為了考察ARRDC3在子癇前期發(fā)生過程中的可能作用,以及其對滋養(yǎng)層細胞侵襲的調(diào)控作用及機制。本研究通過RT-PCT、Western Blotting和免疫組化檢測了20例嚴重子癇前期患者和20例正常妊娠婦女的胎盤組織中ARRDC3的表達,并檢測了脂多糖（LPS）誘導的子癇前期大鼠胎盤和滋養(yǎng)層細胞系HTR-8/SVneo中的ARRDC3表達。使用過表達ARRDC3的pcDNA3.1-HA質(zhì)�；虬邢駻RRDC3的siRNA轉(zhuǎn)染HTR-8/SVneo細胞,通過Transwell實驗考察了ARRDC3對細胞侵襲能力的影響。使用RT-PCT或Western Blotting檢測細胞中JunB、FosB、NF-κBp65、MMP-2和TIMP-2的表達。結(jié)果顯示,ARRDC3在重度子癇前期患者胎盤中的表達水平明顯高于正常胎盤（p<0.05）。LPS處理上調(diào)了子癇前期大鼠胎盤和HTR-8/SVneo細胞中的ARRDC3表達（p<0.05）。過表達ARRDC3抑制了HTR-8/SVneo細胞的侵襲能力,下調(diào)了MMP-2的表達并上調(diào)了TIMP-2的表達（p<0.05）。下調(diào)ARRDC3... 

【文章來源】：基因組學與應用生物學. 2020,39(07)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：8 頁

【部分圖文】：

ARRDC3在正常胎盤和重度子癇前期胎盤中的表達

為了研究ARRDC3是否參與滋養(yǎng)層細胞內(nèi)LPS誘導的先天性免疫激活，本研究觀察了LPS刺激后HTR-8/SVneo細胞中ARRDC3的表達變化。q RT-PCR和Western Blotting檢測結(jié)果顯示，LPS刺激后，ARRDC3的m RNA和蛋白水平以時間依賴性方式升高(圖3A),HTR-8/SVneo細胞中ARRDC3的m RNA和蛋白水平也以LPS濃度依賴性方式升高(圖3B)。1.4 ARRDC3的過表達抑制滋養(yǎng)層細胞的侵襲能力

滋養(yǎng)細胞侵襲在子宮螺旋動脈重塑中至關(guān)重要。為了評估ARRDC3在此過程中的作用，使用Transwell侵襲實驗分析了ARRDC3對HTR-8/SV-neo細胞侵襲的影響。結(jié)果顯示，與NC-pc DNA3.1組相比，轉(zhuǎn)染過表達ARRDC3的pc DNA3.1-HA質(zhì)粒(ARRDC3-pc DNA3.1組)顯著增加了ARRDC3的表達，并降低了HTR-8/SVneo細胞的侵襲能力。為了深入了解ARRDC3如何調(diào)節(jié)滋養(yǎng)細胞的侵襲，本研究通過轉(zhuǎn)染靶向ARRDC3的si RNA (si-ARRDC3組)敲低了HTR-8/SVneo細胞中內(nèi)源性ARRDC3的表達。結(jié)果顯示，與si-NC組細胞相比，si-ARRDC3組細胞的侵襲能力顯著提高(圖4;圖5)。MMP-2是參與細胞通過細胞外基質(zhì)侵襲的重要金屬蛋白酶，是胎盤形成過程中的重要因素(Espino et al.,2017)。為了進一步考察ARRDC3的作用，本研究檢測了TIMP-2的表達水平(MMP-2的內(nèi)源性抑制劑)，發(fā)現(xiàn)ARRDC3過表達增加了HTR-8/SVneo細胞中TIMP-2的表達并降低了MMP-2/TIMP-2的比例。此外，轉(zhuǎn)染ARRDC3 si RNA增加了HTR-8/SVneo細胞中MMP-2的表達并降低了TIMP-2的表達(圖6)。這些結(jié)果表明，ARRDC3通過破壞MMP-2和TIMP-2之間的平衡來損害滋養(yǎng)細胞的侵襲。


本文編號：3409682