本文關(guān)鍵詞：共刺激分子B7-H3對LPS誘導(dǎo)的急性肺損傷的免疫調(diào)節(jié)作用及其機(jī)制研究

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【摘要】：急性肺損傷(Acute lung injury,ALI)作為一種肺部的炎癥性損傷,是臨床上較為常見的急危重癥之一,具有高致死率和致殘率的特點(diǎn)。如何有效預(yù)防和治療ALI是臨床上所面臨的難題之一。B7-H3作為一個共刺激分子在固有免疫應(yīng)答和調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要的作用,但B7-H3在ALI中的免疫調(diào)節(jié)目前知之甚少。本研究通過建立內(nèi)毒素誘導(dǎo)的小鼠ALI模型,探討B(tài)7-H3在ALI發(fā)生發(fā)展中的調(diào)節(jié)作用,進(jìn)一步闡明B7-H3對ALI的調(diào)節(jié)機(jī)制,以期為臨床ALI的免疫治療提供一個新的靶點(diǎn)。第一部分小鼠急性肺損傷模型的建立目的:建立一種成功率和存活率高的細(xì)菌脂多糖誘導(dǎo)的小鼠急性肺損傷模型。方法:20只雄性BALB/c小鼠隨機(jī)分為脂多糖組(LPS組)和生理鹽水對照組。經(jīng)鼻腔滴注LPS建立小鼠急性肺損傷模型,記錄模型建立的成功率及小鼠的存活率。24h后,收集小鼠的肺組織和肺泡灌洗液(BALF),通過細(xì)胞計數(shù)和瑞氏染色明確BALF中的白細(xì)胞總數(shù)和中性粒細(xì)胞的數(shù)量,BCA法測定BALF中總蛋白的含量,ELISA法分析BALF中炎癥因子及趨化因子的蛋白水平變化。實(shí)時定量PCR和ELISA法分別檢測肺組織中炎癥因子和趨化因子的m RNA和蛋白水平的變化。肺組織經(jīng)HE染色于經(jīng)光學(xué)顯微鏡下觀察肺組織病理學(xué)改變。結(jié)果:HE染色發(fā)現(xiàn)LPS組小鼠肺組織出現(xiàn)不同程度的肺組織充血、微血管內(nèi)皮損傷出血、炎性滲出、中性粒細(xì)胞浸潤、肺泡壁增厚和破壞及透明膜形成等急性肺損傷的病理改變,而對照組的小鼠未見上述病理改變;較之于對照組,LPS組小鼠BALF中總細(xì)胞數(shù)和中性粒細(xì)胞數(shù)均顯著增加(p0.01);與對照組相比,LPS組小鼠BALF中的總蛋白含量、炎癥因子及趨化因子水平也發(fā)生明顯升高(p0.05)。與對照組相比,LPS組小鼠肺組織中的炎癥因子和趨化因子的m RNA和蛋白水平均發(fā)生明顯升高(p0.01)。結(jié)論:經(jīng)鼻腔滴注LPS構(gòu)建了小鼠急性肺損傷模型,并證實(shí)該模型具有較高的成功率和存活率。第二部分共刺激分子B7-H3通過調(diào)節(jié)中性粒細(xì)胞的功能在急性肺損傷中的保護(hù)作用目的:通過已建立的小鼠急性肺損傷模型,分析共刺激分子B7-H3對LPS誘導(dǎo)的急性肺損傷的調(diào)節(jié)作用。方法:40只雄性BALB/c小鼠隨機(jī)均分為:對照組、B7-H3單獨(dú)處理組、LPS組和LPS+B7-H3聯(lián)合處理組。采用鼻孔滴注LPS建立小鼠內(nèi)毒素急性肺損傷模型,建模24h后,收集各實(shí)驗(yàn)組小鼠的肺組織和BALF。各實(shí)驗(yàn)組的肺組織經(jīng)HE染色后經(jīng)光學(xué)顯微鏡觀察肺組織病理學(xué)改變;BCA法測定BALF中總蛋白的含量;通過細(xì)胞計數(shù)和瑞氏染色明確BALF中的白細(xì)胞總數(shù)和中性粒細(xì)胞的數(shù)量;通過髓過氧化物酶(MPO)試劑盒檢測肺組織MPO活性;實(shí)時定量PCR和ELISA法檢測肺組織中炎癥因子和趨化因子的m RNA和蛋白水平變化;ELISA法測定BALF中炎癥因子和趨化因子的蛋白水平變化。結(jié)果:HE染色結(jié)果發(fā)現(xiàn)采用B7-H3重組蛋白能減輕LPS誘導(dǎo)ALI模型肺組織的病理損傷程度、顯著降低LPS誘導(dǎo)ALI模型BALF中白細(xì)胞數(shù)、中性粒細(xì)胞數(shù)和總蛋白的含量以及顯著降低LPS誘導(dǎo)ALI模型肺組織中MPO的活性(p0.05);B7-H3能降低BALF和肺組織中趨化因子(CXCL2)的表達(dá),與LPS相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義,但不影響B(tài)ALF中炎癥因子TNF-α,IL-1β和IL-6表達(dá)的變化。結(jié)論:通過ALI模型的研究發(fā)現(xiàn),B7-H3能減輕LPS誘導(dǎo)ALI模型肺組織的病理損傷程度,降低肺血管的通透性,抑制肺組織MPO活性,降低趨化因子的表達(dá)水平,進(jìn)而發(fā)揮保護(hù)作用。第三部分共刺激分子B7-H3通過抑制中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞趨化對急性肺損傷的保護(hù)作用機(jī)制目的:探討共刺激分子B7-H3對中性粒細(xì)胞和肺泡巨噬細(xì)胞的調(diào)控作用,分析B7-H3在急性肺損傷中的作用機(jī)制。方法:40只雄性BALB/c小鼠隨機(jī)均分為:對照組、B7-H3單獨(dú)處理組、LPS組和LPS+B7-H3聯(lián)合處理組。建立小鼠急性肺損傷模型24h后,收集各實(shí)驗(yàn)組小鼠的BALF,流式細(xì)胞術(shù)檢測BALF中的中性粒細(xì)胞凋亡情況。通過膠原酶消化法、貼壁法和磁珠分選獲得小鼠肺內(nèi)皮細(xì)胞、肺泡巨噬細(xì)胞和骨髓源中性粒細(xì)胞。分別在體外對中性粒細(xì)胞的凋亡、趨化及跨內(nèi)皮遷移進(jìn)行評價。同時采用流式細(xì)胞術(shù)分析LPS刺激后中性粒細(xì)胞表面CXCR2和Mac-1的表達(dá)水平;化學(xué)發(fā)光法檢測活性氧(ROS)的生成;實(shí)時定量PCR及ELISA檢測肺泡巨噬細(xì)胞中趨化因子CXCL2的m RNA和蛋白水平;流式細(xì)胞術(shù)檢測肺泡巨噬細(xì)胞中NF-k B p65和MAPK p38的磷酸化水平。結(jié)果:在體內(nèi)和體外模型中,B7-H3重組蛋白處理對中性粒細(xì)胞凋亡無影響,但能夠顯著降低LPS刺激后PMN的趨化能力,且PMN表面CXCR2的表達(dá)明顯下調(diào)。B7-H3能夠顯著降低LPS刺激后PMN的跨內(nèi)皮細(xì)胞遷移能力,且PMN表面Mac-1的表達(dá)也明顯下調(diào),能夠顯著抑制LPS刺激后ROS的釋放。同時還證實(shí)B7-H3能夠顯著減少LPS刺激后肺泡巨噬細(xì)胞中CXCL2的表達(dá),并且會導(dǎo)致NF-k B p65磷酸化水平的下調(diào),但是對MAPK p38的磷酸化水平?jīng)]有作用。結(jié)論:B7-H3重組蛋白不僅影響中性粒細(xì)胞的趨化作用、中性粒細(xì)胞跨肺內(nèi)皮單層細(xì)胞的遷移作用、中性粒細(xì)胞的ROS產(chǎn)生,還影響肺泡巨噬細(xì)胞上趨化因子CXCL2的表達(dá)以及NF-k B信號通路中p65磷酸化水平。由此可見,B7-H3主要通過抑制中性粒細(xì)胞和肺泡巨噬細(xì)胞向肺損傷部位趨化,繼而減輕肺損傷起到保護(hù)作用。
【關(guān)鍵詞】：LPS ALI 鼻腔滴注 B7-H3 LPS ALI 炎癥因子 趨化因子 B7-H3 ALI LPS 中性粒細(xì)胞 凋亡 趨化
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R563
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-12
• 前言12-15
• 第一部分 小鼠急性肺損傷模型的建立15-28
• 材料與方法15-21
• 結(jié)果21-26
• 討論26-28
• 第二部分 共刺激分子 B7-H3 通過調(diào)節(jié)中性粒細(xì)胞的功能在急性肺損傷中的保護(hù)作用28-42
• 材料和方法29-32
• 結(jié)果32-39
• 討論39-42
• 第三部分 共刺激分子B7-H3 通過抑制中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞趨化對急性肺損傷的保護(hù)作用機(jī)制42-58
• 材料和方法42-47
• 結(jié)果47-56
• 討論56-58
• 全文總結(jié)58-59
• 參考文獻(xiàn)59-64
• 綜述64-74
• 結(jié)語68
• 參考文獻(xiàn)68-74
• 中英文對照縮略詞表74-75
• 攻讀博士期間發(fā)表的論文75-76
• 本研究所獲得的基金資助76-77
• 致謝77-78

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 葛全興;陳墾;王暉;;炎癥介質(zhì)在急性胰腺炎發(fā)病機(jī)制中的作用研究進(jìn)展[J];廣東藥學(xué)院學(xué)報;2008年01期

2 張小容;邱桐;;急性呼吸窘迫綜合征的研究進(jìn)展[J];甘肅中醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2010年01期

3 高曉玲;氧自由基在急性肺損傷發(fā)病中的作用[J];國外醫(yī)學(xué)(呼吸系統(tǒng)分冊);2002年06期

4 彭章龍;體外循環(huán)后肺損害[J];國外醫(yī)學(xué).麻醉學(xué)與復(fù)蘇分冊;2002年01期

5 李曼;陸林;沈衛(wèi)峰;;高遷移率族蛋白B1與心血管疾病關(guān)系的研究進(jìn)展[J];國際心血管病雜志;2013年04期

6 范雪;張宏濤;卞淼;逄利;;肌鈣蛋白對82例急性呼吸窘迫綜合征患者預(yù)后判斷的價值[J];重慶醫(yī)學(xué);2013年32期

7 石計朋;閆建國;韓金芬;唐成和;錢燕;;ω-3PUFAs對LPS誘導(dǎo)急性肺損傷大鼠前炎癥因子TNF-α、IL-1β、IL-6的影響[J];中國兒童保健雜志;2014年01期

8 俞敏;田兆方;;急性肺損傷時損傷標(biāo)志物的研究進(jìn)展[J];中國當(dāng)代兒科雜志;2014年01期

9 石計朋;閆建國;韓金芬;唐成和;余震;;ω-3PUFAs、ω-6PUFAs和ω-9MUFAs對LPS誘導(dǎo)急性肺損傷大鼠血清IL-6及細(xì)胞凋亡的影響[J];中國兒童保健雜志;2014年03期

10 陳碩;陳瓊?cè)A;;脂氧素與子宮內(nèi)膜異位癥[J];國際生殖健康/計劃生育雜志;2014年01期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 ;Chinese Herbal 912 Compound Improves Microcirculatory Disturbances Induced by Endotoxin in Rats[A];全國中青年中西醫(yī)結(jié)合學(xué)術(shù)（英語）交流會議論文集[C];2002年

2 劉華東;熊瑋;董少紅;廖碧紅;劉啟云;梁新劍;;HMGB1、cTnI、BNP在急性冠脈綜合征患者中的相關(guān)性分析[A];中國轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)和整合醫(yī)學(xué)研討會論文綜合刊[C];2015年

3 高小力;孟祥豹;蔣益民;李中軍;葉加;;沙利度胺衍生物ZSN-12抗急性肺損傷作用及機(jī)制探討[A];2014年中國藥學(xué)大會暨第十四屆中國藥師周論文集[C];2014年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 陳志寶;沃尼妙林的抗炎作用及對炎癥信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的調(diào)控[D];吉林大學(xué);2011年

2 王玲;高氧液對低壓缺氧復(fù)合光氣中毒急性肺損傷保護(hù)作用及相關(guān)機(jī)理研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2011年

3 吳山;1.細(xì)胞因子在肺水腫發(fā)生中作用的研究 2.肺癌細(xì)胞P53表達(dá)及凋亡的研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2002年

4 趙建;全氟異丁烯吸入性肺損傷的防治藥物研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2004年

5 吳秋平;聲門緊閉狀態(tài)下肺撞擊傷的發(fā)生特點(diǎn)及機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2004年

6 馮英凱;高遷移率族蛋白1在內(nèi)毒素急性肺損傷中性粒細(xì)胞凋亡改變中的作用探討[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2005年

7 王興友;糖皮質(zhì)激素保護(hù)血管內(nèi)皮炎性損傷的受體前調(diào)節(jié)機(jī)制[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2005年

8 沈偉鋒;鹽酸戊乙奎醚對內(nèi)毒素誘導(dǎo)急性肺損傷大鼠的保護(hù)作用及其分子機(jī)制研究[D];浙江大學(xué);2006年

9 錢小順;肺泡巨噬細(xì)胞在老年多器官功能衰竭肺啟動中的作用[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2006年

10 周曉紅;硫化氫在脂多糖所致的急性肺損傷中的作用及其與一氧化氮的相互調(diào)節(jié)關(guān)系[D];河北醫(yī)科大學(xué);2006年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 白斗;環(huán)氧合酶-2抑制劑在重癥急性胰腺炎大鼠模型中作用機(jī)制的研究[D];瀘州醫(yī)學(xué)院;2011年

2 石婭妮;不同劑量阿托伐他汀對脂多糖致大鼠急性肺損傷的影響[D];瀘州醫(yī)學(xué)院;2011年

3 許德明;酸敏感鈉—?dú)浣粨Q抑制劑卡立泊來德對大鼠LPS急性肺損傷的影響[D];福建醫(yī)科大學(xué);2010年

4 馬風(fēng)雷;鹽酸戊乙奎醚對食管癌根治術(shù)單肺通氣患者炎癥因子的影響[D];鄭州大學(xué);2011年

5 李奇智;MIF及ICAM-1在大鼠重癥急性胰腺炎相關(guān)肺損傷中的表達(dá)[D];青海大學(xué);2011年

6 陳婷婷;蛋白酶抑制劑烏司他丁對于創(chuàng)傷失血性休克兔保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2003年

7 李艷玲;低強(qiáng)度激光與丹參注射液有效成分對中性粒細(xì)胞呼吸爆發(fā)影響的初步研究[D];華南師范大學(xué);2003年

8 高曉玲;膽紅素對抗內(nèi)毒素誘導(dǎo)致大鼠急性肺損傷的實(shí)驗(yàn)研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2002年

9 王玲;高氧液對急性光氣中毒性肺損傷防治作用及機(jī)理的實(shí)驗(yàn)研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2004年

10 池詔丞;大鼠肝臟缺血預(yù)處理中一氧化氮和內(nèi)皮素對微循環(huán)的調(diào)節(jié)作用[D];吉林大學(xué);2004年

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本文編號：1070696