本文關鍵詞：microRNA-145抑制卵巢癌細胞增殖的動物實驗，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究目的：通過建立穩(wěn)定表達miR-145的卵巢癌細胞系(SKOV3-miRl 45-CMV-RFP),進行裸鼠移植瘤實驗。探討microRNA-145對卵巢癌細胞體內(nèi)增殖的影響。研究方法：建立miR-145-CMV-RFP-SKOV3穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞系。設計miR-145shRNA引物序列,合成序列,與載體連接,慢病毒包裝,慢病毒感染SKOV3細胞和篩選穩(wěn)定細胞系的感染SKOV3細胞。驗證其融合程度,使SKOV3細胞穩(wěn)定表達miR-145。建立裸鼠皮下移植瘤模型。將裸鼠隨機分為SK-OV-3組、SK-OV-3-rfp組SK-OV-3-rfp-shRNA組。每只裸鼠背部皮下注射0.1 mL的細胞懸液,接種后觀察成瘤情況。成瘤后,每3天用游標卡尺測量一次腫瘤的長徑和寬徑,按照體積計算公式計算瘤體積并繪制腫瘤生長曲線。根據(jù)腫瘤生長情況,30天后稱量裸鼠體重,之后脫頸處死,并完整剝離各組皮下腫瘤,分別拍照記錄腫瘤大小。摘取腫瘤組織,采用Western Blot檢測腫瘤組織中MUC1蛋白表達水平。實驗結果：1.成功構建miR-145-CMV-RFP-SKOV3穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞系,驗證其融合程度：LvX-MOCK-CMV-RFP感染SKOV3細胞,融合度達到90%以上,LvX-miR-145-CMV-RFP感染SKOV3細胞,融合度達到90%以上。使SKOV3細胞能穩(wěn)定表達mi R-145。2. miR-145-CMV-RFP-SKOV3對裸鼠體內(nèi)SKOV3細胞移植瘤的抗腫瘤作用。皮下接種細胞后觀察裸鼠成瘤大小,計算腫瘤體積大小,每三天測量一次,繪制腫瘤生長曲線。與SK-OV-3組比較,接種細胞懸液SK-OV-3-rfp-shRNA組裸鼠腫瘤生長速度緩慢并且腫瘤體積明顯減小(P0.01)。與SK-OV-3組比較,SK-OV-3-rfp組裸鼠腫瘤體積減小,但無統(tǒng)計學差異(P0.05)。Western Blot檢測結果表明：與SK-OV-3組比較,SK-OV-3-rfp-shRNA組裸鼠腫瘤組織中的MUC1蛋白表達量明顯下調(diào)(P0.01)。與SK-OV-3組比較,SK-OV-3-rfp組裸鼠腫瘤組織中的MUC1表達量無明顯變化(P0.05),結果表明, miR-145可能通過下調(diào)MUC1的表達來抑制卵巢癌SK-OV-3細胞的增殖。結論：miR-145-CMV-RFP-SKOV3對裸鼠體內(nèi)SKOV3細胞增殖有明顯的抑制作用,可能與通過下調(diào)MUC1蛋白表達有關。
【關鍵詞】：卵巢癌 裸鼠 增殖 microRNA-145 MUC1
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R737.31
【目錄】：

• 前言4-5
• 中文摘要5-7
• Abstract7-11
• 第1章 引言11-12
• 第2章 綜述12-18
• 2.1 MICRORNAs及MIR-145的生物學功能與結構特征12-14
• 2.2 MIR-145的抑制腫瘤的作用14
• 2.3 MIR-145與卵巢癌的關系14-15
• 2.4 MIR-145與宮頸癌的關系15-16
• 2.5 MIR-145與子宮內(nèi)膜癌的關系16-17
• 2.6 展望17-18
• 第3章 實驗材料與方法18-31
• 3.1 材料18-23
• 3.1.1 實驗動物18
• 3.1.2 主要試劑及儀器18-23
• 3.2 實驗方法23-31
• 3.2.1 細胞培養(yǎng)23
• 3.2.2 細胞轉(zhuǎn)染23-27
• 3.2.3 裸鼠皮下移植瘤模型的建立27-28
• 3.2.4 Western Blot檢測腫瘤組織中MUC1的蛋白表達水平28-30
• 3.2.5 統(tǒng)計方法30-31
• 第4章 結果31-34
• 4.1 MIR-145-CMV-RFP-SKOV3穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞系的建立31
• 4.2 MIR-145-CMV-RFP-SKOV3對裸鼠體內(nèi)SKOV3細胞移植瘤的抗腫瘤作用31-32
• 4.3 WENSTERN BLOT檢測裸鼠腫瘤組織中的MUC1蛋白表達水平32-34
• 第5章 討論34-39
• 第6章 結論39-40
• 參考文獻40-50
• 作者簡介及在學期間所取得的科研成果50-51
• 致謝51

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