本文關(guān)鍵詞：EGCG通過調(diào)節(jié)mTOR途徑下游S6K1和4E-BP1因子抑制宮頸癌HeLa細胞分生，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：mTOR (mammalian target of rapamycin雷帕霉素靶蛋白)是一種絲／蘇氨酸蛋白激酶,在細胞生長、增殖、分化、細胞周期調(diào)控等多個方面起到了重要作用。其信號通路參與調(diào)節(jié)與腫瘤密切相關(guān)的多項細胞功能,是近年來腫瘤研究的熱點,其中E-BP1(eukaryotic translation initiation factor4E binding protein1真核細胞翻譯起始因子4E結(jié)合蛋白1)和S6K1(Ribosomal protein S6kinase beta-1核糖體S6蛋白激酶1)是研究的熱點,也是mTOR最具特色的底物。EGCG(表沒食子兒茶素沒食子酸酯,Epigallo catechin-3-gallate)是茶葉中的主要活性成分,它作為茶樹自身的天然產(chǎn)物,具有抗氧化,清除自由基等功能,對人體健康和長壽具有重要意義。 本研究旨在探討EGCG體外抑制宮頸癌HeLa細胞分生及其機制,深刻揭示喝茶的保健機理,為EGCG作為保健藥品的開發(fā)和利用奠定理論基礎(chǔ)。實驗在形態(tài)觀察的基礎(chǔ)上,采用CellTiter-Blue法檢測EGCG (0μM、10μM、25μM、50μM和100μM)處理HeLa細胞之后,HeLa細胞的生長曲線；流式細胞術(shù)檢測EGCG處理對HeLa細胞周期的影響,觀察EGCG對HeLa細胞分生的抑制作用；采用Western-blotting法檢測了mTOR下游底物S6K1和4E-BP1蛋白的表達水平。 實驗結(jié)果顯示,在低營養(yǎng)(0.5%牛血清)培養(yǎng)下,EGCG對HeLa細胞分生具有抑制作用,并呈濃度依賴效應(yīng),隨著EGCG濃度的增加HeLa細胞周期被阻滯于S期和G2/M,4E-BP1蛋白水平隨著EGCG的濃度增加而顯著下降(25μM和50μM的EGCG處理：p0.05,100μM EGCG處理：p0.01,極其顯著)。而在高營養(yǎng)(10%牛血清)培養(yǎng)下,EGCG處理前后,HeLa細胞的分生與對照組相比其100μM下的HeLa細胞分生曲線呈略微下降趨勢,其他濃度并未呈現(xiàn)明顯效果。在細胞周期方面,高濃度EGCG(50μM和100μM)處理組的HeLa細胞被一定程度阻滯于S期和G2/M。100μM的EGCG處理對S6K1蛋白水平的表達抑制具有顯著作用,而EGCG處理對HeLa細胞4E-BP1蛋白水平表達并沒有顯著作用。 因此,EGCG處理對HeLa細胞分生抑制具有一定作用,尤其是在低營養(yǎng)狀態(tài)下,其對HeLa細胞的分生抑制作用隨著濃度增加而增加。同時,低營養(yǎng)培養(yǎng)下,EGCG對mTOR底物4E-BP1蛋白的磷酸化水平隨著處理濃度的增加而顯著減少,有理由推斷：4E-BP1可能是EGCG通過mTOR途徑抑制HeLa細胞分生的靶點。同時,我們認為,用EGCG保健的同時,如果能控制營養(yǎng)能量水平,其保健效果可能會更好,更加深入、全面的研究值得繼續(xù)進行。
【關(guān)鍵詞】：EGCG HeLa細胞分生抑制 mTOR途徑 S6K1 4E-BP1
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.33
【目錄】：

• 致謝6-8
• 摘要8-10
• ABSTRACT10-12
• 圖表索引12-13
• 縮寫、符號與術(shù)語表13-14
• 目次14-16
• 第一章 文獻綜述16-32
• 1 mTOR研究進展16-27
• 1.1 mTOR的結(jié)構(gòu)17-19
• 1.2 mTOR經(jīng)典信號途徑19-25
• 1.2.1 mTORC1的位置和信號通路20-25
• 1.2.2 mTORC2的位置和信號通路25
• 1.3 mTOR功能25-27
• 1.3.1 mTOR延緩衰老作用25-26
• 1.3.2 mTOR調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄、細胞生長和增值26-27
• 2 EGCG在抗癌領(lǐng)域的研究27-30
• 3 研究目的和內(nèi)容30-31
• 4 創(chuàng)新意義31-32
• 第二章 材料與方法32-40
• 1 材料32-34
• 1.1 細胞系32
• 1.2 試劑與配制32-33
• 1.3 主要儀器設(shè)備33-34
• 2 方法34-40
• 2.1 細胞培養(yǎng)34
• 2.2 藥物處理34
• 2.3 形態(tài)學(xué)觀察34
• 2.4 CellTiter-Blue細胞活性檢測34-35
• 2.5 EGCG對HeLa細胞分生的影響35
• 2.6 流式細胞儀細胞周期檢測35-36
• 2.7 細胞總蛋白提取36-37
• 2.8 蛋白定量37
• 2.9 Western-blotting檢測蛋白表達37-39
• 2.10 統(tǒng)計學(xué)處理39-40
• 第三章 實驗結(jié)果與分析40-48
• 3.1 EGCG對HeLa細胞形態(tài)影響40-41
• 3.2 EGCG對HeLa細胞分生曲線的影響41-45
• 3.3 EGCG對HeLa細胞周期的影響45
• 3.4 EGCG對mTOR底物S6K1和4E-BP1蛋白表達的影響45-48
• 第四章 總結(jié)與討論48-51
• 參考文獻51-58

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