本文關(guān)鍵詞：異甘草素誘導(dǎo)宮頸癌細(xì)胞半胱天冬酶依賴性凋亡機(jī)制，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:本實(shí)驗(yàn)以宮頸癌細(xì)胞株Hela細(xì)胞和維吾爾族宮頸癌患者中提取培養(yǎng)的原代宮頸癌細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,研究異甘草素(ISL)抑制宮頸癌細(xì)胞增殖作用及促進(jìn)細(xì)胞凋亡作用機(jī)制。方法:1.體外培養(yǎng)宮頸癌Hela細(xì)胞和原代細(xì)胞,用倒置光學(xué)顯微鏡觀察細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化;2.不同濃度ISL處理Hela細(xì)胞和原代細(xì)胞,采用MTT法檢測(cè)I SL對(duì)細(xì)胞體外增殖的抑制作用;3.應(yīng)用流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測(cè)ISL對(duì)Hela細(xì)胞和原代細(xì)胞凋亡和周期的影響;4.通過caspase-3、8、9活性試劑盒測(cè)定ISL對(duì)Hela細(xì)胞半胱天冬酶活性的影響;5.應(yīng)用羅丹明123染色法檢測(cè)Hela細(xì)胞線粒體跨膜電位的變化;6.采用RT-PCR檢測(cè)ISL對(duì)BCL-2,P53,P21,HPV18-E6mRNA基因表達(dá)的影響。7.應(yīng)用免疫印跡技術(shù)檢測(cè)ISL對(duì)BCL-2,P53,P21蛋白的表達(dá)情況;結(jié)果:1.MTT檢測(cè)結(jié)果表明:不同濃度的ISL作用于Hela細(xì)胞和原代細(xì)胞24h,48h,72h具有體外增殖的抑制作用(P0.01);2.流式細(xì)胞儀檢測(cè):ISL誘導(dǎo)Hela細(xì)胞和原代細(xì)胞凋亡,與空白對(duì)照組相比有極顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01),且凋亡率呈濃度依賴性;隨著ISL濃度的增加,Hela細(xì)胞和原代細(xì)胞的S期細(xì)胞增多,Go/Gl期細(xì)胞減少,細(xì)胞周期阻滯在S期;3.Caspase-3、8、9的活性測(cè)定表明:各個(gè)濃度的ISL作用于Hela細(xì)胞與陰性對(duì)照組相比,Caspase-3、8、9的活性明顯增高,且隨著ISL濃度的增加,藥物促進(jìn)細(xì)胞凋亡(F=57.787、F=55.148、F=49.610.148,P0.01);4.羅丹明123熒光染色檢測(cè)結(jié)果:Hela細(xì)胞線粒體膜電位隨著藥物濃度上升反而下降(F=118.904,P0.01);5.RT-PCR結(jié)果:藥物劑量越增高HPV18-E6、BCL-2基因表達(dá)越下降(F=245.905、F=95.718,P0.01),P53、p21mRNA基因表達(dá)越升高(F=28.158、F=24.374,P0.01)。6.Western-blot法檢測(cè)表明ISL促使BCL-2蛋白表達(dá)水平降調(diào),P53、P21蛋白表達(dá)水平上調(diào),與對(duì)照組有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);結(jié)論:1.異甘草素對(duì)人宮頸癌Hela細(xì)胞和原代細(xì)胞的增殖有較強(qiáng)的抑制作用,且呈一定的劑量和時(shí)間依賴性。2.異甘草素能使宮頸癌HeLa細(xì)胞和原代細(xì)胞誘導(dǎo)并促進(jìn)凋亡,細(xì)胞凋亡率呈一定的劑量依賴性;且能使周期阻滯于S期。3.異甘草素能激活宮頸癌HeLa細(xì)胞線粒體膜電位及半胱天冬酶凋亡途徑。4.異甘草素誘導(dǎo)Hela細(xì)胞的凋亡,其機(jī)制是通過下調(diào)HPV18-E6、BCL-2的表達(dá)和上調(diào)P21、P53基因的表達(dá)來實(shí)現(xiàn)的。
【關(guān)鍵詞】：異甘草素 人宮頸癌細(xì)胞 半胱天冬酶 作用機(jī)制
【學(xué)位授予單位】：新疆醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.33
【目錄】：

• 中英文縮略詞對(duì)照表5-8
• 摘要8-10
• ABSTRACT10-12
• 前言12-15
• 內(nèi)容與方法15-32
• 1. 研究對(duì)象15-16
• 2. 實(shí)驗(yàn)方法16-30
• 3. 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理30-31
• 4. 技術(shù)路線31-32
• 結(jié)果32-48
• 討論48-51
• 小結(jié)51-52
• 致謝52-53
• 參考文獻(xiàn)53-56
• 綜述56-62
• 參考文獻(xiàn)60-62
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)位論文62-63
• 導(dǎo)師評(píng)閱表63

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本文編號(hào)：350331