本文關(guān)鍵詞：全氟化碳對脂多糖致肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞鈉離子通道功能受損的保護(hù)作用

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【摘要】：目的：本研究旨在探討全氟化碳對脂多糖致肺泡II型上皮細(xì)胞鈉離子通道（ENaC）功能受損的保護(hù)作用。 方法：（1）應(yīng)用LPS（10μg/ml）干預(yù)A549細(xì)胞0-6h，采用qPCR檢測1L-1β、IL-6、TNF-α和ENaC-α的mRNA表達(dá)，采用western-blot檢測ENaC-α蛋白表達(dá)；建立肺損傷細(xì)胞模型；（2）實驗分為對照組、LPS組、PFC組和LPS/PFC組；（3）分組干預(yù)4h和6h后分別提取胞漿和胞膜蛋白，，行western-blot檢測ENaC-α蛋白的表達(dá)；（4）分組干預(yù)4h，應(yīng)用膜片鉗全細(xì)胞記錄模式檢測跨膜電流變化后，標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞外液中加入ENaC抑制劑阿米洛利（10-5M）后再次檢測，計算加入阿米洛利鈉前后跨膜電流的變化及在各組間的差異；（5）將A549細(xì)胞接種至snapwell小室，培養(yǎng)至完全融合形成單層上皮，按前述給予分組干預(yù)4h，應(yīng)用尤斯灌流室系統(tǒng)檢測跨上皮短路電流的變化后，單層上皮頂端側(cè)K-H溶液中加入阿米洛利后再次檢測，計算加入阿米洛利前后短路電流的變化及在各組的差異。 結(jié)果：（1）LPS增加A549細(xì)胞1L-1β、IL-6和TNF-α的mRNA表達(dá)，4h達(dá)到最高峰，6h呈下降趨勢，但仍高于對照組，LPS抑制ENaC的mRNA和蛋白表達(dá)，于4h達(dá)峰值，6h呈上升趨勢，但仍低于對照組；（2）干預(yù)后4h和6h，LPS抑制了胞膜ENaC-α蛋白的表達(dá)，PFC可改善LPS導(dǎo)致的胞膜ENaC-α蛋白表達(dá)下調(diào)；但無論4h還是6h,LPS和PFC對胞漿ENaC-α蛋白表達(dá)無明顯影響；（3）干預(yù)4h后，LPS可顯著抑制經(jīng)ENaC通道的鈉離子跨膜鈉離子電流，而PFC可改善LPS對跨膜鈉離子電流的抑制；（4）干預(yù)4h后，LPS可顯著抑制A549融合單層上皮的阿米洛利敏感Isc，而PFC可改善LPS對阿米洛利敏感Isc的抑制； 結(jié)論：LPS通過抑制肺泡II型上皮細(xì)胞ENaC總體蛋白表達(dá)和胞膜ENaC蛋白聚集，抑制了經(jīng)ENaC通道的鈉離子轉(zhuǎn)運，損害了肺泡液體清除能力；PFC可能通過對LPS抑制ENaC蛋白表達(dá)、胞膜ENaC蛋白聚集的保護(hù)作用，改善了肺泡II型上皮細(xì)胞經(jīng)ENaC通道的鈉離子轉(zhuǎn)運，對肺泡液體清除能力有保護(hù)作用。
【關(guān)鍵詞】：急性肺損傷 全氟化碳 肺泡液體清除 上皮鈉離子通道 脂多糖
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R563.8
【目錄】：

• 英文縮寫索引5-8
• 中文摘要8-10
• Abstract10-12
• 前言12-14
• 第一部分 肺損傷細(xì)胞模型的建立14-27
• 材料和方法14-23
• 結(jié)果23-25
• 討論25-27
• 第二部分 PFC 對 LPS 致肺泡 II 型上皮細(xì)胞膜鈉離子通道蛋白表達(dá)下調(diào)的保護(hù)作用27-35
• 材料和方法27-31
• 結(jié)果31-32
• 討論32-35
• 第三部分 PFC 對 LPS 致肺泡 II 型上皮細(xì)胞鈉離子跨膜轉(zhuǎn)運下調(diào)的保護(hù)作用35-43
• 材料和方法35-39
• 結(jié)果39-40
• 討論40-43
• 第四部分 PFC 對 LPS 致肺泡上皮鈉離子跨上皮轉(zhuǎn)運能力下調(diào)的保護(hù)作用43-54
• 材料和方法43-48
• 結(jié)果48-50
• 討論50-54
• 結(jié)論54-55
• 參考文獻(xiàn)55-62
• 文獻(xiàn)綜述 鈉離子通道在肺泡液體清除中的調(diào)節(jié)機(jī)制62-73
• 參考文獻(xiàn)68-73
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況73-74
• 致謝74-75

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本文編號：1013380