本文關鍵詞：miR-182對瘦素誘導的卵巢癌細胞生長的影響及調(diào)控機制，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:本研究采用隨機對照原則研究瘦素和miR-182表達水平與卵巢癌發(fā)生和發(fā)展的相關性。選擇在2013年11月1日至2014年1月31日期間來我院接受治療的60例卵巢癌患者以及60例良性卵巢腫瘤患者為研究對象,應用手術(shù)療法與化學治療方法相結(jié)合的方式進行治療,取患者卵巢癌組織、良性腫瘤組織進行檢測,分析mIR-182以及瘦素mRNA和蛋白質(zhì)表達水平。另外建立體外卵巢癌細胞模型SKOV3和A2780,分析miR-182對瘦素誘導的卵巢癌細胞增殖和凋亡的影響。探討miR-182對其潛在靶基因FOXO3的調(diào)控以及二者在調(diào)控卵巢癌進展中的作用,以期明確mi R-182對瘦素誘導的卵巢癌細胞生長的作用機制及其臨床價值。方法:1.臨床收集卵巢癌組織標本60例,同時收集卵巢良性腫瘤標本60例。2.應用PCR方法檢測組織標本中瘦素mRNA表達,應用Western blot法檢測織標本中瘦素蛋白的表達;3.應用定量PCR方法檢測組織標本中miR-182的表達;4.酶聯(lián)免疫吸附法檢測卵巢癌患者術(shù)前、術(shù)后血清和尿液中瘦素的含量;5.選用卵巢癌細胞株SKOV3和A2780細胞作為研究對象;6.應用不同濃度的瘦素(10、25、50、100和200ng/ml)作用卵巢癌細胞,mtt法檢測細胞增殖,流式細胞技術(shù)檢測細胞凋亡;7.應用定量pcr方法檢測卵巢癌細胞中mir-182的表達;同時應用westernblot法檢測foxo3、bim和p27基因蛋白表達;8.應用rna干擾技術(shù),下調(diào)卵巢癌細胞mir-182表達后;再應用不同濃度的瘦素(10、25、50、100和200ng/ml)作用癌細胞,mtt法檢測細胞增殖,流式細胞技術(shù)法檢測細胞凋亡;同時應用westernblot法檢測foxo3、bim和p27基因蛋白表達。結(jié)果:1.不同臨床期別(Ⅰ-Ⅳ)的卵巢癌組織中瘦素mrna相對表達量分別為(0.523±0.087,0.725±0.145,1.412±0.298,1.756±0.341),隨臨床期別增加,卵巢癌組織中瘦素mrna表達量增加,差異有統(tǒng)計學意義(f=26.07,p0.01);2.不同臨床期別(Ⅰ-Ⅳ)的卵巢癌組織中瘦素蛋白相對表達量分別為(0.426±0.057,0.562±0.086,1.021±0.173,1.611±0.286),隨臨床期別增加,卵巢癌組織中瘦素蛋白表達量增加,差異有統(tǒng)計學意義(f=10.24,p=0.0013);3.不同臨床期別(Ⅰ-Ⅳ)的卵巢癌組織中mir-182表達量分別為(0.426±0.105,0.984±0.251,1.589±0.351,2.045±0.568)隨臨床期別增加,卵巢癌組織中mir-182表達量增加,差異有統(tǒng)計學意義(f=13.756,p=0.002);4.卵巢癌患者術(shù)前血清中瘦素含量為(22.75±2.53)ng·ml-1,手術(shù)后血清中瘦素含量為(18.37±1.97)ng·ml-1,差異有統(tǒng)計學意義(p=0.003)。術(shù)前尿液中瘦素含量為(9.35±1.01)ng·ml-1,術(shù)后尿液中瘦素含量為(7.57±0.75)ng·ml-1,差異具有統(tǒng)計學意義(p=0.009);5.經(jīng)相關分析,卵巢癌組織中mir-182表達量與瘦素mrna表達量和蛋白表達量分別呈正相關(r=0.57,p0.001;r=0.42,p=0.009);6.卵巢癌細胞經(jīng)不同濃度瘦素作用后,細胞增殖率增加(f=12.56,p=0.045),凋亡減少(f=16.35,p=0.047),差異有統(tǒng)計學意義;同時卵巢癌細胞mir-182表達量增加,差異有統(tǒng)計學意義(f=17.88,p=0.012);foxo3、bim和p27基因蛋白表達增加,差異有統(tǒng)計學意義(p=0.022;p=0.008;p=0.012);7.應用RNA干擾,下調(diào)miR-182表達后,經(jīng)不同濃度瘦素作用,卵巢癌細胞增殖率變化差異無統(tǒng)計學意義(SKOV3:F=3.98,P=0.59;A2780:F=5.69,P=0.78);卵巢癌細胞miR-182表達量變化差異無統(tǒng)計學意義(F=2.06,P=1.13;F=3.56,P=0.96);SKOV3細胞中FOXO3、Bim和p27基因蛋白相對表達量表達顯著升高,分別為1.78±0.25、1.76±0.24、1.56±0.12,與對照組相比,差異有統(tǒng)計學意義(分別為P=0.023;P=0.042;P=0.05)。結(jié)論:1.瘦素可誘導卵巢癌細胞增殖,在此過程中,miR-182有介導作用;2.MiR-182可能是通過調(diào)控靶基因FOXO3、Bim和p27基因表達而發(fā)揮介導作用。
【關鍵詞】：miR-182 瘦素 卵巢癌 細胞生長 RNA干擾
【學位授予單位】：第四軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R737.31
【目錄】：

• 縮略語表5-6
• 中文摘要6-9
• Abstract9-12
• 前言12-14
• 文獻回顧14-28
• 第一部分 miR-182和瘦素在卵巢癌患者組織中的表達及其與卵巢癌發(fā)展的相關性研究28-48
• 1 資料28-30
• 1.1 研究對象28
• 1.2 納入排除標準28-29
• 1.3 觀察指標29
• 1.4 實驗試劑29-30
• 1.5 實驗儀器30
• 2 方法30-38
• 2.1 RT-PCR檢測兩組患者組織中瘦素mRNA表達30-32
• 2.2 蛋白質(zhì)印跡法（Western Blot）檢測兩組患者組織中瘦素蛋白水平32-35
• 2.3 RT-qPCR 檢測卵巢癌患者組織中 miR-182 表達35-37
• 2.4 酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢查患者血清和尿液中的瘦素水平37-38
• 2.5 統(tǒng)計學方法38
• 3 結(jié)果38-45
• 3.1 瘦素mRNA在兩組患者組織中的表達38-40
• 3.2 瘦素蛋白在兩組患者組織中的表達40-41
• 3.3 miR-182 在卵巢癌組織中的表達41-43
• 3.4 酶聯(lián)免疫吸附法檢測卵巢癌患者血清及尿液中瘦素含量43-44
• 3.5 卵巢癌患者組織中miR-182與瘦素mRNA和蛋白表達的相關性分析44-45
• 4 討論45-48
• 第二部分 miR-182對瘦素誘導的卵巢癌細胞生長的調(diào)控作用48-64
• 1 材料48-50
• 1.1 主要試劑48-49
• 1.2 主要儀器49-50
• 2 方法50-54
• 2.1 卵巢癌細胞培養(yǎng)50-51
• 2.2 MTT法檢測卵巢癌細胞增殖51
• 2.3 流式細胞術(shù)檢測卵巢癌細胞凋亡變化情況51-52
• 2.4 miR-182反義序列的瞬時轉(zhuǎn)染52
• 2.5 蛋白質(zhì)印跡法52-53
• 2.6 統(tǒng)計學方法53-54
• 3 結(jié)果54-61
• 3.1 不同濃度瘦素作用后卵巢癌細胞增殖和凋亡率的變化54-55
• 3.2 不同濃度瘦素作用對卵巢癌細胞中mi R-182表達的影響55-56
• 3.3 瘦素對卵巢癌細胞中FOXO3及其下游基因p27/Bim的影響56-57
• 3.4 miR-182 antago-miR對瘦素誘導的卵巢癌細胞中miR-182表達的抑制作用57-59
• 3.5 miR-182 antago-miR對瘦素誘導的卵巢癌細胞增殖的作用59
• 3.6 miR-182 antago-miR對瘦素誘導的FOXO3及其下游靶基因p27和Bim表達的影響59-61
• 4 討論61-64
• 小結(jié)64-65
• 參考文獻65-76
• 個人簡歷及研究成果76-77
• 致謝77

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 任玉霞;吳京芳;;卵巢癌患者血清可溶性間皮素相關蛋白的檢測及其意義[J];中國實驗診斷學;2014年01期

2 郭玉琪;趙冠男;郝玉娟;李曉倩;田捧;張俊清;郭歡歡;張展;;瘦素在卵巢癌中的表達及臨床意義[J];中國婦幼保健;2014年13期

  本文關鍵詞：miR-182對瘦素誘導的卵巢癌細胞生長的影響及調(diào)控機制，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：358745