本文關(guān)鍵詞：支氣管哮喘誘導(dǎo)痰細(xì)菌群譜分析

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【摘要】：支氣管哮喘（以下簡稱哮喘）是由多種細(xì)胞（如嗜酸性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、氣道上皮細(xì)胞等）和細(xì)胞組分參與的氣道慢性炎癥性疾病。這種慢性炎癥與氣道高反應(yīng)相關(guān)，通常出現(xiàn)廣泛多變的可逆性氣流受限，并引起反復(fù)發(fā)作性的喘息、氣急、胸悶或咳嗽等癥狀，哮喘如診治不及時(shí)，隨病程的延長可產(chǎn)生氣道不可逆性縮窄和氣道重塑。流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，哮喘的發(fā)生與呼吸道細(xì)菌感染之間具有密切關(guān)系，定植于支氣管黏膜上的菌群在哮喘的發(fā)病機(jī)制中起到潛在的作用，其菌群組成能夠反映和影響呼吸道是否處于正�；蚣膊顟B(tài)。呼吸道菌群異�？赡苁侵夤芟l(fā)生及加重的潛在原因之一。哮喘患者呼吸道菌群研究是一個(gè)新的領(lǐng)域，隨著16S rRNA序列分析檢測技術(shù)在臨床研究中的廣泛應(yīng)用，人們對呼吸道菌群失調(diào)與哮喘發(fā)生發(fā)展之間的關(guān)系有了新的認(rèn)識。 本研究首次在國內(nèi)應(yīng)用16S rRNA序列分析技術(shù)檢測哮喘患者呼吸道細(xì)菌群譜，比較哮喘患者及健康人誘導(dǎo)痰細(xì)菌群譜組成的異同。 目的： 比較哮喘組和健康對照組誘導(dǎo)痰細(xì)菌菌群組成的異同。 方法： 隨機(jī)入組哮喘患者39例和健康人18例，分別進(jìn)行肺功能檢測及痰誘導(dǎo)試驗(yàn)，挑取有效痰組織，，進(jìn)行細(xì)菌基因組DNA提取并鑒定。對有效DNA標(biāo)本進(jìn)行細(xì)菌16S rRNA基因的V3-V5區(qū)擴(kuò)增和文庫構(gòu)建，通過Roche454FLX+平臺（BeijingGenomics Institute，BGI，深圳）對全部擴(kuò)增樣品進(jìn)行焦磷酸測序，測序數(shù)據(jù)與物種分類數(shù)據(jù)庫比對，進(jìn)行OTU的物種注釋，比較哮喘與健康對照組誘導(dǎo)痰樣本細(xì)菌的組成、豐度和多樣性。 結(jié)果： 1、研究對象的基本資料 ①39例哮喘患者成功獲取誘導(dǎo)痰27例（69.2%），18例健康對照中成功9例（50%），兩組間痰誘導(dǎo)成功率無明顯差異。 ②哮喘組和健康對照組相比，哮喘組誘導(dǎo)痰嗜酸性粒細(xì)胞百分比顯著高于健康對照組(33.6±25.9%vs0.8±0.6%, p0.001)，而肺功能FEV1%Pred，F(xiàn)EV1/FVC%顯著低于健康對照組（71.34±20.97%vs99.35±5.98%,65.67±10.44%vs82.94±3.42%, p＜0.01）。 2、誘導(dǎo)痰質(zhì)量 27例哮喘組和9例健康對照組在痰重量（0.14±0.031g vs0.13±0.025g,p=0.474）、細(xì)胞活力（88.4±4.6%vs89.0±2.6%, p=0.892）和鱗狀上皮細(xì)胞百分比（2.0±2.1%vs2.0±1.2%, p=0.541）等方面均無顯著性差異。 3、哮喘組與健康對照組物種多樣性分析 哮喘組與健康對照組相比，哮喘組OTU產(chǎn)量較健康對照組明顯減少（92.3±31.5vs107.9±15.2, p=0.016），而反應(yīng)物種多樣性的Shannon指數(shù)，哮喘組與健康對照組相比差異無顯著性，但哮喘組有下降趨勢[3.9(3.6-4.4) vs4.2(3.8-4.5), p=0.267]。 4、哮喘組與健康對照組細(xì)菌譜分析（門級別） ①所有痰液標(biāo)本均含有6大細(xì)菌門，分別是：擬桿菌門、厚壁菌門、變形桿菌門、梭桿菌門、放線菌門和螺旋體菌門，而擬桿菌門、厚壁菌門和變形桿菌門3種細(xì)菌含量達(dá)90%以上。 ②哮喘組與健康對照組相比，哮喘組放線菌門含量顯著高于健康對照組[2.2%(1.4%-4.7%) vs0.6%(0.4%-1.9%),P=0.02],但在擬桿菌門（27.0%±13.1%vs33.1%±10.4%）、厚壁菌門（33.8%±12.7%vs29.0%±13.8%）、變形桿菌門[26.1%(13.1%-33.9%) vs23.8%(12.3%-47.9%)]、梭桿菌門[3.2%(1.7%-8.1%) vs5.6%(4.9%-7.7%)]和螺旋體菌門[0.2%(0.1%-0.9%) vs0.4%(0.2%-1.2%)]上無顯著性差異。 ③重癥哮喘組與輕癥哮喘組相比,擬桿菌門（23.3%±12.8%vs30.4%±13.0%）、厚壁菌門（32.7%±14.4%vs34.9%±11.4%）、變形桿菌門（30.5%±22.8%vs 24.3%±14.9%）、梭桿菌門[2.9%(1.7%-8.1%) vs3.4%(1.9%-8.0%)]、放線菌門[2.4%(1.5%-5.8%) vs2.0%(1.2%-4.4%)]和螺旋體菌門[0.2%(0.0%-0.3%) vs0.3%(0.1%-1.1%)]的豐度，均無明顯差異。 5、哮喘組與健康對照組細(xì)菌譜分析（科級別） 哮喘組與健康對照組相比，哮喘組小單孢菌科（2.1783±2.0111vs0, p=0.014），放線菌科（1.6593±0.2468vs0.8170±0.282, p=0.046），甲基桿菌科（0.0876±0.0359vs0.0151±0.0093, p=0.041），葉瘤菌科（0.0682±0.0343vs0.0010±0.001, p=0.032），布魯氏菌科（0.0278±0.0156vs0.0014±0.0014,p=0.027），慢生根瘤菌科（0.0155±0.0132vs0,p=0.047）和伯克氏菌科（0.0062±0.0038vs0,p=0.047）均顯著高于健康對照組。 結(jié)論： 1.哮喘組與健康對照組相比，痰液標(biāo)本OTU產(chǎn)量下降，其中尤以重癥哮喘組下降明顯，反應(yīng)物種多樣性的Shannon指數(shù)在哮喘組與健康對照組無顯著性差異。 2.哮喘組和健康對照組痰液標(biāo)本均含有6大細(xì)菌門（放線菌門、擬桿菌門、梭桿菌門、變形桿菌門、螺旋體門和厚壁菌門），其中擬桿菌門、厚壁菌門和變形桿菌門3種細(xì)菌含量＞90%，放線菌門在哮喘組中顯著升高，其中尤以重癥哮喘組升高明顯。重癥哮喘組擬桿菌門與健康對照組相比p值差異雖無顯著性，但下降趨勢明顯。 3.哮喘組與健康對照組相比，哮喘組小單孢菌科、放線菌科、甲基桿菌科、葉瘤菌科、布魯氏菌科、慢生根瘤菌科和伯克氏菌科顯著高于健康對照組。 4.重癥哮喘組誘導(dǎo)痰細(xì)菌群譜的特征，主要表現(xiàn)為：Shannon指數(shù)變異范圍大，OTU產(chǎn)量下降明顯，放線菌門含量升高，擬桿菌門有下降趨勢。 5.哮喘呼吸道菌群數(shù)量的異常究竟是引起氣道炎癥的原因，還是哮喘氣道炎癥所產(chǎn)生的結(jié)果，有待進(jìn)一步研究。
【關(guān)鍵詞】：支氣管哮喘 16S rRNA 誘導(dǎo)痰 細(xì)菌譜 多樣性 豐度
【學(xué)位授予單位】：廣州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R562.25
【目錄】：

• 中英文縮寫對照5-6
• 中文摘要6-9
• Abstract9-13
• 前言13-14
• 對象與方法14-25
• 結(jié)果25-36
• 討論36-41
• 結(jié)語和展望41-42
• 參考文獻(xiàn)42-45
• 碩士在讀期間論文發(fā)表、專業(yè)學(xué)習(xí)及社會實(shí)踐45-47
• 綜述47-55
• 參考文獻(xiàn)52-55
• 附錄1 哮喘控制測試(ACT 評分表)55-56
• 附錄2 華大基因測序樣品檢測報(bào)告56-59
• 附錄3 主要試劑的配制59-60
• 致謝60-61

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本文編號：1073107