本文關鍵詞：激活或阻斷雌激素受體（ER）對子宮內膜癌細胞Ishikawa內ARID1A表達變化的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:子宮內膜癌是女性生殖系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤之一,其發(fā)病率和死亡率在我國有逐漸上升的趨勢,且趨于年輕化,嚴重危害女性健康。子宮內膜癌的發(fā)生、發(fā)展與很多因素有關,如長期雌激素刺激同時無孕激素拮抗、抑癌基因失活等機制。本課題前期研究發(fā)現,TAM具有刺激子宮內膜細胞雌激素受體(estrogen receptor,ER)作用,即具有雌激素受體激動劑作用,可導致子宮內膜病變,甚至發(fā)生子宮內膜癌[1],而且TAM或雌激素(E2)處理高中低分化的三種子宮內膜癌細胞后ARID1A表達均明顯低于其在未處理子宮內膜癌中的表達,并且細胞周期均表現為G0/G1期縮短,S期延長。ARID1A(AT-rich interacting domain containing protein,又稱腦蛋白120、SMARCF1、p270等)是染色質重組復合物之一,是新發(fā)現的腫瘤抑制基因之一,其低表達與多種腫瘤發(fā)生相關。研究發(fā)現ARID1A在低分化子宮細胞癌及透明細胞癌中表達明顯降低。Zeng等[2]發(fā)現,在膠質瘤細胞中ARID1A過表達會下調p-Akt及p S6K,這提示ARID1A可能通過PI3K-Akt通路調節(jié)細胞增殖。在卵巢透明細胞癌中,ARID1A缺失與PIK3CA突變呈正相關[3]。在子宮內膜癌中ARID1A低表達和PI3K途徑的突變和激活有關[4]。ARID1A可能與PI3K途徑存在相互作用,影響Akt的磷酸化水平,從而控制腫瘤細胞的增殖[5]。本課題的前期實驗研究證明,在子宮內膜癌細胞中ARID1A基因與ER基因的表達呈正相關[6]。PI3K/Akt信號通路(磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白質絲氨酸蘇氨酸激酶,phosphatidylinositol-3-kinases/protein-serine-threonine kinase)是細胞內重要信號轉導通路之一,參與了細胞增殖、凋亡及分化等功能的調控作用。近年研究表明,在許多腫瘤中發(fā)現PI3K/Akt通路活性異常,而其通路的活性紊亂不僅能導致細胞惡性轉化,并與腫瘤細胞的遷移、黏附及腫瘤血管生成等密切相關。研究表明,雌激素可以通過結合ER,在一些共激活因子的共同作用下,激活子宮內膜癌細胞中PI3K/Akt信號通路,進而引起細胞發(fā)生相應改變[7,8]。ARID1A基因的缺失是經過何種信號通路導致子宮內膜癌的發(fā)生,目前國內外尚無研究。ARID1A與ER均通過PI3K/Akt通路發(fā)揮生物學作用,但是ARID1A基因與ER是否存在直接作用或是否經過PI3K/Akt通路相互影響尚不清楚。本實驗研究旨在通過采用雌激素受體激活劑(TAM),或采用雌激素受體阻斷劑(ICI182780)處理子宮內膜癌細胞株Ishikawa后,觀察ARID1A與ER表達的變化,探究ARID1A基因在子宮內膜癌細胞發(fā)生、發(fā)展中的作用,以及ARID1A是否通過ER的改變來影響PI3K/Akt信號通路及可能的作用機制,從而為子宮內膜癌的分子生物學發(fā)病機制提供初步的理論依據。方法:1細胞培育:人子宮內膜癌細胞株Ishikawa,以10%胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液培養(yǎng),培養(yǎng)于37℃,5%CO2、飽和濕度的培養(yǎng)箱內。以0.25%胰蛋白酶消化傳代。細胞呈單層貼壁生長,選用對數生長期進行實驗。2實時定量q RT-PCR法檢測TAM、ICI182780依據不同濃度及不同時間處理子宮內膜癌細胞株Ishikawa后ARID1A、ERα、ERβ、PR、P53、PIK3CA、Aktm RNA的表達水平。3 Western-blot法檢測TAM、ICI182780依據不同濃度及不同時間處理子宮內膜癌細胞株Ishikawa后BAF250a、ERα、ERβ、PR、P53、PIK3CA、p-Akt蛋白的表達水平。4流式細胞術測定TAM、ICI182780依據不同濃度及不同時間處理子宮內膜癌細胞株Ishikawa后細胞周期及凋亡變化情況。結果:1經過不同濃度TAM處理子宮內膜癌細胞株Ishikawa后,ARID1A、ERα、ERβm RNA及蛋白的表達隨著藥物濃度的增加而降低,隨著藥物處理時間的延長而降低(P0.05),而PR、P53、PIK3CA、Aktm RNA及蛋白在子宮內膜癌細胞株Ishikawa中的表達隨著藥物濃度的增加而增加,隨著藥物處理時間的延長而增加(P0.05),呈時間-劑量依賴性。經過不同濃度ICI182780處理子宮內膜癌細胞株Ishikawa后,ARID1A、ERα、ERβm RNA及蛋白的表達隨著藥物濃度的增加而增加,隨著藥物處理時間的延長而增加(P0.05),而PR、P53、PIK3CA、Aktm RNA及蛋白在子宮內膜癌細胞株Ishikawa中的表達隨著藥物濃度的增加而降低,隨著藥物處理時間的延長而降低(P0.05),呈時間-劑量依賴性。2經過不同濃度TAM處理子宮內膜癌細胞株Ishikawa后,細胞表現為隨著藥物濃度的增高及處理時間的延長,G0/G1期逐漸縮短,S期逐漸延長(P0.05),凋亡率改變不明顯。經過不同濃度ICI182780處理子宮內膜癌細胞株Ishikawa后,細胞表現為隨著藥物濃度的增高及處理時間的延長,凋亡率逐漸增加(P0.05),細胞周期改變不明顯。結論:ER激活或阻斷后ARID1A的表達下調或上調,進而誘導了下游PI3K/Akt通路的變化,細胞周期也發(fā)生變化。子宮內膜癌的發(fā)生可能與ER激活,進而ARID1A功能受抑制和Akt的活化相關。
【關鍵詞】：子宮內膜癌 ARID1A ER P53 PI3K/Akt 細胞周期 凋亡
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R737.33
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-10
• 英文縮寫10-11
• 前言11-13
• 材料與方法13-21
• 結果21-23
• 附圖23-39
• 附表39-47
• 討論47-54
• 結論54
• 參考文獻54-60
• 綜述 染色質重塑復合體ARID1A基因在腫瘤中的研究進展60-68
• 參考文獻65-68
• 致謝68-69
• 個人簡歷69

【共引文獻】

中國博士學位論文全文數據庫 前5條

1 梅玫;靶向AKT通路的非編碼RNA聯合化療抑制乳腺癌細胞生長的研究[D];天津大學;2010年

2 王梅;ER亞型和ProTα在胃腺癌中的作用及機制研究[D];大連理工大學;2007年

3 余文發(fā);阻斷離子通道影響人喉鱗癌Hep-2細胞增殖、凋亡及RNA編輯酶ADAR1表達的體內外實驗研究[D];鄭州大學;2009年

4 謝彪;Klotho誘導胃癌細胞株凋亡和自噬的相關性研究[D];中南大學;2014年

5 易軍;白細胞介素-8對缺血心肌血管新生的影響及其機制研究[D];中南大學;2014年

  本文關鍵詞：激活或阻斷雌激素受體（ER）對子宮內膜癌細胞Ishikawa內ARID1A表達變化的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：367077