發(fā)布時(shí)間：2017-05-15 18:02

  本文關(guān)鍵詞：小腸黏膜下基質(zhì)復(fù)合脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞重建陰道的可行性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:研究脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞在小腸黏膜下基質(zhì)重建陰道過程中的作用,為組織工程學(xué)陰道重建探討新的思路。方法:采用Ⅰ型膠原酶消化法分離提取SD大鼠脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞(adipose-derived stem cells,ASCs),流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)第3代ASCs細(xì)胞表面CD90、CD45、CD29、CD34、CD44、CD105抗原的表達(dá)情況,對(duì)第3代ASCs進(jìn)行成骨、成脂誘導(dǎo)培養(yǎng),茜素紅及油紅O染色鑒定誘導(dǎo)分化情況。將第3代ASCs按照2×105/cm2、4×105/cm2的細(xì)胞密度與SIS復(fù)合培養(yǎng),于復(fù)合后24h、3d、5d及7d行MTT法檢測(cè)細(xì)胞存活率。CM.dil標(biāo)記第2代ASCs,熒光顯微鏡下觀察。將標(biāo)記后第3代ASCs按照細(xì)胞計(jì)數(shù)1.5×106個(gè)與2×2cm2的SIS支架復(fù)合培養(yǎng),5天后移植。選取200-250g雌性SD大鼠,手術(shù)切除正常陰道后分別將單純SIS支架或復(fù)合有CM.dil標(biāo)記ASCs的SIS支架植入陰道殘腔內(nèi),上端與宮頸口縫合固定,下端與切口周圍皮膚吻合。術(shù)后7d、14d、28d切取“人工陰道”組織,復(fù)合支架組行冰凍切片,熒光顯微鏡下檢測(cè)標(biāo)記有CM.dil的ASCs殘留情況,單純支架組及復(fù)合支架組“人工陰道”均進(jìn)行HE、Masson染色,對(duì)比兩組“人工陰道”組織結(jié)構(gòu)學(xué)特點(diǎn),進(jìn)而比較陰道重建效果。結(jié)果:采用酶消化法提取的ASCs形態(tài)為長(zhǎng)梭形,融合度達(dá)80%后呈螺旋狀排列。流式檢測(cè):第3代ASCs細(xì)胞表面抗原CD44、CD90、CD29、CD105、CD34及CD45的表達(dá)率分別為97.48%、99.91%、99.99%、100%、58.05%和0.79%。茜素紅及油紅O染色均為陽性。MTT法檢測(cè)ASCs與SIS復(fù)合培養(yǎng)5d細(xì)胞存活率最高。熒光顯微鏡下觀察CM.dil標(biāo)記的ASCs細(xì)胞膜呈橙紅色,細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞核則表達(dá)為類圓形暗區(qū),標(biāo)記率可達(dá)100%。移植后的單純SIS支架組及復(fù)合有ASCs的SIS支架組均可形成新生管狀陰道,復(fù)合支架組冰凍切片免疫熒光檢測(cè)可見CM.dil標(biāo)記的ASCs存在于組織各層次內(nèi),以基底層為主,HE、Masson染色后兩組均可見復(fù)層鱗狀上皮細(xì)胞自陰道外口逆行向上生長(zhǎng),28d后均可覆蓋陰道全長(zhǎng),其中復(fù)合支架組較單純支架組陰道上皮細(xì)胞增長(zhǎng)速率更快,形態(tài)結(jié)構(gòu)更為規(guī)整,新生血管多,炎癥細(xì)胞少,與單純支架組相比陰道重建效果更好。結(jié)論:ASCs能促進(jìn)陰道上皮增生、新生血管形成和抑制炎癥反應(yīng),復(fù)合有ASCs的SIS支架移植陰道重建成功率更高。
【關(guān)鍵詞】：脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞 小腸黏膜下基質(zhì) 陰道重建 增生修復(fù) 炎癥抑制
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R713.3
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-8
• 英文縮寫8-9
• 前言9-11
• 材料與方法11-20
• 結(jié)果20-22
• 附圖22-33
• 討論33-35
• 結(jié)論35-36
• 參考文獻(xiàn)36-40
• 綜述 脂肪干細(xì)胞的生物學(xué)特性及在組織修復(fù)方面的研究進(jìn)展40-51
• 參考文獻(xiàn)46-51
• 致謝51-52
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷52

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