本文關(guān)鍵詞：支氣管哮喘患者氣道和外周血IL-25的表達(dá)水平與哮喘表型關(guān)系的研究

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【摘要】：第一部分哮喘患者氣道上皮IL-25及其受體IL-17RB的表達(dá) 目的：檢測支氣管哮喘患者纖支鏡氣道上皮刷片細(xì)胞及氣道活檢組織中IL-25及其受體IL-17RB的mRNA水平和蛋白表達(dá)情況,探索IL-25及其受體IL-17RB的表達(dá)部位。 方法：我們選取43例支氣管哮喘患者及21例健康對照者作為研究對象,首先統(tǒng)計納入研究的研究對象的一般特征資料,記錄所有受試者的肺功能測量指標(biāo)FEV1%預(yù)計值和PD20值(引起通氣功能指標(biāo)FEV1下降20%時的激發(fā)劑累積劑量)、外周血總IgE含量及外周血中嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)目。隨后,我們通過纖維支氣管鏡檢查對所有受試者進(jìn)行氣道上皮細(xì)胞刷片及氣道組織活檢,使用實時熒光定量PCR (real-time PCR)方法檢測氣道上皮刷片細(xì)胞中IL-25及氣道活檢組織中IL-17RB的mRNA表達(dá)水平,利用活檢組織切片進(jìn)行免疫組織化學(xué)方法檢測IL-25及其受體IL-17RB的蛋白表達(dá)情況,并且在顯微鏡下計數(shù)免疫組織化學(xué)染色的切片中IL-25及其受體IL-17RB染色陽性的細(xì)胞數(shù)目。通過相關(guān)性分析評價氣道上皮刷片細(xì)胞中IL-25的mRNA水平與氣道活檢組織中IL-17RB的mRNA水平之間的相關(guān)關(guān)系、氣道上皮刷片細(xì)胞中IL-25的mRNA水平與IL-25染色陽性的細(xì)胞數(shù)之間的相關(guān)關(guān)系,以及IL-25染色陽性的細(xì)胞數(shù)與IL-17RB染色陽性細(xì)胞數(shù)之間的相關(guān)關(guān)系。 結(jié)果：支氣管哮喘患者的肺功能FEV1%預(yù)計值和PD20值顯著低于健康對照者。而外周血總IgE含量及外周血中嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)目則明顯高于健康對照者,差異均有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P0.0001)。同時,real-time PCR方法檢測氣道上皮刷片細(xì)胞中IL-25及氣道活檢組織中IL-17RB的mRNA表達(dá)水平的結(jié)果顯示：支氣管哮喘患者氣道上皮刷片細(xì)胞中IL-25的mRNA表達(dá)水平明顯高于正常對照者,差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P0.0001)；且氣道活檢組織中IL-17RB的mRNA表達(dá)水平也明顯高于正常對照者,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.027)。此外,通過免疫組織化學(xué)方法,我們看到,IL-25及其受體IL-17RB染色陽性的細(xì)胞主要是氣道上皮細(xì)胞,且支氣管哮喘患者的組織切片中IL-25及其受體IL-17RB染色陽性的細(xì)胞數(shù)目明顯高于正常對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.002和P0.0001)。與正常對照者相比,支氣管哮喘患者的氣道上皮細(xì)胞及杯狀細(xì)胞內(nèi),IL-25及其受體IL-17RB的蛋白表達(dá)明顯增高,棕黃色沉積明顯,尤其以IL-25的表達(dá)增高更明顯。此外,相關(guān)性分析結(jié)果顯示：支氣管哮喘患者氣道刷片細(xì)胞中IL-25的mRNA水平與氣道活檢組織中IL-17RB的mRNA水平呈顯著正相關(guān)關(guān)系(相關(guān)系數(shù)為0.619,P0.001)；支氣管哮喘患者氣道刷片細(xì)胞中IL-25的mRNA水平與免疫組織化學(xué)方法中IL-25染色陽性的細(xì)胞數(shù)目呈顯著正相關(guān)關(guān)系(相關(guān)系數(shù)為0.75,P0.0001)；且氣道活檢組織中IL-25的陽性細(xì)胞數(shù)與IL-17RB陽性細(xì)胞數(shù)也呈顯著正相關(guān)關(guān)系(相關(guān)系數(shù)為0.55,P=0.0003)。 結(jié)論：支氣管哮喘患者的IL-25及其受體IL-17RB主要表達(dá)于氣道上皮細(xì)胞。與對照組相比,一部分哮喘患者氣道上皮細(xì)胞IL-25及其受體IL-17RB的表達(dá)明顯增加。 第二部分IL-25的表達(dá)水平與支氣管哮喘患者的氣道高反應(yīng)性、氣道嗜酸性粒細(xì)胞炎癥、過敏狀態(tài)、粘液分泌以及氣道重塑之間的關(guān)系 目的：統(tǒng)計所有納入研究的受試者的肺功能測量指標(biāo)、外周血嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)目、外周血總IgE含量、過敏原皮試情況及氣道活檢組織的基底膜厚度,檢測氣道粘液Muc5Ac和Muc5B的表達(dá)情況,觀察支氣管哮喘患者與健康對照者以及不同的支氣管哮喘患者之間上述各指標(biāo)的差異,探討IL-25的表達(dá)水平與支氣管哮喘患者的氣道高反應(yīng)性、氣道嗜酸性粒細(xì)胞炎癥、過敏狀態(tài)、粘液分泌以及氣道重塑之間的關(guān)系。方法：綜合第一部分實驗結(jié)果進(jìn)行分層分析,我們發(fā)現(xiàn),僅有一部分(約50%)的支氣管哮喘患者氣道上皮刷片細(xì)胞中IL-25的mRNA水平明顯升高,而另一部分哮喘患者的IL-25mRNA水平與健康對照者相比無明顯差異。因此,依據(jù)支氣管氣道上皮刷片細(xì)胞中IL-25的mRNA表達(dá)水平,我們將哮喘患者分為"IL-25-high”和"IL-25-low"兩個亞型。同時,與氣道上皮刷片細(xì)胞中IL-25的mRNA表達(dá)水平一致,也僅有部分哮喘患者活檢組織中IL-17RB的mRNA水平,以及部分哮喘患者的IL-25及其受體IL-17RB染色陽性的細(xì)胞數(shù)目顯著高于正常對照者。我們選取支氣管哮喘患者及健康對照者作為研究對象,記錄所有受試者的年齡、性別、體重指數(shù)等基本信息資料。通過肺功能+激發(fā)／舒張試驗檢測所有受試者的肺通氣功能情況以及激發(fā)試驗時引起肺通氣功能指標(biāo)FEV1下降20%的激發(fā)劑累積劑量(PD20)和舒張試驗時FEV1增加的量或比例。通過纖維支氣管鏡檢查獲取受試者支氣管氣道粘膜的活檢組織,進(jìn)行石蠟包埋活檢組織切片,HE染色后在光鏡下進(jìn)行活檢組織中嗜酸性粒細(xì)胞的計數(shù)及氣道基底膜厚度的測定。記錄研究對象外周血中嗜酸性粒細(xì)胞的數(shù)目和外周血總IgE的含量。利用過敏原皮試評定測定支氣管哮喘患者和健康對照者的過敏狀態(tài)。通過real-time PCR和雙重免疫熒光染色檢測氣道粘液Muc5Ac和Muc5B的分泌情況。 結(jié)果："IL-25-high"和"IL-25-low"兩個不同亞型的支氣管哮喘患者在年齡、性別、體重指數(shù)和肺功能(FEV1%預(yù)計值)方面的比較無明顯差異,但"IL-25-high"支氣管哮喘患者的肺功能PD20水平卻明顯低于"IL-25-low"支氣管哮喘患者和正常對照者(P=0.0048)。然而,"IL-25-high"支氣管哮喘患者氣道活檢組織及外周血中嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)目則明顯高于"IL-25-low"支氣管哮喘患者(P值分別為0.003和0.045,)和正常對照者,且"IL-25-high"支氣管哮喘患者外周血總IgE水平和過敏原皮試陽性的個數(shù)也均明顯高于'IL-25-low"支氣管哮喘患者(P值分別為0.001和0.018)和正常對照者。我們通過real-time PCR檢測氣道刷片細(xì)胞中粘液的表達(dá)水平,結(jié)果顯示："IL-25-high"支氣管哮喘患者氣道粘液Muc5Ac的mRNA表達(dá)水平明顯高于"IL-25-low"支氣管哮喘患者(P=0.003)和正常對照者(P0.0001),而Muc5B的表達(dá)卻剛好相反(P值均0.0001)。通過雙重免疫熒光染色,我們可以看到,與正常對照者相比,"IL-25-high"支氣管哮喘患者氣道粘液Muc5Ac的蛋白表達(dá)明顯增高,而粘液Muc5B低表達(dá)或不表達(dá),而"IL-25-low"哮喘患者則呈現(xiàn)完全相反的表達(dá)情況,即氣道粘液Muc5B的蛋白表達(dá)明顯增高,而粘液Muc5Ac低表達(dá)或不表達(dá)。此外,"IL-25-high"支氣管哮喘患者氣道活檢組織標(biāo)本粘膜下的基底膜厚度明顯高于"IL-25-low"支氣管哮喘患者和正常對照者,且"IL-25-high"和"IL-25-low"支氣管哮喘患者氣道粘膜下基底膜厚度的差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.0006)。 結(jié)論：根據(jù)氣道上皮細(xì)胞IL-25的表達(dá)水平可以把哮喘患者分為"IL-25-high"和"IL-25-low"兩個亞型。"IL-25-high"支氣管哮喘患者有更明顯的氣道高反應(yīng)性和更嚴(yán)重氣道嗜酸性粒細(xì)胞炎癥,且氣道粘液分泌明顯增多,氣道重塑情況也更顯著。 第三部分"IL-25-high"和"IL-25-low"支氣管哮喘患者對吸入激素治療的反應(yīng)性 目的：通過檢測支氣管哮喘患者外周血血漿中IL-25的含量,評價支氣管哮喘患者氣道上皮刷片細(xì)胞中IL-25的mRNA表達(dá)水平與外周血血漿中IL-25的含量的相關(guān)性。然后,通過比較‘'IL-25-high"和"IL-25-low"支氣管哮喘患者治療前后外周血血漿中IL-25的變化水平、經(jīng)吸入激素治療后肺功能(FEV1和PD20)的改善情況以及支氣管哮喘的臨床癥狀評估狀態(tài),探討兩種亞型的支氣管哮喘患者與吸入激素治療反應(yīng)性之間的關(guān)系,評價"IL-25-high"和"IL-25-low"支氣管哮喘患者經(jīng)吸入激素治療后的治療效果。 方法：選取43例就診于同濟(jì)醫(yī)院呼吸與危重癥醫(yī)學(xué)科門診的支氣管哮喘患者和21例健康對照者作為研究對象,收集各研究對象的外周血血漿標(biāo)本,并規(guī)律給予支氣管哮喘患者吸入性糖皮質(zhì)激素布地奈德(200ug/次,一天兩次)治療,療程8周。首先依據(jù)氣道上皮刷片細(xì)胞中IL-25的mRNA表達(dá)水平將支氣管哮喘患者分為"IL-25-high"支氣管哮喘和“IL-25-low”支氣管哮喘兩個亞型,然后再以外周血血漿中IL-25的含量55pg/ml為臨界點,將55pg/ml的研究對象歸為"plasma IL-25-high"支氣管哮喘患者,∠55pg/ml的歸為"plasma IL-25-low"支氣管哮喘患者。通過檢測不同分類及亞型的支氣管哮喘患者在吸入性糖皮質(zhì)激素布地奈德治療8周過程中外周血血漿中IL-25的變化水平以及肺功能測量指標(biāo)FEV1和PD20的變化情況,了解支氣管哮喘患者氣道上皮細(xì)胞和外周血血漿中IL-25的表達(dá)水平與吸入性糖皮質(zhì)激素治療反應(yīng)性之間的關(guān)系。同時,通過支氣管哮喘控制測試(ACT)和支氣管哮喘控制調(diào)查問卷(ACQ-5),在支氣管哮喘患者初診、治療第4周和第8周時分別進(jìn)行支氣管哮喘患者的臨床癥狀評分,了解"IL-25-high"和‘'IL-25-low"支氣管哮喘患者在布地奈德吸入治療8周過程中支氣管哮喘臨床癥狀(喘息、呼吸困難、夜間發(fā)作次數(shù)等)的改善情況,以評價"IL-25-high"和"IL-25-low"支氣管哮喘患者對吸入性糖皮質(zhì)激素的治療效果。 結(jié)果：ELISA檢測結(jié)果顯示：不同的支氣管哮喘患者外周血血漿中IL-25的含量有較大差異,與支氣管哮喘患者氣道上皮刷片細(xì)胞中IL-25的mRNA表達(dá)相一致,僅有一部分(約50%)哮喘患者外周血血漿中IL-25的表達(dá)水平明顯升高,而另一部分哮喘患者外周血血漿中IL-25的表達(dá)水平與健康對照者相比無明顯差異,且"IL-25-high"支氣管哮喘患者的IL-25含量顯著高于"IL-25-low"支氣管哮喘患者。此外,支氣管哮喘患者氣道上皮刷片細(xì)胞中IL-25的mRNA表達(dá)水平與外周血血漿中IL-25的含量存在顯著正相關(guān)關(guān)系(相關(guān)系數(shù)為0.743,P0.0001)。基于此,我們依據(jù)外周血血漿中IL-25的含量55pg/ml為臨界點,將支氣管哮喘患者分為"plasma IL-25-high"和"plasma IL-25-low"支氣管哮喘兩個亞型。與治療前相比,在吸入性糖皮質(zhì)激素布地奈德治療第4周時,"IL-25-high"支氣管哮喘外周血血漿中IL-25的表達(dá)水平出現(xiàn)明顯的下降趨勢,而在"IL-25-low"支氣管哮喘患者外周血血漿中,這種下降趨勢卻并不明顯,甚至有個別樣本出現(xiàn)不降反升的情況。經(jīng)吸入性糖皮質(zhì)激素布地奈德治療第8周時,"IL-25-high"支氣管哮喘外周血血漿中IL-25的表達(dá)水平仍有緩慢下降趨勢。同時,在吸入性糖皮質(zhì)激素布地奈德治療第4周和第8周時,"IL-25-high"支氣管哮喘患者肺功能FEV1和激發(fā)試驗PD20值的增加量明顯升高,而"IL-25-low"支氣管哮喘患者的肺功能FEV1和激發(fā)試驗PD20值變化均不明顯,兩組之間差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.001)。此外,經(jīng)過4周和8周的吸入性糖皮質(zhì)激素治療后,"plasma IL-25-high"支氣管哮喘患者肺功能FEV1和激發(fā)試驗PD20值的增加量明顯高于"plasma IL-25-low"支氣管哮喘患者。通過ACT和ACQ-5問卷調(diào)查,我們也看到,一部分對吸入性糖皮質(zhì)激素治療反應(yīng)性更敏感的"IL-25-high"支氣管哮喘患者在布地奈德吸入治療8周過程中哮喘癥狀(喘息、呼吸困難、夜間發(fā)作次數(shù)等)得到明顯改善,其ACT評分較高,ACQ-5評分偏低；而"IL-25-low"支氣管哮喘患者在布地奈德吸入治療8周過程中哮喘癥狀改善并不明顯,其ACT評分較低,ACQ-5評分偏高。 結(jié)論：" IL-25-high "支氣管哮喘對吸入性糖皮質(zhì)激素治療的反應(yīng)性明顯優(yōu)于"IL-25-low"支氣管哮喘。血漿中IL-25的水平與氣道上皮細(xì)胞中IL-25表達(dá)水平有顯著相關(guān)性,且吸入性糖皮質(zhì)激素的治療降低"IL-25-high"支氣管哮喘患者外周血血漿中IL-25的水平。
【關(guān)鍵詞】：支氣管哮喘 IL-25 IL-17RB 氣道上皮細(xì)胞 支氣管哮喘 “IL-25-high” “IL-25-low” 哮喘亞型 支氣管哮喘 “IL-25-high” “IL-25-low” “plasma IL-25-high” “plasma IL-25-low” 吸入性糖皮質(zhì)激素
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R562.25
【目錄】：

• 中文摘要9-15
• ABSTRACT15-22
• 前 言22-28
• 參考文獻(xiàn)24-28
• 第一部分 哮喘患者氣道上皮IL-25及其受體IL-17RB的表達(dá)28-54
• 前言28-30
• 材料與方法30-42
• 實驗結(jié)果42-46
• 討論46-49
• 參考文獻(xiàn)49-54
• 第二部分 IL-25的表達(dá)水平與支氣管哮喘患者的氣道高反應(yīng)性、氣道嗜酸性粒細(xì)胞炎癥、過敏狀態(tài)、粘液分泌以及氣道重塑之間的關(guān)系54-79
• 前言54-56
• 材料與方法56-66
• 實驗結(jié)果66-72
• 討論72-75
• 參考文獻(xiàn)75-79
• 第三部分 “IL-25-high”和“IL-25-low”支氣管哮喘患者對吸入激素治療的反應(yīng)性79-103
• 前言79-81
• 材料和方法81-90
• 實驗結(jié)果90-96
• 討論96-99
• 參考文獻(xiàn)99-103
• 全文小結(jié)103-104
• 綜述104-124
• 參考文獻(xiàn)112-124
• 附錄1 全文縮略詞表124-126
• 附錄2 攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文126-128
• 致謝128

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9 孫慶華;白介素-5、白介素-8在支氣管哮喘和慢性支氣管炎中的作用[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);1996年

10 尹小文;支氣管哮喘患者癥狀、負(fù)面情緒及肺功能相關(guān)性研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2005年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 竇秀莉;青島市城區(qū)支氣管哮喘危險因素的流行病學(xué)調(diào)查[D];泰山醫(yī)學(xué)院;2009年

2 高濤;平喘湯聯(lián)合ICS-LABA治療支氣管哮喘非急性發(fā)作期的臨床觀察[D];泰山醫(yī)學(xué)院;2014年

3 羅天雯;支氣管哮喘患者外周血中IL-33及其可溶性受體sST2的表達(dá)水平和意義[D];寧夏醫(yī)科大學(xué);2015年

4 何芳;Toll樣受體2介導(dǎo)的高遷移率族蛋白1信號分子在小鼠支氣管哮喘中的作用機制[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

5 趙冰;學(xué)齡前兒童反復(fù)喘息及學(xué)齡兒童支氣管哮喘相關(guān)因素分析[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

6 遲繁繁;NKT細(xì)胞對不同嚴(yán)重程度支氣管哮喘的實驗研究[D];蘇州大學(xué);2015年

7 邵美琪;骨化三醇對支氣管哮喘患者外周血Th17/Treg表達(dá)的調(diào)節(jié)作用[D];山西醫(yī)科大學(xué);2015年

8 郭小倩;慢性阻塞性肺疾病和支氣管哮喘患者血清肺表面活性蛋白—水平改變及臨床意義[D];山西醫(yī)科大學(xué);2015年

9 柯志成;支氣管哮喘健康管理初探[D];中國中醫(yī)科學(xué)院;2015年

10 諶曉莉;病證結(jié)合優(yōu)化方案對支氣管哮喘氣道炎癥的影響[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2014年

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本文編號：1054164