本文關鍵詞：結締組織生長因子與骨形態(tài)發(fā)生蛋白-9在去卵巢大鼠骨丟失中的表達及意義，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:絕經后骨質疏松癥(postmenopausal osteoporosis,PMOP)是絕經后卵巢功能衰退、雌激素水平下降、降鈣素分泌不足等,導致破骨細胞的骨吸收大于成骨細胞的骨形成,出現低骨量和骨組織的顯微結構退行性改變,屬于原發(fā)性骨質疏松癥。本病以骨脆性和骨折易感性增加、致殘率及死亡率增高為特征。隨著人口老齡化加劇,本病的發(fā)生率呈逐漸上升趨勢,這不僅降低患者生活質量,也給社會帶來嚴重經濟負擔。長期以來,PMOP的預防和治療主要采用激素補充療法,此療法是目前公認的最有效治療方法,但必須嚴格掌握治療的適應證和禁忌證,遵循早期使用、應用最小有效劑量、個體化用藥以及定期隨訪等原則,只能在適宜人群中推廣使用。因此我們仍需進一步研究PMOP的發(fā)病機制,來尋求治療PMOP的新途徑。結締組織生長因子(connective tissue growth factor,CTGF)是一種細胞外基質分泌蛋白,參與體內多種病理生理過程,它的作用機制非常復雜,同樣也存在許多爭論。在骨代謝疾病中,CTGF可通過不同的信號通路參與,其中包括骨形態(tài)發(fā)生蛋白(bone morphogenetic protein,BMPs)。BMPs是一組具有類似結構的高度保守的分泌型多功能蛋白,通過血液循環(huán)到達全身,以類似激素的形式對骨和骨外組織發(fā)揮作用,而BMP-9是已知BMPs家族中成骨活性最強的成員之一。本實驗通過去卵巢建立大鼠PMOP模型,應用免疫組化方法檢測CTGF在PMOP大鼠骨組織中的表達及ELISA方法檢測BMP-9在大鼠血清中的表達情況,探討兩者在PMOP中的作用及相關性。方法:1動物分組和PMOP動物模型制備3月齡雌性清潔級Sprague/Dawley大鼠30只,隨機分為3組,每組10只:①假手術(Sham)組;②卵巢切除(OVX)組;③卵巢切除+戊酸雌二醇(OVX+E)組。將大鼠以10%水合氯醛(0.35ml/100g體重)腹腔注射麻醉成功后,在無菌條件下,經腰背部正中縱行切口進入腹腔背側,將OVX組和OVX+E組大鼠切除雙側卵巢,Sham組大鼠僅切除雙側卵巢下方少量脂肪組織,重量約與卵巢相同,術后給予頭孢唑林預防感染。自去卵巢術后7天起,分別對各組大鼠進行灌胃給藥,時間為12周。OVX+E組給予戊酸雌二醇0.833mg.kg-1.d-1灌胃,Sham組和OVX組則以10ml/Kg體重給予相應體積的0.9%氯化鈉溶液灌胃,每日一次。給藥劑量每周按體重校正一次。2雙能X線吸收法測量骨密度(bone mineral density,BMD)灌胃12周后,分別取各組實驗大鼠,在麻醉狀態(tài)下,四肢展平置于Osteocore3型雙能X線骨密度儀上,通過計算機系統(tǒng)中心動物軟件,測量每只大鼠腰椎及兩側股骨BMD,每只各測量3次后取平均值,BMD值用g/cm2表示。3蘇木素-伊紅(HE)染色、免疫組織化學染色、ELISA各組實驗大鼠心臟取血2ml后處死,立即無菌操作取左側股骨,甲醛固定,供HE染色和免疫組化檢測。ELISA測定血清BMP-9水平。4結果判定與統(tǒng)計學分析實驗結果應用SPSS 16.0軟件統(tǒng)計分析。所測數值均以均數±標準差(-X±S)表示,方差齊性檢驗采用Levene法,各組間變量比較采用完全隨機的單因素方差分析,并采用SNK法進行組間差異比較;相關性分析采用pearson積差相關分析。P0.05被認為有統(tǒng)計學意義。結果:1各組大鼠BMD比較:與Sham組相比,OVX組腰椎、股骨BMD下降,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),OVX+E組腰椎、股骨BMD無明顯差異(P0.05);與OVX組相比,Sham組與OVX+E組腰椎、股骨BMD增加,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05,P0.05)。2骨組織形態(tài)觀察:(1)Sham組:骨皮質致密,骨小梁呈縱向排列,相互連接呈網狀結構,排列緊密,分布均勻,無斷裂現象,骨小梁數目多,間距小;(2)OVX組:骨髓腔增大,骨皮質變薄,骨小梁稀疏或斷裂,無網狀結構,可見大量小梁盲端,骨小梁數目減少,間距變寬;(3)OVX+E組大鼠骨組織形態(tài)與Sham組基本相似。3免疫組織化學染色結果觀察:CTGF蛋白在骨組織中的表達特征:CTGF陽性信號主要位于骨小梁周邊的軟骨細胞、成骨細胞以及骨髓腔中,以骨髓腔中脂肪細胞外基質居多。Sham組與OVX+E組均見少量CTGF蛋白表達,OVX組可見大量CTGF蛋白表達。與Sham組相比,OVX組CTGF蛋白表達增強(P0.05),OVX+E組CTGF蛋白表達無明顯差異(P0.05);與OVX組相比,Sham組與OVX+E組CTGF蛋白表達減弱(P0.05,P0.05)。4血清BMP-9水平結果:與Sham組相比,OVX組血清BMP-9降低(P0.05),OVX+E組血清BMP-9表達無明顯差異(P0.05);與OVX組相比,Sham組與OVX+E組血清BMP-9增高(P0.05,P0.05)。5相關性分析:OVX組、Sham組、OVX+E組大鼠血清中BMP-9與左股骨BMD呈正相關(r=0.721,P0.05,r=0.879,P0.05,r=0.885,P0.05)。OVX組大鼠骨組織中,CTGF表達與左股骨BMD呈負相關(r=-0.636,P0.05);OVX+E組和Sham組大鼠骨組織中,CTGF表達與左股骨BMD無明顯相關性(r=-0.572,P0.05,r=-0.423,P0.05)。OVX組大鼠骨組織中,CTGF表達與BMP-9呈負相關(r=-0.647,P0.05);OVX+E組和Sham組大鼠骨組織中,CTGF表達與BMP-9無明顯相關性(r=-0.353,P0.05,r=-0.455,P0.05)。結論:1 CTGF在PMOP中呈過度表達狀態(tài),雌激素能阻止CTGF的過度表達。2 BMP-9具有促進骨形成的作用。3 CTGF的過度表達可能抑制了BMP-9的表達,引起骨形成減少而導致PMOP,這一切入點提示CTGF可能為預防和治療PMOP提供新的治療靶點,且BMP-9也有希望作為一種促進細胞成骨分化的細胞因子而應用于PMOP。
【關鍵詞】：絕經后骨質疏松癥 卵巢切除 結締組織生長因子 骨形態(tài)發(fā)生蛋白-9 成骨細胞
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R711.75;R580
【目錄】：

• 中文摘要4-8
• 英文摘要8-13
• 英文縮寫13-14
• 前言14-15
• 材料與方法15-19
• 結果19-21
• 附圖21-24
• 附表24-26
• 討論26-32
• 結論32
• 參考文獻32-37
• 綜述 結締組織生長因子與骨形態(tài)發(fā)生蛋白-9在骨代謝中的研究進展37-45
• 參考文獻42-45
• 致謝45-46
• 個人簡歷46

【參考文獻】

中國期刊全文數據庫 前4條

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3 吳大鵬;劉曉譚;楊林;董玉珍;馬超;路坦;;血漿及關節(jié)滑液中結締組織生長因子水平與膝關節(jié)骨性關節(jié)炎嚴重程度的相關性[J];新鄉(xiāng)醫(yī)學院學報;2013年08期

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中國碩士學位論文全文數據庫 前1條

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  本文關鍵詞：結締組織生長因子與骨形態(tài)發(fā)生蛋白-9在去卵巢大鼠骨丟失中的表達及意義，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：350380