本文關鍵詞：野生型P53基因誘導肺上皮細胞凋亡在海水吸入型肺損傷中的作用機制研究　出處：《第四軍醫(yī)大學》2014年碩士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：研究背景： 海水淹溺是導致急性肺損傷（acute lung injury，ALI）的常見病因。生活中，有很多因素可以導致ALI的發(fā)生，如異物誤吸，傳染性肺炎、毒物接觸等等，這其中就包括淹溺，尤其是海水淹溺。淹溺誘發(fā)的肺損傷多是由于氣道內(nèi)被動吸入過多液體，破壞了肺泡結(jié)構(gòu)，導致肺水清除功能和氣體交換功能下降，最終發(fā)生肺水腫和通氣\血流比例下調(diào)，出現(xiàn)進行性低氧血癥和呼吸窘迫，嚴重者會進展成急性呼吸窘迫綜合癥（acute respiratory distress syndrome，ARDS），甚至死亡。近年來，關于海水淹溺性急性肺損傷的研究大量展開，但都是基于動物模型基礎上的研究，關于其中的致傷機制也陸續(xù)被揭示。 凋亡是一種由基因控制的程序性細胞死亡過程。生理情況下的凋亡對于維持機體新陳代謝，促進內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定有積極作用；病理情況下的凋亡尤其是過度凋亡，會導致死亡物質(zhì)大量堆積，死亡物質(zhì)的清除引起吞噬細胞的集聚，促使炎癥介質(zhì)大量釋放，，加重肺損傷。最近，ALI中肺泡上皮細胞凋亡的研究被大量報道。我科前期的研究發(fā)現(xiàn)，在海水吸入型急性肺損傷(seawater inhalation induced acute lung injury，SWI-ALI）中，肺泡上皮細胞及內(nèi)皮細胞的凋亡是增加的[1]。誘發(fā)細胞凋亡的因素有很多，調(diào)節(jié)通路更是多種多樣。野生型p53（wild type p53，wtp53）是調(diào)節(jié)細胞凋亡的重要因子，SWI-ALI中，wtp53基因及其調(diào)節(jié)通路是否參與了海水誘導的細胞凋亡，及相關作用機制未曾揭示。 實驗目的： 通過復制SWI-ALI大鼠模型，觀察海水吸入后對肺組織上皮細胞凋亡的影響，同時觀察野生型p53和其調(diào)節(jié)的凋亡相關基因及p38基因在海水作用時的表達，探討在海水吸入型肺損傷發(fā)生后野生型p53誘導肺上皮細胞凋亡的作用機制，并進一步研究了海水觸發(fā)野生型p53表達的機制。 實驗方法： 實驗一：40只SD大鼠隨機分為空白對照組、海水1、3、6、12h組，每組8只。4個海水處理組大鼠氣管內(nèi)注入4ml/kg海水，分別作用1h、3h、6h和12h；對照組除不吸人海水外，其余處理同海水淹溺組。于各時間點上放血處死大鼠，行動脈血氣分析，測肺濕/干重比（W/D)， HE染色觀察肺組織病理形態(tài)改變，RT-PCR檢測wtp53、Bax、Bcl-2及細胞色素c（cytochrome-c，Cyt-c）mRNA的表達，免疫組化法分析wtp53、p-p38和Bax表達變化，western blotting分析wtp53、p38和p-p38、p-p53、Bax、Bcl-2和Cyt-c及活化caspase-3的蛋白表達。 實驗二：新傳代的細胞常規(guī)培養(yǎng)4天后干預。除對照組外均在培養(yǎng)基中加入海水，海水干預濃度為40%（即1ml總體積中含0.4ml海水），孵育時間為3h；實驗設對照組、海水組、海水+PFT-α組、海水+SB203580組、海水+DMSO組，在加入海水后，立即將20μM的PFT-α、SB203580及10μl的DMSO加入培養(yǎng)基中共同孵育。流式細胞儀檢測各組細胞凋亡，Western blotting檢測各組p-p38、p-p53和其相關下游目的蛋白的表達。 實驗結(jié)果： 實驗一：海水吸入后，血氣結(jié)果顯示大鼠出現(xiàn)了明顯的低氧血癥，HE結(jié)果示肺組織破壞嚴重，且海水作用時間越久，肺組織損傷越嚴重；海水吸入引起促凋亡基因wtp53、Bax及Cyt-c的mRNA表達增加（P0.05），抑制凋亡基因Bcl-2的mRNA表達隨海水吸入時間增加逐漸下降；同時發(fā)現(xiàn)，相應因子的蛋白表達與PCR的結(jié)果一致，我們還觀察了海水吸入后p38的蛋白表達，結(jié)果顯示，海水升高了p38的磷酸化水平，且與p-p53及其下游促凋亡因子的增加趨勢一致。 實驗二：流式細胞儀檢測顯示，海水處理明顯引起A549細胞凋亡（P0.05vscontrol group），PFT-α和SB203580都可以抑制海水的這種促凋亡作用。海水單獨作用和海水+DMSO共孵育引起的凋亡結(jié)果無明顯不同，提示DMSO對海水作用無影響（P0.05）。蛋白表達結(jié)果顯示，與海水組比較，PFT-α和SB203580分別降低了海水組中p-p53的水平，但仍高于對照組，且PFT-α的抑制作用更明顯，這一點與細胞凋亡抑制結(jié)果一致；有趣的是，PFT-α只抑制了p-p53的表達，對p-p38無影響；SB203580在抑制p-p38表達的同時抑制了p-p53的表達；我們同時觀察到Bax、Cyt-c及cleaved caspase-3的表達被PFT-α和SB203580抑制，Bcl-2的表達反而增加。 結(jié)論： 野生型p53及其下游目的基因通過內(nèi)源性途徑調(diào)節(jié)了SWI-ALI時肺泡上皮細胞的凋亡，P38MAPK作為p53的上游因子，通過磷酸化p53，部分地介導了海水吸入誘導的細胞凋亡調(diào)節(jié)。
【學位授予單位】：第四軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R563

【參考文獻】

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1 張奇;白曉東;付小兵;;p38MAPK信號通路研究進展[J];感染 炎癥 修復;2005年02期

2 張新紅,段蘊鈾;部分液體通氣對兔海水淹溺型肺水腫的氣體交換和病理組織學的影響[J];解放軍醫(yī)學雜志;2004年08期

3 段蘊鈾;張新紅;;海水淹溺型急性肺損傷的研究現(xiàn)狀[J];解放軍醫(yī)學雜志;2009年07期

4 王穎,張淑文,王寶恩;急性肺損傷與中性粒細胞凋亡[J];中華急診醫(yī)學雜志;2001年05期

5 齊玲;楊寧江;楊淑艷;趙東海;;bcl-2家族蛋白和信號傳導通路[J];吉林醫(yī)藥學院學報;2011年01期

6 錢桂生;陳旭昕;;急性肺損傷/急性呼吸窘迫綜合征發(fā)病機制的研究進展[J];內(nèi)科理論與實踐;2010年06期

7 管弦;王導新;;肺泡Ⅱ型上皮細胞凋亡在急性肺損傷中研究進展[J];臨床肺科雜志;2012年06期

8 唐皓,馬中富;p38 MAPK信號轉(zhuǎn)導通路研究進展[J];熱帶醫(yī)學雜志;2004年04期

9 周長喜;錢桂生;王關嵩;;海水淹溺機制研究進展[J];人民軍醫(yī);2008年10期

10 王理想;伍火志;;肺泡Ⅱ型上皮細胞凋亡與肺損傷的研究進展[J];醫(yī)學信息(上旬刊);2011年07期

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