本文關(guān)鍵詞：PCL-PEI納米粒子介導(dǎo)的CXCL10基因治療對(duì)放療殺傷宮頸癌細(xì)胞作用影響的體外研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:宮頸癌(Cervical cancer)是一種起源于宮頸的惡性腫瘤。它是一種常見(jiàn)的惡性腫瘤,是世界上主要的惡性腫瘤之一。本實(shí)驗(yàn)的研究目的在于初步探討PCL-PEI(Polycaprolactone-Polyethylenimine,聚己內(nèi)酯-聚乙烯亞胺,PEA)介導(dǎo)的趨化因子CXCL10(Chemokine CXCL10)基因治療對(duì)放療殺傷宮頸癌細(xì)胞作用的影響。方法:利用PEI(1.8k Da)和PCL通過(guò)邁克爾加成反應(yīng)成功地合成了聚合物PCL-PEI,并用1H-核磁共振對(duì)聚合物的結(jié)構(gòu)進(jìn)行了分析。使用激光粒度分析儀檢測(cè)PCL-PEI納米粒子的Zeta電位及粒徑。使用透射電鏡觀察PCL-PEI納米粒子以及PCL-PEI與CXCL10質(zhì)�？s合后的納米復(fù)合物的形貌。通過(guò)MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)PCL-PEI納米粒子的細(xì)胞毒性。在證實(shí)成功地合成了聚合物后,使用PCL-PEI納米粒子與綠色熒光蛋白質(zhì)粒(p EGFP)制備了PCL-PEI+p EGFP納米復(fù)合物,通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)得到納米粒子與質(zhì)�？s合的最優(yōu)質(zhì)量比。接下來(lái),按照最優(yōu)質(zhì)量比制備PCL-PEI+p EGFP納米復(fù)合物,通過(guò)倒置熒光顯微鏡觀察該復(fù)合物轉(zhuǎn)染Hela細(xì)胞后綠色熒光蛋白質(zhì)表達(dá)情況。隨后使用PCL-PEI+p CXCL10納米復(fù)合物轉(zhuǎn)染Hela細(xì)胞,通過(guò)PCR實(shí)驗(yàn)擴(kuò)增CXCL10目標(biāo)基因片段,瓊脂電泳實(shí)驗(yàn)證實(shí)轉(zhuǎn)染成功。最后,實(shí)驗(yàn)將Hela細(xì)胞分成四組進(jìn)行處理,分別為空白對(duì)照+放療組,PCL-PEI+放療組,PCL-PEI+p PUC4.1(空質(zhì)粒)+放療組,PCL-PEI+p CXCL10+放療組,待細(xì)胞轉(zhuǎn)染24小時(shí)后行6Gy放療,放療48h后利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況,放療4小時(shí)內(nèi)行克隆形成實(shí)驗(yàn)測(cè)定各組的克隆形成能力。結(jié)果:成功地合成了可降解聚合物PCL-PEI,其能在PBS溶液中形成納米粒子,1H-核磁共振對(duì)聚合物的結(jié)構(gòu)進(jìn)行了分析,利用透射電鏡對(duì)聚合物進(jìn)行了形貌分析,證實(shí)其結(jié)構(gòu)與目標(biāo)產(chǎn)物結(jié)構(gòu)一致。激光粒度分析儀測(cè)得PCL-PEI的Zeta電位及粒徑分別為:+15m V,213nm。瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)測(cè)得PCL-PEI納米粒子縮合質(zhì)粒DNA的最優(yōu)質(zhì)量比為1:1。MTT實(shí)驗(yàn)表明,聚合物的毒性較小,在工作濃度時(shí)幾乎沒(méi)有表現(xiàn)出細(xì)胞毒性。倒置熒光顯微鏡觀察到經(jīng)PCL-PEI+p EGFP納米復(fù)合物轉(zhuǎn)染的Hela細(xì)胞成功地表達(dá)了綠色熒光蛋白。PCR-瓊脂凝膠電泳實(shí)驗(yàn)證實(shí)了PCL-PEI+p CXCL10納米復(fù)合物成功地轉(zhuǎn)染了Hela細(xì)胞。最后,流式細(xì)胞學(xué)證實(shí)PCL-PEI+p CXCL10+放療組的凋亡率明顯提高,克隆形成實(shí)驗(yàn)證實(shí)該組的克隆形成能力更弱。結(jié)論:1.成功地合成了聚合物PCL-PEI,其細(xì)胞毒性較低,細(xì)胞毒性與濃度呈正相關(guān),而在工作濃度時(shí)幾乎沒(méi)有表現(xiàn)出細(xì)胞毒性,是一種安全低毒的基因載體。2.PCL-PEI聚合物能在PBS中形成納米粒子,納米粒子表面帶正電荷,粒徑分布均勻。3.PCL-PEI納米粒子能縮合質(zhì)粒DNA,并能轉(zhuǎn)染細(xì)胞,在細(xì)胞中表達(dá)。4.初步證實(shí)成功表達(dá)了CXCL10的Hela細(xì)胞凋亡率更高,克隆形成能力更弱,表明PCL-PEI納米粒子介導(dǎo)CXCL10基因治療可提高放療對(duì)Hela細(xì)胞的殺傷作用。
【關(guān)鍵詞】：宮頸癌 Hela細(xì)胞 CXC趨化因子配體10 CXCL10 IP10 聚乙烯亞胺-聚己內(nèi)酯 PCL-PEI 基因治療 放射治療
【學(xué)位授予單位】：西南醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.33
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• 英文摘要5-8
• 前言8-12
• 材料與方法12-23
• 結(jié)果23-32
• 討論32-37
• 結(jié)論37-38
• 參考文獻(xiàn)38-49
• 英漢縮略詞對(duì)照表49-50
• 致謝50-51
• 趨化因子CXCL10 在惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展中的研究進(jìn)展(綜述)51-63
• 參考文獻(xiàn)58-63

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本文編號(hào)：386133