本文關(guān)鍵詞：激活或阻斷雌激素受體（ER）對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞Ishikawa內(nèi)ARID1A表達(dá)變化的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:子宮內(nèi)膜癌是女性生殖系統(tǒng)最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一,其發(fā)病率和死亡率在我國(guó)有逐漸上升的趨勢(shì),且趨于年輕化,嚴(yán)重危害女性健康。子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生、發(fā)展與很多因素有關(guān),如長(zhǎng)期雌激素刺激同時(shí)無(wú)孕激素拮抗、抑癌基因失活等機(jī)制。本課題前期研究發(fā)現(xiàn),TAM具有刺激子宮內(nèi)膜細(xì)胞雌激素受體(estrogen receptor,ER)作用,即具有雌激素受體激動(dòng)劑作用,可導(dǎo)致子宮內(nèi)膜病變,甚至發(fā)生子宮內(nèi)膜癌[1],而且TAM或雌激素(E2)處理高中低分化的三種子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞后ARID1A表達(dá)均明顯低于其在未處理子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá),并且細(xì)胞周期均表現(xiàn)為G0/G1期縮短,S期延長(zhǎng)。ARID1A(AT-rich interacting domain containing protein,又稱(chēng)腦蛋白120、SMARCF1、p270等)是染色質(zhì)重組復(fù)合物之一,是新發(fā)現(xiàn)的腫瘤抑制基因之一,其低表達(dá)與多種腫瘤發(fā)生相關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)ARID1A在低分化子宮細(xì)胞癌及透明細(xì)胞癌中表達(dá)明顯降低。Zeng等[2]發(fā)現(xiàn),在膠質(zhì)瘤細(xì)胞中ARID1A過(guò)表達(dá)會(huì)下調(diào)p-Akt及p S6K,這提示ARID1A可能通過(guò)PI3K-Akt通路調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖。在卵巢透明細(xì)胞癌中,ARID1A缺失與PIK3CA突變呈正相關(guān)[3]。在子宮內(nèi)膜癌中ARID1A低表達(dá)和PI3K途徑的突變和激活有關(guān)[4]。ARID1A可能與PI3K途徑存在相互作用,影響Akt的磷酸化水平,從而控制腫瘤細(xì)胞的增殖[5]。本課題的前期實(shí)驗(yàn)研究證明,在子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞中ARID1A基因與ER基因的表達(dá)呈正相關(guān)[6]。PI3K/Akt信號(hào)通路(磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白質(zhì)絲氨酸蘇氨酸激酶,phosphatidylinositol-3-kinases/protein-serine-threonine kinase)是細(xì)胞內(nèi)重要信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路之一,參與了細(xì)胞增殖、凋亡及分化等功能的調(diào)控作用。近年研究表明,在許多腫瘤中發(fā)現(xiàn)PI3K/Akt通路活性異常,而其通路的活性紊亂不僅能導(dǎo)致細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化,并與腫瘤細(xì)胞的遷移、黏附及腫瘤血管生成等密切相關(guān)。研究表明,雌激素可以通過(guò)結(jié)合ER,在一些共激活因子的共同作用下,激活子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞中PI3K/Akt信號(hào)通路,進(jìn)而引起細(xì)胞發(fā)生相應(yīng)改變[7,8]。ARID1A基因的缺失是經(jīng)過(guò)何種信號(hào)通路導(dǎo)致子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生,目前國(guó)內(nèi)外尚無(wú)研究。ARID1A與ER均通過(guò)PI3K/Akt通路發(fā)揮生物學(xué)作用,但是ARID1A基因與ER是否存在直接作用或是否經(jīng)過(guò)PI3K/Akt通路相互影響尚不清楚。本實(shí)驗(yàn)研究旨在通過(guò)采用雌激素受體激活劑(TAM),或采用雌激素受體阻斷劑(ICI182780)處理子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株Ishikawa后,觀察ARID1A與ER表達(dá)的變化,探究ARID1A基因在子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞發(fā)生、發(fā)展中的作用,以及ARID1A是否通過(guò)ER的改變來(lái)影響PI3K/Akt信號(hào)通路及可能的作用機(jī)制,從而為子宮內(nèi)膜癌的分子生物學(xué)發(fā)病機(jī)制提供初步的理論依據(jù)。方法:1細(xì)胞培育:人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株Ishikawa,以10%胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液培養(yǎng),培養(yǎng)于37℃,5%CO2、飽和濕度的培養(yǎng)箱內(nèi)。以0.25%胰蛋白酶消化傳代。細(xì)胞呈單層貼壁生長(zhǎng),選用對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。2實(shí)時(shí)定量q RT-PCR法檢測(cè)TAM、ICI182780依據(jù)不同濃度及不同時(shí)間處理子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株Ishikawa后ARID1A、ERα、ERβ、PR、P53、PIK3CA、Aktm RNA的表達(dá)水平。3 Western-blot法檢測(cè)TAM、ICI182780依據(jù)不同濃度及不同時(shí)間處理子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株Ishikawa后BAF250a、ERα、ERβ、PR、P53、PIK3CA、p-Akt蛋白的表達(dá)水平。4流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定TAM、ICI182780依據(jù)不同濃度及不同時(shí)間處理子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株Ishikawa后細(xì)胞周期及凋亡變化情況。結(jié)果:1經(jīng)過(guò)不同濃度TAM處理子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株Ishikawa后,ARID1A、ERα、ERβm RNA及蛋白的表達(dá)隨著藥物濃度的增加而降低,隨著藥物處理時(shí)間的延長(zhǎng)而降低(P0.05),而PR、P53、PIK3CA、Aktm RNA及蛋白在子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株Ishikawa中的表達(dá)隨著藥物濃度的增加而增加,隨著藥物處理時(shí)間的延長(zhǎng)而增加(P0.05),呈時(shí)間-劑量依賴(lài)性。經(jīng)過(guò)不同濃度ICI182780處理子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株Ishikawa后,ARID1A、ERα、ERβm RNA及蛋白的表達(dá)隨著藥物濃度的增加而增加,隨著藥物處理時(shí)間的延長(zhǎng)而增加(P0.05),而PR、P53、PIK3CA、Aktm RNA及蛋白在子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株Ishikawa中的表達(dá)隨著藥物濃度的增加而降低,隨著藥物處理時(shí)間的延長(zhǎng)而降低(P0.05),呈時(shí)間-劑量依賴(lài)性。2經(jīng)過(guò)不同濃度TAM處理子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株Ishikawa后,細(xì)胞表現(xiàn)為隨著藥物濃度的增高及處理時(shí)間的延長(zhǎng),G0/G1期逐漸縮短,S期逐漸延長(zhǎng)(P0.05),凋亡率改變不明顯。經(jīng)過(guò)不同濃度ICI182780處理子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株Ishikawa后,細(xì)胞表現(xiàn)為隨著藥物濃度的增高及處理時(shí)間的延長(zhǎng),凋亡率逐漸增加(P0.05),細(xì)胞周期改變不明顯。結(jié)論:ER激活或阻斷后ARID1A的表達(dá)下調(diào)或上調(diào),進(jìn)而誘導(dǎo)了下游PI3K/Akt通路的變化,細(xì)胞周期也發(fā)生變化。子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生可能與ER激活,進(jìn)而ARID1A功能受抑制和Akt的活化相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：子宮內(nèi)膜癌 ARID1A ER P53 PI3K/Akt 細(xì)胞周期 凋亡
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R737.33
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-10
• 英文縮寫(xiě)10-11
• 前言11-13
• 材料與方法13-21
• 結(jié)果21-23
• 附圖23-39
• 附表39-47
• 討論47-54
• 結(jié)論54
• 參考文獻(xiàn)54-60
• 綜述 染色質(zhì)重塑復(fù)合體ARID1A基因在腫瘤中的研究進(jìn)展60-68
• 參考文獻(xiàn)65-68
• 致謝68-69
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷69

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前5條

1 梅玫;靶向AKT通路的非編碼RNA聯(lián)合化療抑制乳腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)的研究[D];天津大學(xué);2010年

2 王梅;ER亞型和ProTα在胃腺癌中的作用及機(jī)制研究[D];大連理工大學(xué);2007年

3 余文發(fā);阻斷離子通道影響人喉鱗癌Hep-2細(xì)胞增殖、凋亡及RNA編輯酶ADAR1表達(dá)的體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)研究[D];鄭州大學(xué);2009年

4 謝彪;Klotho誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞株凋亡和自噬的相關(guān)性研究[D];中南大學(xué);2014年

5 易軍;白細(xì)胞介素-8對(duì)缺血心肌血管新生的影響及其機(jī)制研究[D];中南大學(xué);2014年

  本文關(guān)鍵詞：激活或阻斷雌激素受體（ER）對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞Ishikawa內(nèi)ARID1A表達(dá)變化的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：367077