發(fā)布時間：2018-01-02 09:16

  本文關(guān)鍵詞：嗜酸性粒細胞促進造血干細胞動員的調(diào)控機制研究　出處：《浙江大學(xué)》2015年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： Eos 哮喘 干細胞 動員 ROS

【摘要】：背景支氣管哮喘是一種由過敏原引起的由嗜酸性粒細胞(eosinophil, Eos),肥大細胞,T淋巴細胞等多種細胞和細胞組分參與的氣道慢性炎癥性疾病,其臨床特點為氣道高反應(yīng)性(hyperresponsiveness, AHR),以及可逆性的氣流受限。導(dǎo)致其病理的根本原因是Eos的氣道局部的大量聚集,且Eos的數(shù)量與哮喘的嚴重程度相關(guān)。目前全球有3億多人患有哮喘,中國哮喘患者已超過4000萬。哮喘給家庭以及整個社會產(chǎn)生了嚴重的經(jīng)濟負擔(dān)。目前以吸入型糖皮質(zhì)激素為首選的治療方案可以較好的控制哮喘的癥狀,但尚不能完全根治。目前對哮喘發(fā)病機制,病理學(xué)以及防治仍然是本領(lǐng)域研究的挑戰(zhàn),更好的研究Eos,并控制Eos為主的炎癥也是本領(lǐng)域研究的熱點。Eos是外周血的成熟白細胞的一種,呈橢圓形,因其胞漿內(nèi)部充滿粗大、整齊、均勻、排列緊密的嗜酸性顆粒而命名。正常人血液中嗜酸性粒細胞的水平較低,比例為白細胞總數(shù)的0.5%-5%,絕對值為0.05-0.5*10^9/L,Eos數(shù)量少但是作用非常重要。目前已經(jīng)有很多關(guān)于Eos在哮喘中的病理機制研究,包括：聚集在氣道周圍的Eos釋放其特異性的胞質(zhì)顆粒蛋白如主要堿性蛋白-1 (major basic protein-1, MBP-1),嗜酸性粒細胞陽離子蛋白(eosinophil cationic protein, ECP)等破壞氣道上皮細胞等局部組織；釋放白介素-13 (interlukin, IL-13), IL-4等炎癥因子,刺激杯狀細胞增生,粘液高分泌以及AHR的產(chǎn)生；長期的慢性炎癥過程中,Eos還分泌轉(zhuǎn)化生長因子-β(Transforming growth factor-β, TGF-β)等與組織修復(fù)有關(guān)的蛋白,導(dǎo)致局部平滑肌增生,纖維沉積等病理現(xiàn)象。除參與哮喘的病理過程以外,Eos還在抗寄生蟲感染的宿主免疫反應(yīng)中其重要作用,包括分泌MBP直接破壞寄生蟲細胞壁,分泌相應(yīng)抗體而殺傷。Eos還是一種重要的免疫調(diào)節(jié)細胞,其功能包括激活肥大細胞,促進其分泌組胺和前列腺素等,參與后續(xù)的過敏性反應(yīng)；以及處理并提呈一系列微生物,病毒和寄生蟲抗原擔(dān)任抗原提呈細胞的角色；Eos還能調(diào)節(jié)T淋巴細胞的功能,活化的Eos可以促進免疫反應(yīng)中T細胞的增殖,并通過提呈可溶性抗原給CD4+T細胞來調(diào)節(jié)Th1/2的極化。Eos還參與腫瘤的免疫反應(yīng)過程,如通過招募CD8+的T細胞來促進腫瘤細胞的殺傷作用等。Eos由造血干細胞在一系列復(fù)雜轉(zhuǎn)錄因子和細胞因子的調(diào)控之下定向分化而來,Eos是造血干細胞的終末成熟血細胞。二者之間除分化關(guān)系外并無其他研究報道。本團隊前期研究發(fā)現(xiàn)在小鼠的哮喘模型中,出現(xiàn)骨髓與外周脾臟干細胞LSK(lineage-Sca-l+c-kit+)數(shù)量的增加,即干細胞的增殖和動員現(xiàn)象。而在Eos缺失的Phil小鼠中,則發(fā)現(xiàn)干細胞數(shù)量的減少。提示Eos可能反過來對其上級的造血干細胞有一種促進動員調(diào)控作用。基于此假設(shè),我們利用了IL-5過表達導(dǎo)致的Eos大量存在的NJ.1638小鼠與Phil小鼠進行了一系列骨髓移植,體外共培養(yǎng)體系等實驗,深入的研究了Eos與造血干細胞之間的調(diào)控關(guān)系。目的明確Eos對干細胞動員的調(diào)控作用,并進一步研究其機制。方法1.整體模型利用6-10周齡的同窩生的野生型(Wild Type, WT)小鼠與Phil小鼠,雌雄不限,以雞卵清蛋白(OVA)致敏以及霧化攻擊,建立經(jīng)典的哮喘模型,以多色流式分析法標記骨髓與脾臟來源的LSK水平的干細胞,觀察其增殖與動員的現(xiàn)象；分析NJ.1638體內(nèi)的干細胞水平及其ROS水平,觀察Eos大量增加對干細胞的影響；將NJ.1638與Phil小鼠雜交后分析骨髓與外周的干細胞水平,明確Eos對干細胞的調(diào)控關(guān)系；對WT和Phil小鼠腹腔注射經(jīng)典的骨髓動員劑G-CSF,觀察干細胞動員的現(xiàn)象。2.骨髓移植進行WT小鼠和NJ.1638小鼠之間的非競爭性和競爭性骨髓移植方案,觀察Eos與干細胞活化的關(guān)系及其干細胞的分化功能；利用DCFH FA熒光染料標記活性氧自由基(ROS),檢測ROS水平；利用流式分選的方法純化LSK,與Eos進行體外培養(yǎng),觀察Eos對LSK的影響,找尋其機制。結(jié)果1.哮喘模型中,Eos的缺失導(dǎo)致干細胞動員現(xiàn)象的減弱。表現(xiàn)為與WT小鼠相比,Phil小鼠脾臟中干細胞數(shù)量增加減少。2.NJ.1638骨髓中LSK數(shù)量明顯減少,而脾臟中LSK的數(shù)量則高于骨髓,提示干細胞動員的現(xiàn)象；NJ.1638體內(nèi)的干細胞呈高ROS水平。3.NJ.1638與Phil小鼠雜交后體內(nèi)高IL-5但缺乏Eos的小鼠中,干細胞動員的現(xiàn)象消失,提示Eos與干細胞動員直接相關(guān)。4.Eos不影響G-CSF導(dǎo)致的骨髓動員現(xiàn)象。5.NJ.1638與WT小鼠的骨髓移植實驗說明Eos數(shù)量的變化與干細胞動員的趨勢直接相關(guān),且NJ.1638來源的干細胞分化能力下降。6.NJ.1638來源的干細胞歸巢能力并沒有下降。7.Eos與流式分選后的LSK共培養(yǎng)可以促進其ROS的產(chǎn)生。結(jié)論Eos數(shù)量的增加可以促進干細胞的動員,是通過增加干細胞的ROS水平導(dǎo)致的。
[Abstract]:Backgroundasthma is a caused by allergens by eosinophils (eosinophil, Eos), mast cells, T lymphocytes and other cells and cellular components involved in chronic inflammatory airway disease, the clinical features of airway hyperresponsiveness (hyperresponsiveness, AHR), and reversible airflow limitation at all. The cause of the pathology of Eos is the accumulation of local airway, and the severity of asthma and the number of the Eos. There are currently more than 300 million people worldwide suffer from asthma, Chinese asthma has more than 40 million. Asthma caused serious economic burden to the family and the society. At present, inhaled corticosteroids for the treatment of asthma control the preferred scheme can better the symptoms, but still can not completely cure. The pathogenesis of asthma, pathology and prevention is still the research challenges, research Eos better, A kind of mature white blood cells, inflammation is also the hotspot of.Eos research field control and Eos peripheral blood of the oval, because its internal cytoplasm is filled with thick, neat, uniform, closely spaced eosinophilic granules named. Eosinophils in blood of healthy people in the low level, the proportion of the total number of white blood cells 0.5%-5%, the absolute value of 0.05-0.5*10^9/L, the number of Eos is low but the effect is very important. At present, there has been a lot of study on pathological mechanism of Eos in asthma, including: the aggregation of cytoplasmic granule protein release and its specificity in the airway of Eos such as major basic protein -1 (major basic protein-1, MBP-1), eosinophil eosinophil cationic protein (eosinophil cationic, protein, ECP) of local tissue damage of airway epithelial cells; release of interleukin -13 (Interlukin, IL-13), IL-4 and other inflammatory cytokines, stimulated proliferation of goblet cells, mucus The production of AHR and hypersecretion; chronic inflammation in the process of long-term, Eos secretion of transforming growth factor beta (Transforming beta growth factor-, TGF-) and tissue repair related protein, leading to local smooth muscle hyperplasia, fibrous deposition and other pathological phenomena. In addition to the pathological process in asthma, Eos is still the host immune response against parasites infection plays a role, including the secretion of MBP parasites directly destroy the cell wall, and the secretion of antibodies against.Eos is a kind of important immune cells, its function include the activation of mast cells, promote the secretion of histamine and prostaglandins, involved in allergic reactions and subsequent treatment; and presenting a series of microorganism, virus and parasite antigen as antigen-presenting cells of the role; Eos can regulate the function of T lymphocytes, activated Eos can promote immune response in T cell proliferation, and The immune response by polarized.Eos presenting soluble antigen to CD4+T cells to regulate Th1/2 is also involved in cancer, such as through the recruitment of CD8+ T cells to promote tumor cell killing effect of.Eos hematopoietic stem cells in the regulation by a complex series of transcription factors and cytokines of differentiation to hematopoietic stem Eos the terminal cells of mature blood cells. In addition to the differentiation between the two relations not reported in other studies. The former research team found that in the asthma model mice, bone marrow and peripheral stem cells of spleen LSK (lineage-Sca-l+c-kit+) the increase in the number of stem cell mobilization and proliferation phenomenon. While in Eos deficient Phil mice it is found that, the number of stem cells is decreased. Suggesting that Eos may turn to its superior hematopoietic stem cells have a regulatory role to promote mobilization. Based on this hypothesis, we use the over expression of IL-5 induced The NJ.1638 mice and Phil mice Eos there are a lot of a series of bone marrow transplantation, the in vitro co culture system, in-depth study of the Eos and the relationship between hematopoietic stem cell regulation. Objective to make clear the regulation role of Eos on stem cell mobilization, and study its mechanism. Methods 1. week old model using 6-10 the wild type littermates (Wild Type, WT) and Phil mice, male and female, with chicken ovalbumin (OVA) sensitization and atomization attack, the asthma model was established by classical, multi-color flow LSK horizontal analysis method and labeled bone marrow spleen derived stem cells, to observe the proliferation and mobilization of the phenomenon analysis; NJ.1638 in vivo stem cell level and the level of ROS, Eos observed a substantial increase in the stem cells; will be hybrid NJ.1638 and Phil mice after analysis of stem cell of bone marrow and peripheral, clear Eos of stem cell regulation relationship The classic WT and intraperitoneal injection; Phil mice bone marrow mobilization agent G-CSF, non competitive and competitive bone marrow transplantation to observe stem cell mobilization of bone marrow transplantation of.2. between WT and NJ.1638 mice, and observe the Eos stem cell activation and differentiation of stem cells; using DCFH FA fluorescent dye labeled activity oxygen free radical (ROS), to detect the level of ROS; using the method of flow separation and purification of LSK and Eos, were cultured in vitro and the effect of Eos on LSK, to find the mechanism. Results of the 1. models of asthma, the loss of Eos causes stem cells weakened mobilization phenomenon. As compared with WT mice, stem cells the number increased to reduce the amount of.2.NJ.1638 in bone marrow LSK significantly reduced spleen of Phil mice, while the number of spleen in LSK is higher than that of bone marrow stem cell mobilization, suggesting that the phenomenon of NJ.1638 in vivo; stem cells showed high levels of.3.NJ.1638 and P ROS HIL mice after hybridization in high IL-5 but Eos deficient mice, disappearance of stem cell mobilization, suggesting that Eos and stem cell mobilization is directly related to.4.Eos does not affect the G-CSF induced bone marrow mobilization phenomenon of.5.NJ.1638 and WT mice bone marrow transplantation experiment shows that the number of Eos is directly related to stem cell mobilization, stem cell differentiation and the source of NJ.1638 decreased stem cell homing ability of.6.NJ.1638 derived.7.Eos did not decline with flow cytometry after LSK co culture can promote the production of ROS increased. Conclusion the number of Eos can promote stem cell mobilization, by increasing the level of ROS in stem cells.

【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R562.25

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 李樹全;嗜酸性粒細胞的分離與純化[J];廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2001年06期

2 姚細安,曾泳而,童裕維,唐小平,尹熾標;200例嚴重急性呼吸綜合征患者嗜酸性粒細胞檢測結(jié)果的分析[J];檢驗醫(yī)學(xué);2004年05期

3 韓梅,劉榮煥,張潔;嗜酸性粒細胞異常增高者2例分析[J];齊魯醫(yī)學(xué)檢驗;2005年05期

4 陶蓉;;嗜酸性粒細胞型類白血病1例報告[J];中國廠礦醫(yī)學(xué);2006年03期

5 于秀芹;;慢性嗜酸性粒細胞肺炎1例[J];遼寧醫(yī)學(xué)雜志;2007年03期

6 韓軍;陳輝樹;;早幼嗜酸性粒細胞形態(tài)的研究[J];貴陽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2012年06期

7 周細龍;;嗜酸性粒細胞的增多與減少有何臨床意義?[J];赤腳醫(yī)生雜志;1979年03期

8 董麗娟;;嗜酸性粒細胞為什么會增多?[J];中國農(nóng)村醫(yī)學(xué);1986年01期

9 牧野僗平 ,南景一;嗜酸性粒細胞與疾病[J];日本醫(yī)學(xué)介紹;1987年03期

10 王國云,賀才標,萬書平;66例急性原發(fā)性血小板減少性紫癜骨髓嗜酸性粒細胞的回顧分析[J];綜合臨床醫(yī)學(xué);1990年04期

相關(guān)會議論文 前10條

1 成煥吉;楊清然;尤海龍;張云峰;魯繼榮;;高嗜酸性粒細胞綜合征7例臨床分析[A];中華醫(yī)學(xué)會第十三屆全國兒科呼吸學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2012年

2 王思勤;李英;朱敏;馬希濤;張曉菊;;嗜酸性粒細胞肺炎1例并文獻復(fù)習(xí)[A];中華醫(yī)學(xué)會呼吸病學(xué)年會——2013第十四次全國呼吸病學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2013年

3 唐金鳳;周道銀;陳慧英;李時英;唐古生;;支氣管肺泡灌洗液及痰嗜酸性粒細胞增多的臨床價值[A];中華醫(yī)學(xué)會第九次全國檢驗醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議暨中國醫(yī)院協(xié)會臨床檢驗管理專業(yè)委員會第六屆全國臨床檢驗實驗室管理學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2011年

4 佟紅艷;錢靖;麥文淵;婁引軍;;持續(xù)嗜酸性粒細胞增高伴肝臟自發(fā)巨大血腫一例[A];中華醫(yī)學(xué)會血液學(xué)分會第十三屆全國血栓與止血學(xué)術(shù)會議暨“血栓栓塞性疾病（血栓與止血）基礎(chǔ)與臨床研究進展”論文摘要匯編及學(xué)習(xí)班講義[C];2011年

5 羅佛全;劉志剛;劉玉琳;龔十妹;嚴濤;;蛔蟲變應(yīng)原致喘豚鼠支氣管肺泡灌洗液中嗜酸性粒細胞形態(tài)測量分析[A];第一屆全國變態(tài)反應(yīng)學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C];2001年

6 李穎能;饒沃明;趙子文;何綠茵;揚一言;黃健;;嚴重急性呼吸綜合癥急性期血液嗜酸性粒細胞降低[A];中華醫(yī)學(xué)會第七次全國檢驗醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議資料匯編[C];2008年

7 王成彬;;細胞固定在兩種細胞聯(lián)合培養(yǎng)研究中的應(yīng)用[A];第五次全國中青年檢驗醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2006年

8 王成彬;黃振國;李洛誼;葉偉基;林偉基;叢玉隆;;嗜酸性粒細胞與支氣管上皮細胞相互活化誘導(dǎo)細胞表面粘附分子表達及其信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路[A];中華醫(yī)學(xué)會第七次全國檢驗醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議資料匯編[C];2008年

9 雷霏;董震;;變應(yīng)性疾病中水通道蛋白1在嗜酸性粒細胞遷移趨化中的作用[A];中華醫(yī)學(xué)會第十次全國耳鼻咽喉-頭頸外科學(xué)術(shù)會議論文匯編（上）[C];2007年

10 林進;徐立勤;徐丹怡;孫德本;;Churg-Strauss綜合征患者血清嗜酸性粒細胞陽離子蛋白水平的測定[A];浙江省醫(yī)學(xué)會2008年風(fēng)濕病年會論文匯編[C];2008年

相關(guān)重要報紙文章 前3條

1 李傳寶;血液中嗜酸性粒細胞為何常增高[N];家庭醫(yī)生報;2006年

2 王振坤;人體的血液防線之三[N];家庭醫(yī)生報;2007年

3 武漢大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬中山醫(yī)院主任醫(yī)師 李定國;肺炎：原是“蛔仔”作怪[N];大眾衛(wèi)生報;2005年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前7條

1 張超;嗜酸性粒細胞促進造血干細胞動員的調(diào)控機制研究[D];浙江大學(xué);2015年

2 陳鴻鵠;腸道派氏結(jié)嗜酸性粒細胞亞群的發(fā)現(xiàn)及其黏膜免疫調(diào)控功能與機制的研究[D];浙江大學(xué);2013年

3 周宏斌;香煙煙霧暴露誘導(dǎo)的小鼠肺部損傷模型中嗜酸性粒細胞的作用研究[D];浙江大學(xué);2014年

4 楊文鈺;人類胚胎干細胞/誘導(dǎo)型多潛能干細胞向功能成熟嗜酸性粒細胞分化的研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2011年

5 汪誠;膜連蛋白Ⅰ參與地塞米松上調(diào)A549細胞吞噬凋亡的嗜酸性粒細胞[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2007年

6 趙衛(wèi)東;根除幽門螺桿菌及藥物治療對功能性消化不良影響的研究[D];山東大學(xué);2013年

7 顧紅英;兒童功能性消化不良流行病學(xué)和發(fā)病機制的研究[D];蘇州大學(xué);2012年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 林希湖;嗜酸性粒細胞和呼吸機相關(guān)性肺炎預(yù)后相關(guān)性研究[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2016年

2 張思寒;功能性消化不良患者十二指腸嗜酸性粒細胞、嗜鉻粒蛋白A細胞數(shù)量變化的意義[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

3 張力;嗜酸性粒細胞增多性皮炎30例臨床分析[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2016年

4 肖冠華;非急性發(fā)作期混合粒細胞型哮喘臨床特征分析[D];南方醫(yī)科大學(xué);2016年

5 楊清然;高嗜酸性粒細胞綜合征7例臨床分析[D];吉林大學(xué);2012年

6 郭君;嗜酸性粒細胞抗腫瘤作用及其機制的初步研究[D];蘭州大學(xué);2008年

7 盧會秀;嗜酸性粒細胞及伴嗜酸性粒細胞增多性疾病[D];河北醫(yī)科大學(xué);2010年

8 鞏靜;白細胞介素18在卵清蛋白誘發(fā)的小鼠哮喘模型中對嗜酸性粒細胞肺內(nèi)募集作用的研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2007年

9 豐艷;嗜酸性粒細胞性胃腸炎[D];蚌埠醫(yī)學(xué)院;2015年

10 安方玉;嗜酸性粒細胞增高模型小鼠的抗腫瘤及免疫調(diào)節(jié)活性研究[D];蘭州大學(xué);2008年

，

本文編號：1368582