本文關(guān)鍵詞：KLK4在子宮內(nèi)膜腺癌中的表達(dá)和對RL95-2細(xì)胞侵襲的影響研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景子宮內(nèi)膜癌是女性生殖系統(tǒng)常見的惡性腫瘤之一,近年來發(fā)病率呈上升趨勢,由于癥狀出現(xiàn)較早,大多數(shù)患者能夠早期診斷,經(jīng)過手術(shù)治療后整體預(yù)后較好,但仍有部分患者出現(xiàn)手術(shù)后腫瘤復(fù)發(fā)或早期轉(zhuǎn)移,成為這部分患者預(yù)后較差的主要原因。目前已發(fā)現(xiàn)諸多和子宮內(nèi)膜癌預(yù)后相關(guān)的分子標(biāo)志物,如PTEN、P53、Ki67、K-ras等,但在臨床上的應(yīng)用仍有很多局限性。人組織激肽釋放酶(Kallikrein,KLK)屬于絲氨酸蛋白酶家族,由KLK1-15構(gòu)成,近年來發(fā)現(xiàn)KLK家族的成員涉及腫瘤的增殖、侵襲、耐藥等多方面功能。KLK4是近些年KLK家族中研究較熱的分子,其獨特之處在于KLK4表達(dá)于細(xì)胞核,而其他的KLK家族成員表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)。已發(fā)現(xiàn)KLK4在前列腺癌、卵巢癌、乳腺癌中呈高表達(dá),且能促進(jìn)前列腺癌細(xì)胞的增殖和卵巢癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移,機(jī)制研究表明KLK4能調(diào)節(jié)細(xì)胞周期蛋白的表達(dá),促進(jìn)腫瘤細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化,且KLK4的表達(dá)受性激素的調(diào)節(jié)。目前已有報道KLK4在子宮內(nèi)膜癌中高表達(dá),但具體的作用和機(jī)制未知。子宮內(nèi)膜癌是典型的激素依賴性腫瘤,基于KLK4在前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌中的作用,我們考慮KLK4在子宮內(nèi)膜癌中也可能存在一定作用。在本實驗中,我們分別從KLK4在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)和臨床病理參數(shù)及預(yù)后之間的關(guān)系,對子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞功能的影響及可能的機(jī)制等幾個層面做了探討。第一部分KLK4在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)及臨床意義目的探討KLK4在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)及臨床意義,為改善子宮內(nèi)膜癌的預(yù)后提供新的思路。方法免疫組化法檢測81例子宮內(nèi)膜癌、30例不典型增生的子宮內(nèi)膜和30例正常子宮內(nèi)膜中KLK4的表達(dá)情況,收集患者臨床病理資料,結(jié)合隨訪資料做生存分析,得出KLK4的表達(dá)和子宮內(nèi)膜癌預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果KLK4主要定位在細(xì)胞核,在正常內(nèi)膜、不典型增生內(nèi)膜和子宮內(nèi)膜癌中的高表達(dá)率分別為30%、53%、67%,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.002);KLK4的高表達(dá)和子宮內(nèi)膜癌的分化程度及深肌層浸潤相關(guān)(P=0.021,P=0.031),與年齡、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān);KLK4高表達(dá)組的5年無進(jìn)展生存率較低表達(dá)組更低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.032)。結(jié)論KLK4的高表達(dá)可能與子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的分化程度和局部侵襲有關(guān),高表達(dá)提示早期復(fù)發(fā),有可能作為預(yù)測子宮內(nèi)膜癌早期復(fù)發(fā)的標(biāo)志物。第二部分KLK4在子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞中的表達(dá)和雌激素對KLK4的調(diào)節(jié)作用目的探討KLK4在子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞中的表達(dá)情況及雌激素對KLK4表達(dá)的影響方法Real-time PCR及Western blot檢測KLK4 m RNA及蛋白在Ishikawa、HEC-1B及RL95-2細(xì)胞中的表達(dá)。用不含雌激素的培養(yǎng)基培養(yǎng)Ishkawa細(xì)胞,分別加入10-10mol/L、10-8mol/L及10-6mol/L的17-β雌二醇培養(yǎng),分別在24h、48h、72h檢測KLK4 m RNA及蛋白的表達(dá)量。再以最佳作用濃度的雌激素聯(lián)合10-9mol/L、10-7mol/L及10-5mol/L的雌激素受體拮抗劑ICI182,780作用于Ishkawa細(xì)胞,觀察雌激素受體拮抗劑對KLK4表達(dá)的影響。結(jié)果KLK4在子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞中的表達(dá)強(qiáng)度由高到低依次為HEC-1B、Ishikawa、RL95-2。雌激素能促進(jìn)Ishkawa細(xì)胞中KLK4的表達(dá),以10-8mol/L作用48h最明顯。ICI182,780能阻斷雌激素對KLK4表達(dá)的上調(diào)作用,當(dāng)濃度為10-7mol/L時阻斷效果最明顯。結(jié)論雌激素能夠上調(diào)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞中KLK4的表達(dá),雌激素受體拮抗劑能阻斷雌激素對KLK4表達(dá)的上調(diào)作用。推測雌激素能夠通過雌激素受體促進(jìn)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞中KLK4的表達(dá)。第三部分過表達(dá)KLK4對子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞功能的影響目的探討KLK4在子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞中可能存在的作用。方法以pc DNA3.1(+)為載體構(gòu)建KLK4過表達(dá)質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染至KLK4低表達(dá)的RL95-2細(xì)胞,通過G418連續(xù)篩選獲得穩(wěn)定過表達(dá)KLK4的RL95-2細(xì)胞。MTT法檢測過表達(dá)KLK4對RL95-2細(xì)胞增殖的影響,劃痕實驗及transwell侵襲實驗檢測過表達(dá)KLK4對RL95-2細(xì)胞體外遷移及侵襲能力的影響。結(jié)果成功構(gòu)建KLK4的過表達(dá)質(zhì)粒并建立穩(wěn)定過表達(dá)KLK4的細(xì)胞系。MTT實驗顯示過表達(dá)KLK4不能促進(jìn)RL95-2細(xì)胞的增殖,但劃痕實驗及transwell侵襲實驗顯示其體外遷移和侵襲能力較對照組明顯增加。結(jié)論KLK4過表達(dá)能促進(jìn)RL95-2細(xì)胞的體外遷移及侵襲能力,但不能促進(jìn)其增殖。第四部分過表達(dá)KLK4促進(jìn)RL95-2細(xì)胞侵襲機(jī)制的初步研究目的初步探討過表達(dá)KLK4促進(jìn)RL95-2細(xì)胞體外侵襲的可能機(jī)制。方法Real-time PCR、Western blot及免疫熒光檢測過表達(dá)KLK4后e-cadherin m RNA及蛋白的表達(dá)變化。構(gòu)建e-cadherin的過表達(dá)質(zhì)粒,瞬時轉(zhuǎn)染入穩(wěn)定過表達(dá)KLK4的RL95-2細(xì)胞,觀察e-cadherin表達(dá)及細(xì)胞體外侵襲能力的變化。結(jié)果過表達(dá)KLK4的RL95-2細(xì)胞中e-cadherin表達(dá)水平較空白組和對照組明顯下降,過表達(dá)e-cadherin可使KLK4過表達(dá)介導(dǎo)的侵襲作用下降。結(jié)論KLK4可能是e-cadherin的抑制因子,通過抑制e-cadherin表達(dá)促進(jìn)RL95-2細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移。
【關(guān)鍵詞】：子宮內(nèi)膜癌 人組織激肽釋放酶4 生存分析 雌激素 過表達(dá) 侵襲 轉(zhuǎn)移 上皮細(xì)胞鈣黏蛋白
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.33
【目錄】：

• 縮略語表5-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 前言13-14
• 文獻(xiàn)回顧14-18
• 第一部分KLK4在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)及臨床意義18-25
• 1.材料18-19
• 2.方法19-20
• 3.結(jié)果20-23
• 4.討論23-25
• 第二部分KLK4在子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞中的表達(dá)及雌激素對KLK4表達(dá)的調(diào)節(jié)作用25-35
• 1.材料25-27
• 2.方法27-32
• 3.結(jié)果32-33
• 4.討論33-35
• 第三部分 過表達(dá)KLK4對RL95-2 細(xì)胞功能的影響35-48
• 1.材料35-36
• 2.方法36-42
• 3.結(jié)果42-46
• 4.討論46-48
• 第四部分 過表達(dá)KLK4促進(jìn)RL95-2 侵襲的機(jī)制初步研究48-54
• 1.材料48
• 2.方法48-49
• 3.結(jié)果49-52
• 4.討論52-54
• 小結(jié)54-55
• 參考文獻(xiàn)55-63
• 個人簡歷和研究成果63-64
• 致謝64

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1 張千峰;KLK4在子宮內(nèi)膜腺癌中的表達(dá)和對RL95-2細(xì)胞侵襲的影響研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

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本文編號：340092