目的:通過對靶基因TMEM45A進(jìn)行敲降,觀察其對卵巢癌細(xì)胞系細(xì)胞增殖、粘附、侵襲等生物學(xué)行為的影響;通過對TMEM45A基因進(jìn)行富集分析,尋找與TMEM45A相關(guān)信號通路。本研究旨在闡明TMEM45A對卵巢癌細(xì)胞系細(xì)胞增殖、侵襲能力的調(diào)節(jié)作用,并進(jìn)一步探索其可能的信號途徑。方法:通過分析TCGA數(shù)據(jù)庫卵巢癌組RNA測序數(shù)據(jù)和25對卵巢癌及其配對非癌組織樣本的實時PCR數(shù)據(jù),我們比較了卵巢癌組織和正常組織中TMEM45A的表達(dá),并通過在兩種卵巢癌細(xì)胞系HO-8910和A2780中進(jìn)行RNA干擾,抑制TMEM45A的表達(dá);同時使用CCK-8(ell Counting Kit-8 assay)、PI染色(propidium iodide staining)、細(xì)胞黏附和Tramswell實驗檢測細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期分布、黏附和侵襲能力。采用GSEA軟件對該基因進(jìn)行富集分析發(fā)現(xiàn)TGF-β信號傳導(dǎo)途徑和粘著斑途徑與TMEM45A的高表達(dá)具有顯著相關(guān)性,選擇上述可能相關(guān)信號通路中的關(guān)鍵基因:轉(zhuǎn)化生長因子-β(TGF-β1和TGF-β2),Ras同源家族成員A(RhoA)和Rho相關(guān)激酶2(ROCK2)...

【文章頁數(shù)】：48 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1：卵巢癌組織RNA測序結(jié)果

之間有顯著差異(P<0.001)（見圖2）。根據(jù)以上結(jié)果，我們考慮TMEM45A基因可能在卵巢癌組織中具有重要作用我們設(shè)計了后續(xù)實驗，通過siRNA干擾卵巢癌細(xì)胞中的TMEM45A基因，觀察卵巢胞的增殖、侵襲、細(xì)胞分布等變化情況。

圖2：TMEM45AmRNA在卵巢癌組織中的表達(dá)情況

之間有顯著差異(P<0.001)（見圖2）。根據(jù)以上結(jié)果，我們考慮TMEM45A基因可能在卵巢癌組織中具有重要作用我們設(shè)計了后續(xù)實驗，通過siRNA干擾卵巢癌細(xì)胞中的TMEM45A基因，觀察卵巢胞的增殖、侵襲、細(xì)胞分布等變化情況。

圖3：敲降TMEM45A影響HO-8910、A2780細(xì)胞系細(xì)胞增殖情況

表達(dá)水平明顯下降，其中TMEM45A-Ri-3的干擾效果最好，因此我實驗研究（見圖3）。

圖4CCK-8檢測TMEM45A-Ri-3基因敲降影響卵巢癌細(xì)胞增殖情況A：TMEM45A-Ri-3影響A2780細(xì)胞系TMEM45A增殖情況；B：TMEM45A-Ri-3影響HO-8910細(xì)胞系TMEM45A增殖情況

圖4CCK-8檢測TMEM45A-Ri-3基因敲降影響卵巢癌細(xì)胞增殖情況A：TMEM45A-Ri-3影響A2780細(xì)胞系TMEB：TMEM45A-Ri-3影響HO-8910細(xì)胞系TMEM45A增殖情況

本文編號：4038786