本文關(guān)鍵詞：HSF1與XAF1對子宮內(nèi)膜癌的影響及作用機(jī)制的初步探究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：【背景】子宮內(nèi)膜癌(endometrial carcinoma,EC)作為一組子宮內(nèi)膜上皮性惡性腫瘤嚴(yán)重威脅女性健康,以起源于子宮內(nèi)膜腺體的腺癌最為多見。它是女性生殖系統(tǒng)最多見的惡性腫瘤之一,在我國其每年的發(fā)病率約占女性生殖系統(tǒng)癌癥的20%~30%,且每年有接近20萬的新發(fā)病例,發(fā)病率僅次于宮頸癌。但在一些西方發(fā)達(dá)國家有大樣本統(tǒng)計顯示其發(fā)病率遠(yuǎn)高于宮頸癌,在女性生殖系統(tǒng)癌癥排名首位。雖然目前EC的具體發(fā)病機(jī)理仍不完全明確,但隨著近年來明顯上升的發(fā)病率及死亡率,其早已成為當(dāng)前基礎(chǔ)科研及臨床研究的焦點(diǎn)。熱休克反應(yīng)是在熱應(yīng)激作用下發(fā)生的,以基因表達(dá)和調(diào)控變化為主要特性的一種防御應(yīng)激反應(yīng)。熱休克轉(zhuǎn)錄因子1(heat shock transcription factor 1,HSF1)為熱休克反應(yīng)的主要調(diào)控者。HSF1可通過直接或間接介導(dǎo)體內(nèi)許多細(xì)胞活性因子的生物活動,參與調(diào)控細(xì)胞的多種生理機(jī)能。它的存在使機(jī)體在適應(yīng)不利環(huán)境盡可能延長生存期的同時還參與細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化,因此,對腫瘤的發(fā)生和發(fā)展具有一定推動作用。X-染色體連鎖凋亡抑制因子1(XIAP associated factor 1,XAF1)是一種可以拮抗X-染色體連鎖凋亡抑制蛋白(X-chromosome-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP)的重要的負(fù)性調(diào)節(jié)因子,可直接與XIAP結(jié)合而迅速阻斷其抑制凋亡的作用,從而逆轉(zhuǎn)XIAP對細(xì)胞包括腫瘤細(xì)胞的保護(hù)作用。鑒于XAF1結(jié)構(gòu)和功能上的眾多特質(zhì),它已成為降低腫瘤細(xì)胞耐藥性,提高腫瘤細(xì)胞對化療藥物、細(xì)胞因子治療和放射線治療敏感性的重要突破點(diǎn)。細(xì)胞凋亡的阻滯與惡性腫瘤的發(fā)生及細(xì)胞耐藥性的產(chǎn)生關(guān)系密切,許多化療藥物都是通過誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡而達(dá)到清除腫瘤的目的。因此當(dāng)XAF1呈高水平表達(dá)時即可導(dǎo)致大量腫瘤細(xì)胞的凋亡,顯著增強(qiáng)化療藥物的作用并有效抑制腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)化和體內(nèi)腫瘤的形成。那么在子宮內(nèi)膜癌中HSF1與XAF1表達(dá)情況如何?這兩者之間具有怎樣的相關(guān)性?這兩者是否對腫瘤細(xì)胞的增殖及凋亡具有影響作用?帶著這些疑問,我們設(shè)計了本實驗,實驗中我們驗證了HSF1與XAF1在子宮內(nèi)膜癌組織及細(xì)胞中的表達(dá)情況,發(fā)現(xiàn)了這兩者之間的相互關(guān)系,并于慢病毒感染后的子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株中觀察細(xì)胞的增殖、細(xì)胞周期及凋亡等的變化情況,探討此兩種分子在子宮內(nèi)膜癌發(fā)生發(fā)展中的作用并對其作用機(jī)制進(jìn)行初步探究,以期為子宮內(nèi)膜癌的及時診斷、治療及預(yù)后評估提供參考�！灸康摹�1.研究并探討HSF1與XAF1在子宮內(nèi)膜癌組織及細(xì)胞中的表達(dá)及相互作用情況。2.研究并探討HSF1與XAF1對子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞增殖,細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡的影響及作用�！痉椒ā�1.應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色法(SP法)檢測正常子宮內(nèi)膜組織及子宮內(nèi)膜癌組織中HSF1與XAF1的表達(dá)情況以及在子宮內(nèi)膜癌不同分化水平狀態(tài)下HSF1與XAF1的表達(dá)情況。運(yùn)用統(tǒng)計學(xué)方法分析上述組織中HSF1、XAF1的表達(dá)與EC臨床病理特征的關(guān)系并對兩者的相關(guān)性進(jìn)行分析。并通過對EC組織與正常子宮內(nèi)膜組織的western blot及q PCR實驗進(jìn)行HSF1與XAF1基因蛋白水平及m RNA水平的檢測。2.通過免疫印跡實驗對子宮內(nèi)膜癌研究中常用的三株細(xì)胞(Ish-ikawa、HEC-1A、RL95-2)進(jìn)行HSF1與XAF1基因表達(dá)水平的檢測,選取表達(dá)量相對穩(wěn)定的子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞RL95-2作為慢病毒感染模型,并成功構(gòu)建了穩(wěn)定干涉HSF1基因的細(xì)胞株和穩(wěn)定過表達(dá)XAF1基因的細(xì)胞株。3.通過western blot及實時定量PCR實驗檢測HSF1干涉實驗組Lv-sh-HSF1-RL95-2細(xì)胞中XAF1表達(dá)變化;同時檢測XAF1過表達(dá)實驗組Lv-XAF1-RL95-2細(xì)胞中HSF1表達(dá)變化。4.通過MTT比色實驗,流式細(xì)胞儀檢測及細(xì)胞凋亡水平檢測來測試HSF1被干涉與XAF1基因被過表達(dá)后子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞RL95-2在增殖能力,細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡中所出現(xiàn)的變化。實驗分為兩個部分,第一部分為HSF1基因干涉組,具體分組如下:實驗組Lv-sh-HSF1-RL95-2;組內(nèi)對照Lv-scramble-RL95-2;空白對照組control。第二部分為XAF1基因過表達(dá)組,具體分組如下:實驗組Lv-XAF1-RL95-2;組內(nèi)對照Lv-cherry-RL95-2;空白對照組control�！窘Y(jié)果】1.子宮內(nèi)膜癌組織與正常子宮內(nèi)膜組織免疫組化染色結(jié)果顯示:與對照組(正常子宮內(nèi)膜組織)相比較,HSF1基因在癌組織中的表達(dá)水平明顯高于正常子宮內(nèi)膜組織;HSF1在子宮內(nèi)膜癌組織中高表達(dá),其陽性表達(dá)率與組織學(xué)分級相關(guān)(P0.001)、肌層浸潤及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P0.05),與手術(shù)病理分期不相關(guān);XAF1在子宮內(nèi)膜癌組織中低表達(dá),其陽性表達(dá)率與組織學(xué)分級、肌層浸潤、手術(shù)病理分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P0.05)。在初步驗證了兩者在癌與非癌組織中的表達(dá)后,我們又在不同分化程度的癌組織中也進(jìn)行了相關(guān)實驗,免疫組化染色實驗結(jié)果顯示:隨著癌組織分化水平的降低,HSF1基因的表達(dá)呈現(xiàn)逐漸增高趨勢,而XAF1基因的表達(dá)則呈現(xiàn)降低趨勢,以此結(jié)果我們設(shè)想它們很可能在子宮內(nèi)膜癌發(fā)生發(fā)展過程中分別參與并起到了一定的作用,為了能夠進(jìn)一步的探尋其在癌癥發(fā)生發(fā)展中的作用,我們通過收集的完整病例資料進(jìn)行了相關(guān)性統(tǒng)計學(xué)分析,統(tǒng)計學(xué)分析結(jié)果顯示兩者之間呈現(xiàn)出負(fù)相關(guān)關(guān)系(r=-0.582,P0.001)。2.體外環(huán)境中,HSF1及XAF1在子宮內(nèi)膜癌三株細(xì)胞中的表達(dá)水平通過western blot實驗結(jié)果顯示:在這三株細(xì)胞中,Ish-ikawa中HSF1表達(dá)水平最高,RL95-2次之,HEC-1A最低,而XAF1在Ish-ikawa中表達(dá)水平最低,RL95-2次之,HEC-1A最高,因此我們選取了RL95-2細(xì)胞作為慢病毒感染的對象,以保證實驗結(jié)果的穩(wěn)定和真實性,在實驗條件下得到最準(zhǔn)確的結(jié)果。3.HSF1干涉實驗組Lv-sh-HSF1-RL95-2細(xì)胞中XAF1表達(dá)較對照組明顯增高;同時XAF1過表達(dá)實驗組Lv-XAF1-RL95-2細(xì)胞中HSF1表達(dá)較對照組無明顯變化。4.基于前期HSF1及XAF1負(fù)相關(guān)實驗結(jié)果以及成功構(gòu)建的穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系為基礎(chǔ),課題組通過MTT比色實驗繪制細(xì)胞生長曲線,在HSF1基因干涉組中實驗組Lv-sh-HSF1-RL95-2組細(xì)胞的增殖能力明顯降低,而對照組Lv-scramble-RL95-2,control細(xì)胞的增殖能力顯著高于實驗組(P0.05)。在XAF1基因過表達(dá)組中穩(wěn)定過表達(dá)XAF1的Lv-XAF1-RL95-2組細(xì)胞增殖能力也相比較其他對照組顯著降低(P0.05)。5.細(xì)胞周期檢測實驗結(jié)果顯示:實驗分組同上,在HSF1基因干涉組中實驗組與兩個對照組(Lv-scramble-RL95-2,control)相比較,實驗組(Lv-sh-HSF1-RL95-2)出現(xiàn)了明顯的G1期阻滯,進(jìn)入S期的細(xì)胞數(shù)量減少,干涉HSF1基因后子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞RL95-2出現(xiàn)了細(xì)胞周期阻滯。在XAF1基因過表達(dá)組中穩(wěn)定過表達(dá)XAF1的Lv-XAF1-RL95-2組細(xì)胞與Lv-cherry-RL95-2組和control組相比較,實驗組Lv-XAF1-RL95-2出現(xiàn)了明顯的G1期阻滯,進(jìn)入S期的細(xì)胞數(shù)量減少,穩(wěn)定過表達(dá)XAF1基因可以導(dǎo)致子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞RL95-2也同樣出現(xiàn)細(xì)胞周期阻滯。6.細(xì)胞凋亡檢測實驗結(jié)果顯示:在XAF1基因過表達(dá)組中穩(wěn)定過表達(dá)XAF1的Lv-XAF1-RL95-2組與Lv-cherry-RL95-2組和control組相比較,實驗組Lv-XAF1-RL95-2出現(xiàn)了明顯的早期凋亡趨勢(P0.001),這說明穩(wěn)定過表達(dá)XAF1基因可以導(dǎo)致子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞RL95-2在早期就出現(xiàn)大量凋亡。在HSF1基因干涉組中,實驗組與兩個對照組(Lv-scramble-RL95-2,control)相比較,實驗組(Lv-sh-HSF1-RL95-2)出現(xiàn)了與過表達(dá)組相一致的結(jié)果(P0.001),實驗組細(xì)胞早期凋亡明顯增加,實驗說明干涉HSF1基因后子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞RL95-2出現(xiàn)了細(xì)胞早期凋亡率的增加�！窘Y(jié)論】HSF1及XAF1基因參與了多種人類相關(guān)疾病的進(jìn)展過程,其中就包括腫瘤。在多種腫瘤中都有其對細(xì)胞增殖,周期和凋亡中發(fā)揮作用的研究。目前,這兩者在子宮內(nèi)膜癌中的相互關(guān)聯(lián)以及這種關(guān)聯(lián)在疾病發(fā)生發(fā)展過程中的作用還尚未有明確報道。本課題組通過對兩者的表達(dá)以及表達(dá)所存在的關(guān)聯(lián)進(jìn)行了分析,并通過體外實驗驗證了兩者在子宮內(nèi)膜癌發(fā)生發(fā)展中的作用及其發(fā)生的機(jī)制,所有結(jié)果都提示在子宮內(nèi)膜癌中針對HSF1及XAF1基因為靶點(diǎn)的研究很可能為疾病的基因治療提供新的靶點(diǎn),同時為突破目前子宮內(nèi)膜癌治療的瓶頸提供新的方向。
【關(guān)鍵詞】：子宮內(nèi)膜癌 HSF1 XAF1 細(xì)胞凋亡
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.33
【目錄】：

• 縮略語表4-6
• 中文摘要6-11
• 英文摘要11-17
• 前言17-19
• 文獻(xiàn)回顧19-42
• 第一部分 子宮內(nèi)膜癌組織中HSF1和XAF1的表達(dá)及相關(guān)性分析42-60
• 引言42
• 1.材料42-45
• 2.方法45-52
• 3.結(jié)果52-57
• 4.討論57-60
• 第二部分 探尋HSF1和XAF1在子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞中的作用機(jī)制60-79
• 引言60-61
• 1.材料61-63
• 2.方法63-68
• 3.結(jié)果68-76
• 4.討論76-79
• 小結(jié)79-81
• 參考文獻(xiàn)81-90
• 個人簡歷和研究成果90-92
• 致謝92-93

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  本文關(guān)鍵詞：HSF1與XAF1對子宮內(nèi)膜癌的影響及作用機(jī)制的初步探究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：424477