本文關(guān)鍵詞：mT0R-Cdc42信號通路在慢性阻塞性肺疾病小鼠肺泡巨噬細(xì)胞吞噬功能低下中的作用及機(jī)制

  更多相關(guān)文章： 肺疾病 慢性阻塞性 巨噬細(xì)胞 肺泡 吞噬 mTOR Cdc42 信號通路 細(xì)胞骨架 雷帕霉素

【摘要】：目的:探討哺乳動物雷帕霉素靶蛋白-細(xì)胞分裂周期蛋白42(m TOR-Cdc42)信號通路在慢性阻塞性肺疾病(慢阻肺)小鼠肺泡巨噬細(xì)胞(AM)吞噬功能低下中的作用。方法:將40只SPF級8周齡雄性BALB/c小鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為健康對照組、慢阻肺組、健康雷帕霉素組及慢阻肺雷帕霉素組,每組10只。采用90天單純香煙煙霧暴露法建立慢阻肺小鼠模型,造模結(jié)束后觀察各組小鼠的肺功能及病理變化,分離小鼠AM,其中健康雷帕霉素組及慢阻肺雷帕霉素組用終濃度10nmol/L雷帕霉素孵育24h。采用流式細(xì)胞術(shù)檢測小鼠AM吞噬異硫氰酸酯熒光素標(biāo)記大腸桿菌(FITC-E.coli)的能力;采用實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法檢測AM m TOR及Cdc42 m RNA的表達(dá);采用蛋白印跡(Western Blot)法檢測AM m TOR、磷酸化-m TOR(p-m TOR)以及Cdc42蛋白的表達(dá);采用小G蛋白活性(G-LISA)試劑盒檢測AM Cdc42的活性;采用激光共聚焦顯微鏡觀察AM細(xì)胞骨架變化。結(jié)果:(1)慢阻肺小鼠模型的肺功能及肺組織病理改變:吸氣峰流速(PIF)、呼氣峰流速(PEF)和呼出50%潮氣量時的流速(EF50):慢阻肺組(7.5±1.0、4.67±0.6、3.29±0.43)明顯低于健康對照組(11.61±1.12、7.63±0.44、5.05±0.37)(均P0.01);慢阻肺小鼠肺組織光鏡下可見明顯的支氣管炎癥和肺氣腫改變,健康對照組小鼠無上述改變。(2)AM吞噬FITC-E.coli的能力:用平均熒光強(qiáng)度(MFI)和吞噬陽性細(xì)胞百分比(吞噬%)表示:慢阻肺組(4060±590、28.65±1.26)較健康對照組(9190±988、67.50±4.56)明顯降低(均P0.01);慢阻肺雷帕霉素組(4856±762、38.31±1.71)比慢阻肺組增高(P0.05或P0.01);健康雷帕霉素組(9207±967、67.91±3.64)較健康對照組無差異。(3)AM m TOR、Cdc42 m RNA的表達(dá):慢阻肺組AM m TOR、Cdc42 m RNA的表達(dá)(2.62±0.46、2.56±0.50)較健康對照組(1.00±0.00、1.00±0.00)明顯增加(均P0.01);慢阻肺雷帕霉素組AM m TOR、Cdc42 m RNA的表達(dá)(1.40±0.36、1.38±0.34)較慢阻肺組明顯降低(均P0.01);健康雷帕霉素組AM m TOR、Cdc42 m RNA的表達(dá)(0.94±0.37、0.90±0.34)較健康對照組無差異。(4)AM m TOR、p-m TOR以及Cdc42蛋白表達(dá):慢阻肺組(1.3047±0.5188、1.4645±0.4330、1.6121±0.3749)較健康對照組(0.4829±0.2674、0.5798±0.2552、0.6671±0.2168)明顯增加(均P0.01);慢阻肺雷帕霉素組(0.8996±0.6634、0.9208±0.2771、0.9143±0.4764)較慢阻肺組降低(P0.05或P0.01);健康雷帕霉素組(0.4725±0.2845、0.5592±0.2176、0.6368±0.22)較健康對照組無差異。(5)AM Cdc42的活性:慢阻肺組(0.4591±0.0853)較健康對照組(0.2995±0.0674)明顯升高(P0.01);慢阻肺雷帕霉素組(0.3616±0.060)較慢阻肺組降低(P0.01);而健康雷帕霉素組(0.2668±0.0572)較健康對照組無差異。(6)AM細(xì)胞骨架變化:慢阻肺組AM細(xì)胞周圍可見絲狀偽足伸出雜亂、長短不一,板狀偽足面積增加;慢阻肺雷帕霉素組AM細(xì)胞形態(tài)規(guī)則,呈圓形或橢圓形,周圍可見較長的絲狀偽足;健康對照組和健康雷帕霉素組AM細(xì)胞形態(tài)規(guī)則,呈圓形或者橢圓形,細(xì)胞周圍未見明顯的絲狀偽足。(7)相關(guān)性分析:各組小鼠AM m TOR和Cdc42的m RNA、蛋白,p-m TOR蛋白以及Cdc42的活性與AM吞噬FITC-E.coli的平均熒光強(qiáng)度均呈負(fù)相關(guān)(P0.05或P0.01);各組小鼠AM m TOR的m RNA、蛋白及p-m TOR蛋白與Cdc42的m RNA、蛋白和活性均呈正相關(guān)(P0.05或者P0.01)。結(jié)論:單純香煙煙霧可復(fù)制慢阻肺小鼠模型;慢阻肺小鼠AM吞噬功能降低;m TOR-Cdc42信號通路在慢阻肺小鼠AM中處于活化狀態(tài);m TOR-Cdc42信號通路活化致慢阻肺小鼠AM細(xì)胞骨架異常重排與其吞噬功能低下有關(guān);雷帕霉素抑制慢阻肺m TOR-Cdc42信號通路,部分恢復(fù)慢阻肺小鼠AM吞噬功能。
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R563.9

【相似文獻(xiàn)】

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 王云潔;mT0R-Cdc42信號通路在慢性阻塞性肺疾病小鼠肺泡巨噬細(xì)胞吞噬功能低下中的作用及機(jī)制[D];蘭州大學(xué);2016年

，

本文編號：1141294