本文關(guān)鍵詞：血吸蟲感染鼠樹突狀細(xì)胞抑制過敏性哮喘的機(jī)制

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【摘要】：目的研究日本血吸蟲(SJ)感染鼠樹突狀細(xì)胞(DC)在抑制過敏性哮喘中的作用機(jī)制。方法第一部分,利用過繼轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)研究SJ感染鼠DC亞型在抑制過敏性哮喘疾病中的作用,我們用CD8α+磁珠和CD11c+磁珠分離純化SJ感染鼠、SEA致敏鼠及正常鼠DC亞群CD8α+CD11c+及CD8α-CD11c+細(xì)胞,一部分用于qRT-PCR檢測(cè)各DC亞型分泌細(xì)胞因子的表達(dá),另一部分通過尾靜脈過繼轉(zhuǎn)移給正常小鼠(5×105 DC/只),1 h后誘發(fā)哮喘。4周后取小鼠肺組織作病理切片,觀察其炎癥變化。收集小鼠脾細(xì)胞培養(yǎng)的上清液、肺泡灌洗液、血清,用于檢測(cè)細(xì)胞因子IL-4、IL-5、IL-10、IL-12、TGF-β及OVA特異性IgE水平;第二部分,探討SEA刺激后DC在誘導(dǎo)CD4+T分化方向改變中的作用。我們?cè)隗w外培養(yǎng)骨髓DC,并用可溶性蟲卵抗原(SEA)刺激18h,以LPS刺激作為陽(yáng)性對(duì)照,以Medium刺激作為陰性對(duì)照。流式細(xì)胞術(shù)(FACS)、免疫組化和qRT-PCR檢測(cè)刺激后DC表面標(biāo)志和分泌細(xì)胞因子的變化。將刺激后的DC與OVA誘導(dǎo)哮喘小鼠脾臟中的CD4+T共培養(yǎng)48h、72h后用qRT-PCR的方法檢測(cè)CD4+T分泌細(xì)胞因子的變化;第三部分,從支氣管粘液分泌的角度探討SJ感染小鼠抑制過敏性哮喘的機(jī)制。我們用SJ感染小鼠以及過繼轉(zhuǎn)移SEA致敏鼠DC亞型并誘發(fā)哮喘后取小鼠肺臟做HE和PAS染色并檢測(cè)肺部MUC5ACmRNA表達(dá)情況,觀察炎癥和黏液分泌的變化。利用qRT-PCR檢測(cè)肺部IL-13mRNA表達(dá)的變化,用IHC觀察小鼠肺部IL-13和CD4+T的表達(dá)位置。體外培養(yǎng)骨髓DC并用SEA刺激后qRT-PCR檢測(cè)IL-13mRNA的變化,將DC與CD4+T共培養(yǎng)48h和72h分別后用qRT-PCR檢測(cè)CD4+T表達(dá)IL-13mRNA的變化。結(jié)果第一部分,qRT-PCR法檢測(cè)顯示CD8α-DC與CD8α+DC相比無論是感染組還是正常組CD11b mRNA水平均明顯降低(P0.05),SJCD8α-DC組的CD80m RNA、CD86mRNA水平相對(duì)于SJCD8α+DC明顯下降(P0.05),而IL-10mRNA水平明顯升高(P0.05),TGF-βmRNA(P0.001)和IL-12 mRNA表達(dá)降低(P0.05)。肺部病理學(xué)結(jié)果顯示過繼轉(zhuǎn)移SJ/SEA小鼠CD8α-DC與其他組相比炎癥明顯減輕(P0.05)。ELISA檢測(cè)血清中OVA特異性IgE結(jié)果顯示過繼轉(zhuǎn)移SJ/SEA小鼠CD8α-DC組與其他組相比明顯下降(P0.05),檢測(cè)過繼轉(zhuǎn)移SJ/SEA小鼠CD8α-DC組的BALF和脾細(xì)胞培養(yǎng)上清液中IL-4、IL-5水平明顯升高(P0.05),而IL-10、TGF-β水平明顯升高(P0.05)。第二部分,FASC檢測(cè)SEA刺激后DC與LPS刺激后DC相比,表面標(biāo)志CD80、CD86、CD40表達(dá)下降。IHC檢測(cè)結(jié)果顯示SEADC與LPSDC相比,CD11c表達(dá)率降低。qRT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示SEADC與LPSDC相比,表面標(biāo)志CD80m RNA(P0.05)、CD86mRNA表達(dá)下降(P0.05),SEADC與MediumDC相比細(xì)胞因子IL-1βmRNA(P0.05)、IL-10 mRNA(P0.05)、IL-12 mRNA(P0.05)、IL-6mRNA(P0.05)、IL-23 mRNA(P0.05)表達(dá)升高,TGF-βmRNA表達(dá)無顯著性差異。SEADC誘導(dǎo)OVA CD4+T與MediumDC相比表達(dá)IFN-γmRNA量降低(P0.05),IL-4mRNA表達(dá)升高(P0.05),IL-10mRNA表達(dá)升高(P0.05),IL-17mRNA表達(dá)量低(P0.05)。第三部分,SJ感染小鼠并誘發(fā)哮喘后肺部病理HE和PAS染色結(jié)果結(jié)果顯示SJ+OVA組小鼠與OVA組相比支氣管粘液分泌減輕,肺部MUC5AC表達(dá)減弱(P0.01)。肺部IHC結(jié)果顯示SJ+OVA組小鼠與OVA組相比IL-13表達(dá)區(qū)域減少,并且通過與CD4合染發(fā)現(xiàn)IL-13主要由CD4+T分泌。qRT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示SJ+OVA組小鼠肺部IL-13mRNA與OVA組相比明顯下降(P0.05),ELISA檢測(cè)脾細(xì)胞培養(yǎng)上清液中IL-13表達(dá)下降(P0.05)。過繼轉(zhuǎn)移SJ感染鼠DC到正常小鼠并誘發(fā)哮喘后發(fā)現(xiàn)脾細(xì)胞培養(yǎng)上清液中IL-13與過繼轉(zhuǎn)移正常小鼠DC并誘發(fā)哮喘組小鼠相比表達(dá)下降(P0.05)。體外培養(yǎng)骨髓DC細(xì)胞,qRT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示SEADC與LPSDC相比,IL-13mRNA表達(dá)下降(P0.05)。將DC與CD4+T共培養(yǎng),qRT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示SEADC誘導(dǎo)CD4+T表達(dá)IL-13mRNA與LPSDC相比明顯下降(P0.05)。結(jié)論SEA刺激后DC處于低分化狀態(tài),并且可以誘導(dǎo)CD4+T向Tregs方向分化。SJ/SEA小鼠CD8α-CD11c+D可以通過分泌IL-10等細(xì)胞因子促進(jìn)Tregs的分化從而抑制過敏性哮喘的發(fā)生。SJ感染小鼠DC還可以抑制CD4+T分泌IL-13從而抑制支氣管粘液的分泌。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R562.25;R532.21

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

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中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

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中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前9條

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5 劉維平;Periostin在膽管結(jié)扎和CCl_4誘導(dǎo)的小鼠肝纖維化中的功能[D];廈門大學(xué);2014年

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7 田李霞;結(jié)締組織生長(zhǎng)因子、骨膜蛋白在iNSIP肺組織中的表達(dá)[D];鄭州大學(xué);2014年

8 王瑋琳;哮喘小鼠白細(xì)胞介素-13和周期蛋白D1的表達(dá)及布地奈德、尼卡地平的干預(yù)作用[D];中南大學(xué);2014年

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本文編號(hào)：1213692