發(fā)布時(shí)間：2017-08-27 03:13

  本文關(guān)鍵詞：母體血漿中胎兒游離mRNA等位基因比率分析用于21三體綜合征無(wú)創(chuàng)性產(chǎn)前篩查的研究

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【摘要】：21三體綜合征是常見的染色體非整倍疾病之一,主要臨床表現(xiàn)為智力低下,多器官發(fā)育及功能異常,典型的面部特征等。其產(chǎn)前篩查及診斷作為產(chǎn)科醫(yī)務(wù)工作者的重點(diǎn)研究?jī)?nèi)容。目前染色體核型分析技術(shù)仍然是產(chǎn)前診斷21-三體綜合征胎兒的金標(biāo)準(zhǔn)[1],但需要采用有創(chuàng)傷性的方法獲取胎兒細(xì)胞,如羊水穿刺、臍血穿刺或者獲取絨毛組織,給孕婦及家屬帶來很多顧慮,不易被接受。近年來研究顯示[2-4],母體外周血中存在胎兒游離核酸,這為無(wú)創(chuàng)性篩查胎兒染色體非整倍體異常提供了新途徑。Poon等[5]研究發(fā)現(xiàn),孕婦外周血血漿中來源于胎盤的胎兒特異性表達(dá)的PLAC4基因所編碼的m RNA,為胎兒游離m RNA用于無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前篩查21三體綜合征提供了依據(jù)。MLPA-SNP技術(shù)是近年來產(chǎn)前篩查21三體綜合征的新技術(shù)[6],運(yùn)用母體外周血中胎兒特異的m RNA上的等位基因的多態(tài)性,對(duì)21三體綜合征進(jìn)行產(chǎn)前篩查。本研究通過DNA測(cè)序技術(shù)及PCR-RFLP技術(shù),分析河南地區(qū)漢族人群21號(hào)染色體上PLAC4和COL6A2基因的10個(gè)SNP位點(diǎn)的基因型,篩選適合本地區(qū)人群的高雜合率SNP位點(diǎn);檢測(cè)孕8-16周孕婦外周血中的胎兒特異基因PLAC4和COL6A2 m RNA的表達(dá)量,分析無(wú)創(chuàng)性產(chǎn)前篩查的適宜孕周;選取該地區(qū)5個(gè)高雜合率SNP位點(diǎn),采用RT-MLPA技術(shù)對(duì)40例標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)。目的本研究通過分析中國(guó)河南地區(qū)漢族人群中21號(hào)染色體上PLAC4和COL6A2基因的多個(gè)單核苷酸多態(tài)性的特點(diǎn),及胎兒游離m RNA在不同孕周的母體外周血中的表達(dá)水平。探討逆轉(zhuǎn)錄-多重連接探針擴(kuò)增技術(shù)用于該地區(qū)21三體綜合征胎兒的無(wú)創(chuàng)性產(chǎn)前篩查的價(jià)值。材料和方法1實(shí)驗(yàn)材料①第一部分:隨機(jī)選取2013年6月至12月在鄭州大學(xué)第三附屬醫(yī)院體檢門診體檢的患者500例,男女各250例,滿足條件:籍貫河南省,漢族,既往體健,簽署知情同意書后,留取其2m L外周靜脈血置于EDTA抗凝管作為標(biāo)本。②第二部分:隨機(jī)選取門診30例圍產(chǎn)保健的健康孕婦,簽署知情同意書后,分別在其懷孕8周、10周、12周、14周、16周,留取5m L外周靜脈血置于EDTA抗凝管作為標(biāo)本。③第三部分:選取我院羊水胎兒細(xì)胞染色體核型分析結(jié)果為21三體綜合征陽(yáng)性的孕婦20例為實(shí)驗(yàn)組,正常妊娠孕婦20例作為陰性對(duì)照組,告知并簽署知情同意書后,留取其5m L外周靜脈血置于EDTA抗凝管作為標(biāo)本。2實(shí)驗(yàn)方法①第一部分:運(yùn)用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性技術(shù)和DNA測(cè)序技術(shù),檢測(cè)500例河南地區(qū)漢族人群中胎兒特異性基因PLAC4和COL6A2基因上10個(gè)SNP位點(diǎn)的基因型,計(jì)算其等位基因的雜合率;②第二部分:運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù),測(cè)定30例孕婦在孕8周、10周、12周、14周、16周時(shí)的外周血中胎兒游離的PLAC4和COL6A2兩種m RNA在5個(gè)不同孕周期的表達(dá)水平;③第三部分:運(yùn)用逆轉(zhuǎn)錄-多重連接探針擴(kuò)增技術(shù)對(duì)羊水胎兒細(xì)胞染色體核型分析結(jié)果為21三體綜合征陽(yáng)性的孕婦20例及正常妊娠孕婦20例,進(jìn)行21三體綜合征胎兒的無(wú)創(chuàng)性產(chǎn)前篩查。結(jié)果1.第一部分500例河南地區(qū)漢族人群中胎兒特異性基因上10個(gè)SNP位點(diǎn)雜合率分別為1)PLAC4基因:rs59066201(61.6%)、rs8130833(39.2%)、rs4818219(34.8%)、rs9977003(21.6%)、rs7844(19.2%);2)COL6A2基因:rs7717(49.6%)、rs1044598(53.4%)、rs559(50.2%)、rs3088026(12.8%)、rs1042917(45.6%):3)rs59066201等位基因雜合率在NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)上未見報(bào)道;與NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)報(bào)道相比較,rs8130833、rs9977003、rs7844位點(diǎn)等位基因雜合率有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),其他位點(diǎn)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。2.第二部分30例孕婦在孕8周、10周、12周、14周、16周時(shí)的外周血中均能檢測(cè)到胎兒游離m RNA,表達(dá)量隨孕周的增加而增加1)PLAC4 m RNA在5個(gè)孕周的表達(dá)水平依次為:7.22±1.05、8.02±1.41、9.51±1.69、11.33±2.11、13.31±2.58;2)COL6A2 m RNA在5個(gè)孕周的表達(dá)水平依次為8.95±1.28、11.19±1.36、15.0±1.58、16.87±1.72、18.96±2.79。3.第三部分選取5個(gè)雜合率比較高的SNP位點(diǎn),采用RT-MLPA技術(shù)進(jìn)行21三體綜合征的產(chǎn)前篩查rs7717、rs559、rs1044598、rs59066201、rs1042917,在河南地區(qū)人群覆蓋率達(dá)到[[1-(1-49.6%)×(1-53.4%)×(1-50.2%)×(1-61.6%)×(1-45.6%)]=97.6%],對(duì)20例21三體綜合征胎兒孕婦及20例正常胎兒孕婦外周血標(biāo)本進(jìn)行21三體綜合征的無(wú)創(chuàng)性產(chǎn)前篩查,有效篩查率達(dá)到87.5%,篩查準(zhǔn)確率達(dá)到100%。結(jié)論1.本研究中的10個(gè)SNP位點(diǎn)中,rs7717、rs559、rs1044598、rs59066201、rs1042917位點(diǎn)的雜合率較高,人群覆蓋率達(dá)到97.6%,可用于河南地區(qū)漢族人群21三體綜合征的無(wú)創(chuàng)性產(chǎn)前篩查;2.胎兒特異性基因PLAC4和COL6A2 m RNA在孕婦外周血中均有表達(dá),當(dāng)胎兒特異性m RNA-SNP位點(diǎn)呈雜合狀態(tài)時(shí),運(yùn)用RT-MLPA技術(shù)可以在孕8-16周進(jìn)行無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前篩查。
【關(guān)鍵詞】：單核苷酸多態(tài)性 21三體綜合征 聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性技術(shù) DNA測(cè)序技術(shù) 實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù) 逆轉(zhuǎn)錄-多重連接探針擴(kuò)增技術(shù)
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R714.5
【目錄】：

• 摘要4-8
• abstract8-13
• 中英文縮略詞13-14
• 1 引言14-18
• 2 材料與方法18-32
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果32-35
• 4 討論35-39
• 5 結(jié)論39-40
• 附圖40-45
• 參考文獻(xiàn)45-49
• 綜述部分 21三體綜合征產(chǎn)前篩查的研究進(jìn)展49-67
• 參考文獻(xiàn)60-67
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷、在學(xué)校期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文和研究成果67-68
• 致謝68

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 張曉航;李銳;段靈敏;薛雅方;張雪梅;王琰;劉建君;郭燕麗;鐘華;姚宏;;中晚孕期超聲篩查唐氏綜合征的價(jià)值[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2012年02期

2 周曉滌;曾淑群;;吉州區(qū)新生兒出生缺陷產(chǎn)前篩查及產(chǎn)前診斷的研究[J];井岡山大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2010年06期

3 孫宏躍;徐廣立;張富青;;孕早中期唐氏綜合征產(chǎn)前聯(lián)合篩查結(jié)果分析[J];檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床;2013年05期

4 紀(jì)穎;鄭曉瑛;;出生缺陷疾病經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)的評(píng)價(jià)[J];人口與經(jīng)濟(jì);2006年05期

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

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2 謝臻蔚;唐氏綜合征血清學(xué)產(chǎn)前篩查方案優(yōu)化的研究[D];浙江大學(xué);2010年

3 張超;血片法中孕期唐氏綜合癥篩查的初步研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2010年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前5條

1 劉夕群;定量焦測(cè)序技術(shù)在臨床唐氏綜合征診斷中的應(yīng)用研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2009年

2 陳惠娟;孕中期唐氏綜合征篩查的孕周選擇與篩查效率[D];浙江大學(xué);2009年

3 賴華;南昌地區(qū)妊娠14～20周孕婦血清甲胎蛋白及游離絨毛膜促性腺激素的MOM值測(cè)定及臨床應(yīng)用[D];南昌大學(xué);2010年

4 劉薇;唐氏綜合征血清學(xué)產(chǎn)前篩查與ApoE和MTHFRC677T基因多態(tài)性相關(guān)性研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2013年

5 趙恒;山東地區(qū)罕見疾病流行病學(xué)現(xiàn)況調(diào)查研究及分析[D];濟(jì)南大學(xué);2014年

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本文編號(hào)：744097