本文關鍵詞：DJ-1對卵巢癌SKOV3細胞增殖、凋亡和侵襲的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:本研究利用RNA干擾技術(RNA interference,RNAi)抑制卵巢癌SKOV3細胞DJ-1的表達,探討DJ-1對卵巢癌SKOV3細胞增殖、凋亡和侵襲等生物學特性的影響。方法:1.設計并合成3對針對DJ-1的小干擾RNA(small interfering RNA,siRNA),采用陽離子脂質(zhì)體法瞬間轉(zhuǎn)染SKOV3細胞。實驗分組:①正常對照組;②陰性對照組;③siRNA-DJ-1-a組;④siRNA-DJ-1-b組;⑤siRNA-DJ-1-c組。2.通過蛋白印跡法(Western Blot)檢測各組細胞中DJ-1蛋白的表達,篩選出干擾效果最佳的序列。3.分別采用MTT比色法、流式細胞術和Transwell侵襲實驗檢測DJ-1對SKOV3細胞增殖、凋亡和侵襲的影響。結果:1.Western blot檢測siRNA對DJ-1蛋白表達的影響,結果顯示:轉(zhuǎn)染后48h,正常對照組與陰性對照組相比,DJ-1蛋白表達差異無統(tǒng)計學意義(0.51±0.02 vs0.50±0.02,P0.05)。而siRNA-DJ-1-a組、siRNA-DJ-1-b組、siRNA-DJ-1-c組均顯著低于其它對照組,差異有統(tǒng)計學意義(0.07±0.01、0.11±0.02、0.10±0.01 vs0.51±0.02、0.50±0.02,P0.05),其中siRNA-DJ-1-a組較其它兩組抑制效果更明顯,差異有統(tǒng)計學意義(0.07±0.01 vs 0.11±0.02,0.07±0.01 vs 0.10±0.01,P0.05)。2.MTT比色法檢測si RNA-DJ-1-a對SKOV3細胞增殖的影響,結果顯示:si RNA-DJ-1轉(zhuǎn)染后12h,正常對照組、陰性對照組、siRNA-DJ-1-a組細胞增殖率差異無統(tǒng)計學意義(P0.05),而siRNA-DJ-1轉(zhuǎn)染后24h、48h和72h,si RNA-DJ-1-a組細胞增殖率明顯低于正常對照組(24h,0.379±0.044 vs0.492±0.035;48h,0.486±0.059 vs 1.127±0.078;72h,0.738±0.046 vs 1.373±0.055)和陰性對照組(24h,0.379±0.044 vs 0.460±0.057;48h,0.486±0.059 vs 1.043±0.080;72h,0.738±0.046 vs 1.350±0.067),差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。3.流式細胞術檢測siRNA-DJ-1-a對SKOV3細胞凋亡的影響,結果顯示:si RNA-DJ-1轉(zhuǎn)染后24h,正常對照組與陰性對照組的早期凋亡率相比,差異無統(tǒng)計學意義(1.77±0.71%vs 2.83±0.55%,P0.05),而siRNA-DJ-1-a組的早期凋亡率明顯高于正常對照組(27.97±9.86%vs 1.77±0.71%)和陰性對照組(27.97±9.86%vs 2.83±0.55%),差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。4.Transwell侵襲實驗檢測siRNA-DJ-1-a對SKOV3細胞侵襲的影響,結果顯示:siRNA-DJ-1轉(zhuǎn)染后48h,正常對照組與陰性對照組穿膜細胞數(shù)相比,差異無統(tǒng)計學意義(60.83±2.04 vs 58.83±1.47,P0.05),siRNA-DJ-1-a組的穿膜細胞數(shù)明顯少于正常對照組(27.67±1.86 vs 60.83±2.04)和陰性對照組(27.67±1.86vs 58.83±1.47),差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結論:si RNA下調(diào)DJ-1基因表達可抑制卵巢癌SKOV3細胞增殖和侵襲,促進細胞凋亡。
【關鍵詞】：卵巢癌 DJ-1 增殖 凋亡 侵襲
【學位授予單位】：南昌大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R737.31
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 中英文縮略詞表9-10
• 第1章 引言10-13
• 第2章 實驗材料13-17
• 2.1 實驗細胞13
• 2.2 主要試劑13
• 2.3 主要儀器設備13-14
• 2.4 主要試劑配制14-17
• 第3章 實驗方法17-25
• 3.1 卵巢癌SKOV3細胞培養(yǎng)17-18
• 3.1.1 細胞傳代17
• 3.1.2 細胞凍存17-18
• 3.1.3 細胞復蘇18
• 3.2 si RNA-DJ-1 的設計與合成18-19
• 3.3 實驗分組19
• 3.4 細胞轉(zhuǎn)染19-20
• 3.5 Western blot檢測轉(zhuǎn)染siRNA后對DJ-1 蛋白表達的影響20-22
• 3.5.1 細胞總蛋白提取20
• 3.5.2 SDS-PAGE電泳20-21
• 3.5.3 轉(zhuǎn)膜21
• 3.5.4 封閉21-22
• 3.5.5 免疫反應22
• 3.5.6 化學發(fā)光、曝光22
• 3.5.7 凝膠圖像分析22
• 3.6 MTT檢測DJ-1 對SKOV3細胞增殖的影響22-23
• 3.7 流式細胞術檢測DJ-1 對SKOV3細胞凋亡的影響23
• 3.8 Transwell實驗檢測DJ-1 對SKOV3細胞侵襲能力的影響23-24
• 3.9 統(tǒng)計學分析24-25
• 第4章 實驗結果25-30
• 4.1 FAM熒光檢測siRNA對SKOV3細胞的轉(zhuǎn)染效率25
• 4.2 Western blot檢測siRNA對DJ-1 蛋白表達的影響25-26
• 4.3 MTT檢測siRNA-DJ-1 對SKOV3細胞生長的影響26-27
• 4.4 流式細胞術檢測si RNA-DJ-1 對SKOV3細胞凋亡的影響27-28
• 4.5 Transwel檢測siRNA-DJ-1 對SKOV3細胞侵襲能力的影響28-30
• 第5章 討論30-34
• 第6章 結論與展望34-35
• 6.1 結論34
• 6.2 展望34-35
• 致謝35-36
• 參考文獻36-39
• 攻讀學位期間的研究成果39-40
• 綜述40-45
• 參考文獻44-45

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