本文關(guān)鍵詞：Sidt2基因剔除小鼠的肺形態(tài)學(xué)改變及相關(guān)信號(hào)通路研究

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【摘要】：目的:通過(guò)對(duì)Sidt2基因剔除(Sidt2-/-)小鼠的肺組織超微結(jié)構(gòu)觀察和相關(guān)分子學(xué)研究,探討Sidt2基因?qū)π∈蠓闻K的形態(tài)學(xué)影響及與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激、細(xì)胞凋亡相關(guān)的信號(hào)通路分析。方法:1、將利用LoxP-Flox-LoxP系統(tǒng),基因重組及打靶技術(shù)獲得的Sidt2-/-小鼠模型,與野生型B129品系小鼠合籠交配,鼠尾提取DNA進(jìn)行基因型鑒定,挑選出子代Sidt2-/+小鼠,同籠交配,再挑選出子代Sidt2-/-、Sidt2-/+雄鼠為實(shí)驗(yàn)組,以同窩或相同批次出生的野生型雄鼠為對(duì)照。進(jìn)行DNA、RNA和Western鑒定后行肺組織光鏡和電鏡觀察形態(tài)學(xué)觀察。2、行Sidt2-/-、Sidt2+/+小鼠肺組織的Bip和Caspase3 activity的免疫組化檢測(cè)。3、Western blot檢測(cè)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和凋亡相關(guān)分子:BIP、p-eif2α、ire1α、chop、Caspase3 activity、Caspase3。4、在人類(lèi)非小細(xì)胞肺癌A549水平上用質(zhì)粒干擾Sidt2的表達(dá),進(jìn)一步驗(yàn)證BIP表達(dá)情況。結(jié)果:1、從DNA、RNA、蛋白質(zhì)水平驗(yàn)證模型構(gòu)造成功。2、Sidt2-/-小鼠生長(zhǎng)發(fā)育、應(yīng)激反應(yīng)等一般方面落后于野生型小鼠。光鏡下對(duì)照組小鼠肺泡壁較光滑,僅有少許炎癥細(xì)胞浸潤(rùn);模型鼠肺泡間質(zhì)內(nèi)毛細(xì)血管擴(kuò)張充血,炎癥細(xì)胞呈多處灶狀分布。電鏡下對(duì)照組小鼠的肺上皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)較規(guī)則;模型鼠可見(jiàn)肺泡上皮細(xì)胞崩解壞死,毛細(xì)血管充血及基底膜增厚的表現(xiàn)。3、免疫組化檢測(cè)發(fā)現(xiàn)Sidt2-/-小鼠肺組織的Bip和Caspase3 activity表達(dá)量比對(duì)照組的表達(dá)量低(P0.05)。4、Western blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn):Sidt2-/-、Sidt2-/+小鼠肺組織的BIP、p-eif2α、ire1α、Caspase3 activity、Caspase3表達(dá)量比對(duì)照組表達(dá)量低(P0.05),但CHOP表達(dá)量正好相反,在Sidt2-/-、Sidt2-/+小鼠肺組織的表達(dá)多于對(duì)照組(P0.05)。5、質(zhì)粒成功轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞,但Bip在蛋白水平的表達(dá)量沒(méi)有明顯改變(P0.05)。結(jié)論:1、Sidt2-/-可影響小鼠肺組織形態(tài),表現(xiàn)為細(xì)胞的壞死,毛細(xì)血管充血及基底膜的增厚,大量炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn),造成肺部損傷。2、Sidt2作為溶酶體膜蛋白參與了細(xì)胞凋亡的進(jìn)程。Sidt2-/-抑制Bip、p-eif2α、ire1α而抑制了部分內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激途徑,通過(guò)抑制Caspase3 activity、Caspase3表達(dá)阻礙了正常細(xì)胞凋亡的進(jìn)程,而使得細(xì)胞進(jìn)入炎癥、壞死階段。其機(jī)制尚不十分明確,有待進(jìn)一步研究。
【學(xué)位授予單位】：皖南醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R563

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本文編號(hào)：1242125