本文關(guān)鍵詞：結(jié)締組織生長(zhǎng)因子與骨形態(tài)發(fā)生蛋白-9在去卵巢大鼠骨丟失中的表達(dá)及意義，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥(postmenopausal osteoporosis,PMOP)是絕經(jīng)后卵巢功能衰退、雌激素水平下降、降鈣素分泌不足等,導(dǎo)致破骨細(xì)胞的骨吸收大于成骨細(xì)胞的骨形成,出現(xiàn)低骨量和骨組織的顯微結(jié)構(gòu)退行性改變,屬于原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥。本病以骨脆性和骨折易感性增加、致殘率及死亡率增高為特征。隨著人口老齡化加劇,本病的發(fā)生率呈逐漸上升趨勢(shì),這不僅降低患者生活質(zhì)量,也給社會(huì)帶來(lái)嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。長(zhǎng)期以來(lái),PMOP的預(yù)防和治療主要采用激素補(bǔ)充療法,此療法是目前公認(rèn)的最有效治療方法,但必須嚴(yán)格掌握治療的適應(yīng)證和禁忌證,遵循早期使用、應(yīng)用最小有效劑量、個(gè)體化用藥以及定期隨訪等原則,只能在適宜人群中推廣使用。因此我們?nèi)孕柽M(jìn)一步研究PMOP的發(fā)病機(jī)制,來(lái)尋求治療PMOP的新途徑。結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(connective tissue growth factor,CTGF)是一種細(xì)胞外基質(zhì)分泌蛋白,參與體內(nèi)多種病理生理過(guò)程,它的作用機(jī)制非常復(fù)雜,同樣也存在許多爭(zhēng)論。在骨代謝疾病中,CTGF可通過(guò)不同的信號(hào)通路參與,其中包括骨形態(tài)發(fā)生蛋白(bone morphogenetic protein,BMPs)。BMPs是一組具有類似結(jié)構(gòu)的高度保守的分泌型多功能蛋白,通過(guò)血液循環(huán)到達(dá)全身,以類似激素的形式對(duì)骨和骨外組織發(fā)揮作用,而BMP-9是已知BMPs家族中成骨活性最強(qiáng)的成員之一。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)去卵巢建立大鼠PMOP模型,應(yīng)用免疫組化方法檢測(cè)CTGF在PMOP大鼠骨組織中的表達(dá)及ELISA方法檢測(cè)BMP-9在大鼠血清中的表達(dá)情況,探討兩者在PMOP中的作用及相關(guān)性。方法:1動(dòng)物分組和PMOP動(dòng)物模型制備3月齡雌性清潔級(jí)Sprague/Dawley大鼠30只,隨機(jī)分為3組,每組10只:①假手術(shù)(Sham)組;②卵巢切除(OVX)組;③卵巢切除+戊酸雌二醇(OVX+E)組。將大鼠以10%水合氯醛(0.35ml/100g體重)腹腔注射麻醉成功后,在無(wú)菌條件下,經(jīng)腰背部正中縱行切口進(jìn)入腹腔背側(cè),將OVX組和OVX+E組大鼠切除雙側(cè)卵巢,Sham組大鼠僅切除雙側(cè)卵巢下方少量脂肪組織,重量約與卵巢相同,術(shù)后給予頭孢唑林預(yù)防感染。自去卵巢術(shù)后7天起,分別對(duì)各組大鼠進(jìn)行灌胃給藥,時(shí)間為12周。OVX+E組給予戊酸雌二醇0.833mg.kg-1.d-1灌胃,Sham組和OVX組則以10ml/Kg體重給予相應(yīng)體積的0.9%氯化鈉溶液灌胃,每日一次。給藥劑量每周按體重校正一次。2雙能X線吸收法測(cè)量骨密度(bone mineral density,BMD)灌胃12周后,分別取各組實(shí)驗(yàn)大鼠,在麻醉狀態(tài)下,四肢展平置于Osteocore3型雙能X線骨密度儀上,通過(guò)計(jì)算機(jī)系統(tǒng)中心動(dòng)物軟件,測(cè)量每只大鼠腰椎及兩側(cè)股骨BMD,每只各測(cè)量3次后取平均值,BMD值用g/cm2表示。3蘇木素-伊紅(HE)染色、免疫組織化學(xué)染色、ELISA各組實(shí)驗(yàn)大鼠心臟取血2ml后處死,立即無(wú)菌操作取左側(cè)股骨,甲醛固定,供HE染色和免疫組化檢測(cè)。ELISA測(cè)定血清BMP-9水平。4結(jié)果判定與統(tǒng)計(jì)學(xué)分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果應(yīng)用SPSS 16.0軟件統(tǒng)計(jì)分析。所測(cè)數(shù)值均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(-X±S)表示,方差齊性檢驗(yàn)采用Levene法,各組間變量比較采用完全隨機(jī)的單因素方差分析,并采用SNK法進(jìn)行組間差異比較;相關(guān)性分析采用pearson積差相關(guān)分析。P0.05被認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:1各組大鼠BMD比較:與Sham組相比,OVX組腰椎、股骨BMD下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),OVX+E組腰椎、股骨BMD無(wú)明顯差異(P0.05);與OVX組相比,Sham組與OVX+E組腰椎、股骨BMD增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05,P0.05)。2骨組織形態(tài)觀察:(1)Sham組:骨皮質(zhì)致密,骨小梁呈縱向排列,相互連接呈網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),排列緊密,分布均勻,無(wú)斷裂現(xiàn)象,骨小梁數(shù)目多,間距小;(2)OVX組:骨髓腔增大,骨皮質(zhì)變薄,骨小梁稀疏或斷裂,無(wú)網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),可見大量小梁盲端,骨小梁數(shù)目減少,間距變寬;(3)OVX+E組大鼠骨組織形態(tài)與Sham組基本相似。3免疫組織化學(xué)染色結(jié)果觀察:CTGF蛋白在骨組織中的表達(dá)特征:CTGF陽(yáng)性信號(hào)主要位于骨小梁周邊的軟骨細(xì)胞、成骨細(xì)胞以及骨髓腔中,以骨髓腔中脂肪細(xì)胞外基質(zhì)居多。Sham組與OVX+E組均見少量CTGF蛋白表達(dá),OVX組可見大量CTGF蛋白表達(dá)。與Sham組相比,OVX組CTGF蛋白表達(dá)增強(qiáng)(P0.05),OVX+E組CTGF蛋白表達(dá)無(wú)明顯差異(P0.05);與OVX組相比,Sham組與OVX+E組CTGF蛋白表達(dá)減弱(P0.05,P0.05)。4血清BMP-9水平結(jié)果:與Sham組相比,OVX組血清BMP-9降低(P0.05),OVX+E組血清BMP-9表達(dá)無(wú)明顯差異(P0.05);與OVX組相比,Sham組與OVX+E組血清BMP-9增高(P0.05,P0.05)。5相關(guān)性分析:OVX組、Sham組、OVX+E組大鼠血清中BMP-9與左股骨BMD呈正相關(guān)(r=0.721,P0.05,r=0.879,P0.05,r=0.885,P0.05)。OVX組大鼠骨組織中,CTGF表達(dá)與左股骨BMD呈負(fù)相關(guān)(r=-0.636,P0.05);OVX+E組和Sham組大鼠骨組織中,CTGF表達(dá)與左股骨BMD無(wú)明顯相關(guān)性(r=-0.572,P0.05,r=-0.423,P0.05)。OVX組大鼠骨組織中,CTGF表達(dá)與BMP-9呈負(fù)相關(guān)(r=-0.647,P0.05);OVX+E組和Sham組大鼠骨組織中,CTGF表達(dá)與BMP-9無(wú)明顯相關(guān)性(r=-0.353,P0.05,r=-0.455,P0.05)。結(jié)論:1 CTGF在PMOP中呈過(guò)度表達(dá)狀態(tài),雌激素能阻止CTGF的過(guò)度表達(dá)。2 BMP-9具有促進(jìn)骨形成的作用。3 CTGF的過(guò)度表達(dá)可能抑制了BMP-9的表達(dá),引起骨形成減少而導(dǎo)致PMOP,這一切入點(diǎn)提示CTGF可能為預(yù)防和治療PMOP提供新的治療靶點(diǎn),且BMP-9也有希望作為一種促進(jìn)細(xì)胞成骨分化的細(xì)胞因子而應(yīng)用于PMOP。
【關(guān)鍵詞】：絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥 卵巢切除 結(jié)締組織生長(zhǎng)因子 骨形態(tài)發(fā)生蛋白-9 成骨細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R711.75;R580
【目錄】：

• 中文摘要4-8
• 英文摘要8-13
• 英文縮寫13-14
• 前言14-15
• 材料與方法15-19
• 結(jié)果19-21
• 附圖21-24
• 附表24-26
• 討論26-32
• 結(jié)論32
• 參考文獻(xiàn)32-37
• 綜述 結(jié)締組織生長(zhǎng)因子與骨形態(tài)發(fā)生蛋白-9在骨代謝中的研究進(jìn)展37-45
• 參考文獻(xiàn)42-45
• 致謝45-46
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷46

【參考文獻(xiàn)】

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中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

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  本文關(guān)鍵詞：結(jié)締組織生長(zhǎng)因子與骨形態(tài)發(fā)生蛋白-9在去卵巢大鼠骨丟失中的表達(dá)及意義，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：350380