本文關(guān)鍵詞：白藜蘆醇影響核仁功能及其分子機(jī)制的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究目的初步探討白藜蘆醇(resveratrol,簡稱Res)對核仁功能的影響和其如何通過PI3K/Akt這個信號通路來影響核仁功能的。方法和結(jié)果1.通過MTT、細(xì)胞克隆形成和DAPI染色技術(shù)檢測Res對細(xì)胞增殖率、克隆形成和細(xì)胞凋亡的影響,結(jié)果表明100μmol/L的Res作用48h即可以抑制HeLa細(xì)胞的增殖和克隆形成,并在400μmol/L及其以上濃度時完全抑制HeLa細(xì)胞的增殖和克隆形成。2.通過Luciferase Assay技術(shù)、CHIP技術(shù)和Realtime PCR技術(shù)檢測Res對HeLa細(xì)胞內(nèi)rDNA啟動子活性、HeLa細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子在rDNA上的富集倍數(shù)和pre-rRNA表達(dá)的影響,結(jié)果表明：Res作用3h后即可抑制HeLa細(xì)胞內(nèi)rDNA啟動子活性；Res作用12h后,隨著濃度的增加,轉(zhuǎn)錄因子UBF和RNA聚合酶I的亞基RPA194在rDNA上的富集倍數(shù)逐漸降低,換言之,即轉(zhuǎn)錄因子UBF和RNA聚合酶的亞基RPA194的活性降低；12h后對pre-rRNA的表達(dá)量相對不加藥組抑制率達(dá)70%左右,并呈現(xiàn)濃度和時間依賴趨勢。3.通過Western Blotting技術(shù)檢測Res對和PI3K/Akt信號通路上的主要成員的表達(dá)及活化情況,結(jié)果表明：隨著濃度的增加和作用時間的延長,HeLa細(xì)胞內(nèi)PI3K/Akt這個信號通路上主要成員UBF和Akt的表達(dá)無較大改變,但其活化水平顯著降低,并呈現(xiàn)濃度和時間依賴趨勢；與抑制劑PI3Kα、PI3Kβ和Ly294002抑制效果的結(jié)果比較表明：抑制劑PI3K a的抑制效果最好,這就說明PI3K/Akt信號通路上的,起主要作用的是啟始位點(diǎn)的PI3Kα亞型。4.通過Luciferase Assay技術(shù)、CHIP技術(shù)、Realtime PCR技術(shù)和Western Blotting技術(shù)檢測Res對PI3K α亞型活化后的HeLa細(xì)胞的影響,結(jié)果表明：Res可以抑制PI3K/Akt信號通路活化后rDNA啟動子的活性,降低RNA聚合酶I的亞基RPA194的活性,下調(diào)pre-rRNA的表達(dá),抑制PI3K/Akt這個信號通路上主要成員UBF和Akt的活化。結(jié)論Res能有效抑制HeLa細(xì)胞的增殖并促進(jìn)HeLa細(xì)胞的凋亡,降低rDNA啟動子的活性,降低轉(zhuǎn)錄因子UBF和RNA聚合酶I的亞基RPA194的活性,下調(diào)pre-rRNA的表達(dá)水平,降低PI3K/Akt信號通路中UBF與Akt的磷酸化水平,對完全活化的PI3K α亞型亦有明顯的抑制作用。
【關(guān)鍵詞】：HeLa Res PI3K/Akt PIK3CA
【學(xué)位授予單位】：廣州中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.33
【目錄】：

• 中文摘要3-4
• Abstract4-9
• 引言9-13
• 第一部分 白藜蘆醇對HeLa細(xì)胞的生長、增殖和凋亡影響13-21
• 1 材料13-14
• 1.1 試劑及耗材13
• 1.2 儀器13
• 1.3 實(shí)驗所用細(xì)胞系13
• 1.4 主要試劑和溶液的配制13-14
• 2 方法14-16
• 2.1 HeLa宮頸癌細(xì)胞株的培養(yǎng)14
• 2.2 細(xì)胞增殖率的測定(MTT比色法)即四甲基偶氮唑藍(lán)比色分析法測定14-15
• 2.3 細(xì)胞克隆形成試驗15
• 2.4 細(xì)胞凋亡實(shí)驗15-16
• 3 結(jié)果16-19
• 3.1 Res對HeLa細(xì)胞增殖的影響16-17
• 3.2 Res對HeLa細(xì)胞克隆形成的影響17-18
• 3.3 Res對HeLa細(xì)胞凋亡的影響18-19
• 4 討論19-21
• 第二部分 白藜蘆醇對核仁功能的影響21-29
• 1 材料21
• 1.1 主要試劑和耗材21
• 1.2 主要儀器21
• 1.3 主要溶液配制21
• 2 實(shí)驗方法21-24
• 2.1 熒光素酶檢測技術(shù)(Luciferase Assay)檢測HeLa細(xì)胞中核糖體DNA(rDNA)啟動子的活性21-22
• 2.2 染色質(zhì)免疫沉淀技術(shù)(Chromatin Immunoprecipitation,簡稱CHIP)檢測Res調(diào)控的轉(zhuǎn)錄因子UBF和RNA聚合酶I的亞基RPA194的活性22-23
• 2.3 Realtime-PCR檢測HeLa細(xì)胞中pre-rRNA的水平23-24
• 2.4 Realtime-PCR檢測血清刺激的HeLa細(xì)胞中pre-rRNA的水平24
• 3 結(jié)果24-27
• 3.1 Res對HeLa細(xì)胞內(nèi)rDNA啟動子活性的影響25
• 3.2 Res對HeLa細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子UBF和RNA聚合酶I的亞基RPA194活性的影響25-26
• 3.3 Res對HeLa細(xì)胞內(nèi)pre-rRNA表達(dá)量的影響26
• 3.4 Res對血清刺激的HeLa細(xì)胞的pre-rRNA的表達(dá)量的影響26-27
• 4 討論27-29
• 第三部分 白藜蘆醇調(diào)控PI3K/Akt信號通路中主要成員UBF和Akt的表達(dá)和活化29-37
• 1 材料29-30
• 1.1 主要試劑和耗材29
• 1.2 主要儀器29
• 1.3 主要溶液配制29-30
• 2 主要實(shí)驗方法30-33
• 2.1 Western Blotting技術(shù)檢測同一濃度的Res作用不同時間后,HeLa細(xì)胞中UBF和Akt的表達(dá)和活化情況30-31
• 2.2 Western Blotting技術(shù)檢測不同濃度的Res作用于HeLa細(xì)胞相同時間后,UBF和Akt的表達(dá)和活化情況31
• 2.3 Western Blotting技術(shù)檢測同一濃度的Res作用于饑餓24h后血清刺激不同時間的HeLa細(xì)胞后,UBF和Akt的表達(dá)和活化情況31-32
• 2.4 Western Blotting技術(shù)檢測不同濃度的Res作用于饑餓24h后血清刺激相同時間的HeLa細(xì)胞后,UBF和Akt的表達(dá)和活化情況32
• 2.5 Western Blotting技術(shù)檢測Res與抑制劑PI3K α、PI3K β、Ly294002分別作用于饑餓24h后血清刺激的HeLa細(xì)胞,UBF和Akt表達(dá)和活化情況32-33
• 3 結(jié)果33-36
• 3.1 Western Blotting技術(shù)檢測同一濃度的Res作用不同時間后,HeLa細(xì)胞中UBF和Akt的表達(dá)和活化情況33
• 3.2 Western Blotting技術(shù)檢測不同濃度的Res作用于HeLa細(xì)胞相同時間后,UBF和Akt的表達(dá)和活化情況33-34
• 3.3 Western Blotting技術(shù)檢測同一濃度的Res作用于饑餓24h后血清刺激不同時間的HeLa細(xì)胞后,UBF和Akt的表達(dá)和活化情況34
• 3.4 Western Blotting技術(shù)檢測不同濃度的Res作用于饑餓24h后血清刺激3h的HeLa細(xì)胞中UBF和Akt的表達(dá)和活化情況34-35
• 3.5 Western Blotting技術(shù)檢測Res與抑制劑PI3K α、PI3K β、Ly294002分別作用于饑餓24h后血清刺激不同時間的HeLa細(xì)胞內(nèi)UBF和Akt表達(dá)和活化情況35-36
• 4 討論36-37
• 第四部分 白藜蘆醇對完全活化的PBaBe Puro HAPIK3 CA(簡稱PIK3CA)質(zhì)�；钚缘挠绊�37-42
• 1 材料37
• 1.1 主要試劑和耗材37
• 1.2 主要儀器37
• 1.3 主要溶液配制37
• 2 主要實(shí)驗方法37-39
• 2.1 Luciferase Assay檢測轉(zhuǎn)染了PIK3CA質(zhì)粒后的HeLa細(xì)胞中rDNA啟動子的活性37
• 2.2 CHIP檢測Res調(diào)控轉(zhuǎn)染了PIK3CA質(zhì)粒后的HeLa細(xì)胞中RPA194的活性37-38
• 2.3 Realtime-PCR檢測轉(zhuǎn)染了PIK3CA質(zhì)粒的HeLa細(xì)胞中pre-rRNA的水平38
• 2.4 Western Blotting技術(shù)檢測轉(zhuǎn)染了PIK3CA質(zhì)粒的HeLa細(xì)胞中UBF和Akt的表達(dá)及其活化水平38-39
• 3 結(jié)果39-41
• 3.1 Luciferase Assay檢測轉(zhuǎn)染了PIK3CA質(zhì)粒后的HeLa細(xì)胞中rDNA啟動子的活性39
• 3.2 Chromatin Immunoprecipitation(CHIP)檢測Res調(diào)控RNA聚合酶I亞基RPA194的活性39-40
• 3.3 Realtime-PCR檢測轉(zhuǎn)染了PIK3CA質(zhì)粒的HeLa細(xì)胞中pre-rRNA的水平40
• 3.4 Western Blotting技術(shù)檢測轉(zhuǎn)染了PIK3CA質(zhì)粒的HeLa細(xì)胞中UBF和Akt的表達(dá)及其活化水平40-41
• 4 討論41-42
• 結(jié)語42-44
• 參考文獻(xiàn)44-47
• 附錄47-63
• 致謝63

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 丁志山，沃興德;細(xì)胞調(diào)亡與動脈粥樣硬化[J];中國動脈硬化雜志;1998年01期

2 李妍;紀(jì)朋艷;張巍;彭順利;呂士杰;;柴胡皂苷d對SH-SY5Y細(xì)胞ERK蛋白表達(dá)及凋亡的影響[J];中國醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2013年12期

3 嚴(yán)銀芳,陳曉,楊小清,閆遠(yuǎn)芳;流行性腮腺炎病毒減毒株S_(79)在幾株腫瘤細(xì)胞和正常細(xì)胞中增殖的比較研究[J];腫瘤;2003年06期

4 劉功讓;管培中;宋淑亮;逯素梅;馮玉新;辛華;;絞股藍(lán)多糖對四氯化碳損傷HepG2細(xì)胞的保護(hù)作用[J];山東醫(yī)藥;2007年31期

5 肖東杰,汪運(yùn)山;B細(xì)胞被動凋亡的研究進(jìn)展[J];國外醫(yī)學(xué)(臨床生物化學(xué)與檢驗學(xué)分冊);1998年05期

6 張運(yùn)濤,劉凡,姜茹,谷仲平,汪涌,張順,劉榮福,李玉梅;外源性p27與GRC-1細(xì)胞端粒酶活性及細(xì)胞凋亡關(guān)系的實(shí)驗研究[J];中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志;2002年09期

7 石和元;王平;胡永年;邱幸凡;田代志;;溫膽湯改良方對Aβ_(25-35)誘導(dǎo)AD細(xì)胞模型bcl-2、bax蛋白表達(dá)的影響[J];世界科學(xué)技術(shù);2005年06期

8 孟威宏;王強(qiáng);王虹蛟;顏煒群;;牛胰蛋白酶抑制劑研究進(jìn)展[J];國外醫(yī)學(xué)(老年醫(yī)學(xué)分冊);2008年04期

9 鐘民濤;王曉麗;李星云;劉磊;劉穎麗;張偉;黃敏;;香菇C91-3菌絲發(fā)酵蛋白對H22腫瘤細(xì)胞體內(nèi)外抗腫瘤機(jī)制的初探[J];中國微生態(tài)學(xué)雜志;2011年09期

10 張晨,黃世林,馬東初,孫英慧,馬小鋒;硫化砷誘導(dǎo)NB_4細(xì)胞調(diào)亡[J];白血病;2000年06期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 鄒萍;;血液系統(tǒng)惡性腫瘤細(xì)胞來源膜微粒的特征及生物學(xué)作用研究[A];第13屆全國實(shí)驗血液學(xué)會議論文摘要[C];2011年

2 蔣爭凡;卞婕;翟中和;;非細(xì)胞體系誘導(dǎo)小鼠肝細(xì)胞核凋亡的超微觀察[A];第十次全國電子顯微學(xué)會議論文集（Ⅰ）[C];1998年

3 陳衛(wèi)銀;祝彼得;劉福友;馮雪梅;;參芎滴丸對急性腦梗死模型大鼠神經(jīng)細(xì)胞調(diào)亡的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會第十三次全國神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2010年

4 謝晶日;李威;梁國英;楊豐源;;胃靈顆粒對胃癌前病變細(xì)胞調(diào)亡基因影響的實(shí)驗研究[A];中華中醫(yī)藥學(xué)會脾胃病分會第十八次學(xué)術(shù)交流會論文匯編[C];2006年

5 綦淑芬;萬瑞香;姚如勇;;扇貝多肽對Hela細(xì)胞在紫外線損傷下的保護(hù)作用[A];第五屆全國自由基生物學(xué)與自由基醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)討論會論文摘要匯編[C];2000年

6 吳李君;裴蓓;王順昌;王軍;湯明禮;;砷和鎘暴露誘導(dǎo)秀麗小桿線蟲生殖腺細(xì)胞調(diào)亡及其信號通路研究[A];中國毒理學(xué)會第二屆全國中青年學(xué)者科技論壇會議論文集[C];2007年

7 余珂;王敬賢;周炳升;;多溴聯(lián)苯醚誘導(dǎo)人神經(jīng)SK-N-SH細(xì)胞調(diào)亡的機(jī)理[A];湖北省暨武漢市生物化學(xué)與分子生物學(xué)學(xué)會第八屆第十七次學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2007年

8 崔承彬;閆少羽;蔡兵;趙慶春;姚新生;曲戈霞;;黑果黃皮Clausena dunniana Levl中咔唑生物堿類新細(xì)胞周期抑制劑及細(xì)胞調(diào)亡誘導(dǎo)劑的核磁共振研究[A];第十一屆全國波譜學(xué)學(xué)術(shù)會議論文摘要集[C];2000年

9 冉新澤;鄭懷恩;王艾平;王鋒超;韓京;;他汀對內(nèi)皮細(xì)胞輻射損傷組織因子與細(xì)胞調(diào)亡的影響[A];中國毒理學(xué)會放射毒理專業(yè)委員會第七次、中國毒理學(xué)會免疫毒理專業(yè)委員會第五次、中國環(huán)境誘變劑學(xué)會致突專業(yè)委員會第二次、中國環(huán)境誘變劑學(xué)會致畸專業(yè)委員會第二次、中國環(huán)境誘變劑學(xué)會致癌專業(yè)委員會第二次全國學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2008年

10 吳耀輝;鄒萍;;Sunrivin基因沉默對K562細(xì)胞調(diào)亡影響的研究[A];第11次中國實(shí)驗血液學(xué)會議論文匯編[C];2007年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 張?zhí)锟?細(xì)胞調(diào)亡的意義[N];中國人口報;2002年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 朱海燕;熱休克蛋白60在凋亡細(xì)胞和大腸桿菌的表面表達(dá)及意義研究[D];復(fù)旦大學(xué);2012年

2 劉瀾濤;輻射誘導(dǎo)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞表型改變及其分子調(diào)節(jié)機(jī)制的初步研究[D];中國疾病預(yù)防控制中心;2013年

3 呂志遠(yuǎn);上皮細(xì)胞凋亡過程中細(xì)胞自我分子標(biāo)志CD47在細(xì)胞表面分布狀態(tài)變化機(jī)制的研究[D];南京大學(xué);2012年

4 秦勇;細(xì)胞內(nèi)ROS水平改變對細(xì)胞活性及相關(guān)信號傳導(dǎo)途徑的影響[D];浙江大學(xué);2012年

5 王鵬;RING結(jié)構(gòu)泛素連接酶RNF186的功能研究[D];中國科學(xué)技術(shù)大學(xué);2013年

6 武當(dāng);γδT細(xì)胞在結(jié)腸癌過繼免疫治療中的作用及機(jī)制研究[D];浙江大學(xué);2015年

7 龔平生;RNA干擾survivin基因表達(dá)增強(qiáng)HeLa細(xì)胞電離輻射敏感性的實(shí)驗研究[D];吉林大學(xué);2008年

8 李覃;微囊藻毒素LR刺激HEK293細(xì)胞產(chǎn)生的PP2A調(diào)節(jié)機(jī)制及其對細(xì)胞凋亡命運(yùn)的影響[D];浙江大學(xué);2013年

9 畢嘉成;NK細(xì)胞抑制性受體TIGIT的功能研究[D];中國科學(xué)技術(shù)大學(xué);2014年

10 王明明;AT細(xì)胞輻射敏感性的研究[D];蘇州大學(xué);2004年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 黃風(fēng)迎;細(xì)胞松馳素D聚乙二醇脂質(zhì)體抗腫瘤作用實(shí)驗研究[D];海南大學(xué);2012年

2 楊超;雞NK細(xì)胞的分離鑒定及靶細(xì)胞篩選[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2014年

3 陳晶晶;TIP30感受細(xì)胞氧化應(yīng)激誘導(dǎo)p53依賴的細(xì)胞凋亡機(jī)制研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2008年

4 李詠;蘋果酸、γ-氨基丁酸對Hela細(xì)胞端粒酶活性影響的研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2005年

5 余志堅;P糖蛋白對MCF-7/ADR細(xì)胞輻射敏感性負(fù)調(diào)控機(jī)制的初步研究[D];中國人民解放軍第一軍醫(yī)大學(xué);2003年

6 孫毅;亞硒酸鈉抑制K562細(xì)胞的生長及誘導(dǎo)其凋亡的探討[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2007年

7 聶建增;家蠅蛹凝集素對HepG2細(xì)胞的抗腫瘤作用及機(jī)理研究[D];天津科技大學(xué);2012年

8 吳云霞;光動力學(xué)療法誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡機(jī)制的初步研究[D];華南師范大學(xué);2005年

9 彭坤;二甲基亞砜抑制培養(yǎng)的人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞增殖的實(shí)驗研究[D];武漢大學(xué);2004年

10 殷楚云;急性單核細(xì)胞白血病細(xì)胞系THP-1側(cè)群細(xì)胞的分選、鑒定與富集[D];鄭州大學(xué);2012年

  本文關(guān)鍵詞：白藜蘆醇影響核仁功能及其分子機(jī)制的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

，

本文編號：341215