察。 2采用ELISA法檢測BALF中NE和al-AT的蛋白表達(dá)，采用免疫組化方法對(duì)大鼠肺組織al-AT和NE蛋白的表達(dá)進(jìn)行檢測，，應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄PCR方法（reverse transcription PCR，RT-PCR）對(duì)肺組織中al-AT mRNA和NE mRNA表達(dá)進(jìn)行測定，觀察布地奈德對(duì)al-ATmRNA和NE mRNA表達(dá)的影響。 結(jié)果： 1三組大鼠實(shí)驗(yàn)前體重?zé)o明顯差異（P0.05）。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后統(tǒng)計(jì)三組大鼠體重有顯著差異（P0.01）：與對(duì)照組比較煙霧暴露組大鼠體重下降（P0.01）；布地奈德組大鼠體重也有明顯下降（P0.01），但較煙霧暴露組體重增加(P0.05）。大鼠肺功能檢測結(jié)果顯示Ri、Re、FEV0.3/FVC、Cdy三組之間差異都具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（分別P0.01, P0.05, P0.05, P0.05）。煙霧暴露組與對(duì)照組比較FEV0.3/FVC、Cdy明顯下降(均P0.01)，Re、Ri明顯升高（P0.01,P0.05）；與煙霧暴露組比較，布地奈德治療后Re、 Cdy、FEV0.3/FVC均有改善（均P0.05），Ri雖下降但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。煙霧暴露組與對(duì)照組比較，BALF中白細(xì)胞總數(shù)及中性粒細(xì)胞百分率顯著增多（均P0.01），淋巴百分率下降（均P0.05），內(nèi)襯間隔（MLI）及支氣管壁厚/外徑（bronchial wallthickness/diameter, BWT/D）顯著增加（P0.01)，平均肺泡數(shù)（MAN）顯著降低（P0.01)。布地奈德治療后與煙霧暴露組比較，白細(xì)胞總數(shù)下降明顯（P0.01），各分類細(xì)胞百分比、MAN、MLI及BWT/D無明顯改變（均P0.05）。 2ELISA試劑盒檢測三組大鼠BALF中al-AT和NE的水平。煙霧暴露組與對(duì)照組比較，BALF中al-AT的蛋白量降低（P0.01），而NE的蛋白水平升高（P0.01）。布地奈德治療后與煙霧暴露組比較，al-AT的蛋白量略升高，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05），NE的蛋白量下降（P0.01）。 3應(yīng)用免疫組化方法研究al-AT和NE在肺組織中表達(dá)。與對(duì)照組比較，煙霧暴露組肺組織al-AT的表達(dá)降低（P0.01），NE表達(dá)升高（P0.01）。與煙霧暴露組比較，布地奈德治療后al-AT的蛋白量略升高，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05），NE的蛋白量下降（P0.01）。 4應(yīng)用RT-PCR檢測al-AT mRNA和NE mRNA在大鼠肺組織中表達(dá)。煙霧暴露組al-AT mRNA的表達(dá)較對(duì)照組降低（P0.01），是對(duì)照組的（0.55±0.057）倍；與煙霧暴露組比較，布地奈德治療后al-AT mRNA升高（P0.05），是對(duì)照組的（0.69±0.08）倍。煙霧暴露組NE mRNA的表達(dá)升高（P0.01），是對(duì)照組的(5.18±1.15)倍。與煙霧暴露組比較，布地奈德治療后NE mRNA降低（P0.05），是對(duì)照組的(2.74±0.90)倍。 結(jié)論： 1大鼠被動(dòng)吸煙4個(gè)月可成功建立COPD動(dòng)物模型。給予布地奈德治療后體重、肺泡內(nèi)炎性細(xì)胞、肺功能等指標(biāo)較前改善。 2al-AT和NE在COPD發(fā)生、發(fā)展過程中有明顯的變化及聯(lián)系，在COPD發(fā)生發(fā)展中起著重要作用。布地奈德治療通過改善兩者失衡狀態(tài)，可能是治療COPD有效的機(jī)制之一。
[Abstract]:Objective: To observe the effects of neutrophil elastase (neutronphil elastase, NE 1-) and alpha antitrypsin (alpha1antitrypsin, al-AT) in patients with chronic obstructive pulmonary disease (chronic obstructive pulmonary disease, COPD) in rat lung tissue and bronchoalveolar lavage fluid in the expression and role of NE and al-AT in the pathogenesis of COPD and the effects of inhalation of sugar glucocorticoid on it.
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本文編號(hào)：1495114