本文關(guān)鍵詞：基于GR、HSP90研究淫羊藿女貞子協(xié)同激素吸入對(duì)哮喘大鼠的影響

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【摘要】：目的基于糖皮質(zhì)激素受體(Glucocorticoid Recept,GR)及熱休克蛋白90(heat shock proteins90,HSP90)研究淫羊藿女貞子煎劑及有效成分提取物協(xié)同激素局部干預(yù)對(duì)哮喘大鼠的影響。方法采用SPF級(jí)健康雄性SD大鼠105只,隨機(jī)分為7組,分別為正常對(duì)照組、哮喘模型組、激素干預(yù)組、淫羊藿女貞子組(煎劑組)、淫羊藿女貞子合激素組(激素合煎劑組)、淫羊藿女貞子提取物組(提取物組)、淫羊藿女貞子提取物合激素組(激素合提取物組)。除正常組外,其余動(dòng)物皮下及腹腔注射卵蛋白(ovalbumin,OVA)致敏、霧化吸入卵蛋白激發(fā),共計(jì)5周,建立大鼠哮喘模型。造模結(jié)束后各給藥組給藥4周,分別給予:激素組:生理鹽水灌胃同時(shí)0.01%布地奈德30min霧化吸入;煎劑組:淫羊藿女貞子(4:3)煎劑3.5g/kg灌胃同時(shí)生理鹽水30min霧化吸入;激素合煎劑組:淫羊藿女貞子(4:3)煎劑3.5g/kg灌胃同時(shí)給予0.01%布地奈德30min霧化吸入;提取物組:淫羊藿女貞子提取物(2:3)10mg/kg灌胃同時(shí)生理鹽水30min霧化吸入;提取物合激素組:淫羊藿女貞子提取物(2:3)10mg/kg灌胃同時(shí)給予0.01%布地奈德30min霧化吸入;正常組和模型組灌胃及霧化吸入生理鹽水建立對(duì)照。實(shí)驗(yàn)第65天處死動(dòng)物,取血、肺組織及肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)。采用酶免法檢測(cè)血清白介素-4(interleukin,IL-4)、免疫球蛋白E(immunoglobulin,IgE)含量;HE、Masson、PAS染色法檢測(cè)肺組織病理學(xué)變化;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)外周血及BALF淋巴細(xì)胞凋亡率;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)BALF的GR蛋白含量及GC-GR蛋白結(jié)合力;免疫組織化學(xué)法(Immunohistochemistry,IHC)或免疫熒光法(Immunofluorescence,IF)結(jié)合Western blot測(cè)定肺組織中HSP90、GRα、grβ蛋白表達(dá),熒光定量pcr法檢測(cè)肺組織hsp90、gr、grα、grβmrna表達(dá),計(jì)算gr與hsp90蛋白及mrna比值。結(jié)果哮喘大鼠存在著以血清il-4、ige升高(p0.01)為評(píng)價(jià)指標(biāo)的氣道炎癥;病理表現(xiàn)為以支氣管壁及平滑肌異常增厚,杯狀細(xì)胞、膠原纖維增生(p0.01或p0.05)為表現(xiàn)的氣道重塑;以balf淋巴細(xì)胞凋亡率顯著降低(p0.05)為表現(xiàn)的gc敏感性下降;以balfgc-gr蛋白結(jié)合力顯著降低(p0.05),肺組織grmrna、grα蛋白(if、wb)及mrna表達(dá)量顯著降低(p0.01或p0.05),grβ(if、wb)、hsp90蛋白(ihc、wb)及mrna表達(dá)量下降(p0.01或p0.05),grα/hsp90蛋白(ihc、wb)及mrna,gr/hsp90mrna(p0.01或p0.05)失衡為表現(xiàn)的gc作用途徑受損。激素給藥后,可降低大鼠血清il-4、ige含量(p0.01或p0.05);降低支氣管壁、平滑肌厚度、杯狀細(xì)胞計(jì)數(shù)(p0.01或p0.05);升高balf淋巴細(xì)胞凋亡率(p0.05);增加肺組織grα(wb)、grβ(if)、hsp90(wb)蛋白表達(dá)量(p0.05)、維持grβ/hsp90(ihc)蛋白平衡(p0.01)。淫羊藿女貞子煎劑及提取物可降低大鼠血清il-4、ige含量(p0.01或p0.05);降低平滑肌厚度、杯狀細(xì)胞計(jì)數(shù)及百分比(p0.01或p0.05);升高血及balf淋巴細(xì)胞凋亡率(p0.01或p0.05);增加gr、grα(if、wb)、grβ(if、wb)、hsp90(ihc、wb)蛋白表達(dá)量(p0.01或p0.05);增加gr、grα、grβmrna表達(dá)量(p0.01或p0.05);維持grα/hsp90(ihc、wb)蛋白平衡(p0.01或p0.05),gr/hsp90、grα/hsp90、grα/grβmrna平衡(p0.01或p0.05)。淫羊藿女貞子煎劑及提取物與激素合用,不僅可以同激素一樣降低大鼠血清il-4、ige含量(p0.01或p0.05);降低支氣管壁、平滑肌厚度、杯狀細(xì)胞計(jì)數(shù)(p0.01或p0.05);升高balf淋巴細(xì)胞凋亡率(p0.01);增加grα(if、wb)、grβ(if、wb)、hsp90(ihc、wb)蛋白表達(dá)量(p0.01或p0.05);而且對(duì)于激素沒(méi)有改善作用的指標(biāo)也有很好的改善效果,具體如下:改善膠原纖維增生(P0.01或P0.05)、降低杯狀細(xì)胞百分比(P0.01或P0.05)、促進(jìn)血中淋巴細(xì)胞凋亡率(P0.01)、增加BALF GR蛋白表達(dá)及GC-GR蛋白結(jié)合力(P0.01)、從mRNA水平增加GR、GRα、GRβ、HSP 90表達(dá)量(P0.01或P0.05);以及維持GRα/HSP90(IHC、WB)蛋白平衡(P0.01或P0.05),GR/HSP90、GRα/HSP90、GRα/GRβmRNA平衡(P0.01或P0.05)。結(jié)論1.引起大鼠哮喘的機(jī)制可能與氣道炎癥,氣道重塑,以淋巴細(xì)胞凋亡率下降為表現(xiàn)的GC敏感性下降和以GR、HSP90(IHC、WB)表達(dá)降低、GR/HSP90比例失調(diào)為表現(xiàn)的GC作用途徑受損有關(guān)。2.布地奈德治療哮喘的作用環(huán)節(jié)可能為:改善氣道炎癥及氣道重塑,促進(jìn)BALF淋巴細(xì)胞凋亡,增加組織GRα(WB)、GRβ(IF)、HSP 90(WB)蛋白表達(dá)。3.淫羊藿女貞子煎劑及提取物協(xié)同激素治療哮喘的作用環(huán)節(jié)可能為:改善氣道炎癥及氣道重塑,促進(jìn)血及BALF淋巴細(xì)胞凋亡,增加組織GRα(IF、WB)、GRβ(IF、WB)、HSP90(IHC、WB)蛋白及mRNA表達(dá),維持GR/HSP90蛋白及mRNA比例失衡。4.淫羊藿女貞子有效成分提取物同藥對(duì)水煎劑一樣具有良好的防治哮喘作用。其作用不僅與水煎劑組無(wú)明顯差異,甚至對(duì)部分指標(biāo)的改善作用更顯著。二者作用的差異體現(xiàn)在:淫羊藿女貞子提取物較煎劑有更好的下調(diào)血清IL-4水平、上調(diào)GRαmRNA表達(dá)的作用;淫羊藿女貞子提取物與激素合用較煎劑與激素合用上調(diào)GRβmRNA表達(dá)的作用更加明顯。
【學(xué)位授予單位】：首都醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R562.25

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