發(fā)布時間：2017-12-08 03:17

  本文關(guān)鍵詞：基于GR、HSP90研究淫羊藿女貞子協(xié)同激素吸入對哮喘大鼠的影響

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【摘要】：目的基于糖皮質(zhì)激素受體(Glucocorticoid Recept,GR)及熱休克蛋白90(heat shock proteins90,HSP90)研究淫羊藿女貞子煎劑及有效成分提取物協(xié)同激素局部干預(yù)對哮喘大鼠的影響。方法采用SPF級健康雄性SD大鼠105只,隨機分為7組,分別為正常對照組、哮喘模型組、激素干預(yù)組、淫羊藿女貞子組(煎劑組)、淫羊藿女貞子合激素組(激素合煎劑組)、淫羊藿女貞子提取物組(提取物組)、淫羊藿女貞子提取物合激素組(激素合提取物組)。除正常組外,其余動物皮下及腹腔注射卵蛋白(ovalbumin,OVA)致敏、霧化吸入卵蛋白激發(fā),共計5周,建立大鼠哮喘模型。造模結(jié)束后各給藥組給藥4周,分別給予:激素組:生理鹽水灌胃同時0.01%布地奈德30min霧化吸入;煎劑組:淫羊藿女貞子(4:3)煎劑3.5g/kg灌胃同時生理鹽水30min霧化吸入;激素合煎劑組:淫羊藿女貞子(4:3)煎劑3.5g/kg灌胃同時給予0.01%布地奈德30min霧化吸入;提取物組:淫羊藿女貞子提取物(2:3)10mg/kg灌胃同時生理鹽水30min霧化吸入;提取物合激素組:淫羊藿女貞子提取物(2:3)10mg/kg灌胃同時給予0.01%布地奈德30min霧化吸入;正常組和模型組灌胃及霧化吸入生理鹽水建立對照。實驗第65天處死動物,取血、肺組織及肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)。采用酶免法檢測血清白介素-4(interleukin,IL-4)、免疫球蛋白E(immunoglobulin,IgE)含量;HE、Masson、PAS染色法檢測肺組織病理學(xué)變化;流式細胞術(shù)檢測外周血及BALF淋巴細胞凋亡率;流式細胞術(shù)檢測BALF的GR蛋白含量及GC-GR蛋白結(jié)合力;免疫組織化學(xué)法(Immunohistochemistry,IHC)或免疫熒光法(Immunofluorescence,IF)結(jié)合Western blot測定肺組織中HSP90、GRα、grβ蛋白表達,熒光定量pcr法檢測肺組織hsp90、gr、grα、grβmrna表達,計算gr與hsp90蛋白及mrna比值。結(jié)果哮喘大鼠存在著以血清il-4、ige升高(p0.01)為評價指標(biāo)的氣道炎癥;病理表現(xiàn)為以支氣管壁及平滑肌異常增厚,杯狀細胞、膠原纖維增生(p0.01或p0.05)為表現(xiàn)的氣道重塑;以balf淋巴細胞凋亡率顯著降低(p0.05)為表現(xiàn)的gc敏感性下降;以balfgc-gr蛋白結(jié)合力顯著降低(p0.05),肺組織grmrna、grα蛋白(if、wb)及mrna表達量顯著降低(p0.01或p0.05),grβ(if、wb)、hsp90蛋白(ihc、wb)及mrna表達量下降(p0.01或p0.05),grα/hsp90蛋白(ihc、wb)及mrna,gr/hsp90mrna(p0.01或p0.05)失衡為表現(xiàn)的gc作用途徑受損。激素給藥后,可降低大鼠血清il-4、ige含量(p0.01或p0.05);降低支氣管壁、平滑肌厚度、杯狀細胞計數(shù)(p0.01或p0.05);升高balf淋巴細胞凋亡率(p0.05);增加肺組織grα(wb)、grβ(if)、hsp90(wb)蛋白表達量(p0.05)、維持grβ/hsp90(ihc)蛋白平衡(p0.01)。淫羊藿女貞子煎劑及提取物可降低大鼠血清il-4、ige含量(p0.01或p0.05);降低平滑肌厚度、杯狀細胞計數(shù)及百分比(p0.01或p0.05);升高血及balf淋巴細胞凋亡率(p0.01或p0.05);增加gr、grα(if、wb)、grβ(if、wb)、hsp90(ihc、wb)蛋白表達量(p0.01或p0.05);增加gr、grα、grβmrna表達量(p0.01或p0.05);維持grα/hsp90(ihc、wb)蛋白平衡(p0.01或p0.05),gr/hsp90、grα/hsp90、grα/grβmrna平衡(p0.01或p0.05)。淫羊藿女貞子煎劑及提取物與激素合用,不僅可以同激素一樣降低大鼠血清il-4、ige含量(p0.01或p0.05);降低支氣管壁、平滑肌厚度、杯狀細胞計數(shù)(p0.01或p0.05);升高balf淋巴細胞凋亡率(p0.01);增加grα(if、wb)、grβ(if、wb)、hsp90(ihc、wb)蛋白表達量(p0.01或p0.05);而且對于激素沒有改善作用的指標(biāo)也有很好的改善效果,具體如下:改善膠原纖維增生(P0.01或P0.05)、降低杯狀細胞百分比(P0.01或P0.05)、促進血中淋巴細胞凋亡率(P0.01)、增加BALF GR蛋白表達及GC-GR蛋白結(jié)合力(P0.01)、從mRNA水平增加GR、GRα、GRβ、HSP 90表達量(P0.01或P0.05);以及維持GRα/HSP90(IHC、WB)蛋白平衡(P0.01或P0.05),GR/HSP90、GRα/HSP90、GRα/GRβmRNA平衡(P0.01或P0.05)。結(jié)論1.引起大鼠哮喘的機制可能與氣道炎癥,氣道重塑,以淋巴細胞凋亡率下降為表現(xiàn)的GC敏感性下降和以GR、HSP90(IHC、WB)表達降低、GR/HSP90比例失調(diào)為表現(xiàn)的GC作用途徑受損有關(guān)。2.布地奈德治療哮喘的作用環(huán)節(jié)可能為:改善氣道炎癥及氣道重塑,促進BALF淋巴細胞凋亡,增加組織GRα(WB)、GRβ(IF)、HSP 90(WB)蛋白表達。3.淫羊藿女貞子煎劑及提取物協(xié)同激素治療哮喘的作用環(huán)節(jié)可能為:改善氣道炎癥及氣道重塑,促進血及BALF淋巴細胞凋亡,增加組織GRα(IF、WB)、GRβ(IF、WB)、HSP90(IHC、WB)蛋白及mRNA表達,維持GR/HSP90蛋白及mRNA比例失衡。4.淫羊藿女貞子有效成分提取物同藥對水煎劑一樣具有良好的防治哮喘作用。其作用不僅與水煎劑組無明顯差異,甚至對部分指標(biāo)的改善作用更顯著。二者作用的差異體現(xiàn)在:淫羊藿女貞子提取物較煎劑有更好的下調(diào)血清IL-4水平、上調(diào)GRαmRNA表達的作用;淫羊藿女貞子提取物與激素合用較煎劑與激素合用上調(diào)GRβmRNA表達的作用更加明顯。
【學(xué)位授予單位】：首都醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R562.25

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