本文關(guān)鍵詞：塞來(lái)昔布誘導(dǎo)卵巢癌細(xì)胞發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的作用及其機(jī)制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景：卵巢癌是所有婦科惡性腫瘤中死亡率最高的疾病。上皮性卵巢癌(Epithelial Ovarian Cancer, EOC)患者占所有卵巢癌患者的90%[1]。由于多數(shù)上皮性卵巢癌在診斷時(shí)就已發(fā)展至晚期,即使聯(lián)合手術(shù)與先進(jìn)的化療藥物進(jìn)行治療,患者的五年生存率仍徘徊在30%左右[2]。上皮性卵巢癌患者高復(fù)發(fā)率和死亡率的主要原因是患者在診斷時(shí)就已經(jīng)發(fā)生轉(zhuǎn)移。網(wǎng)膜、腹膜、膈肌及腸系膜等處的轉(zhuǎn)移已被證實(shí)是卵巢癌患者的不良預(yù)后因素[3]。因此闡明卵巢癌發(fā)生侵襲轉(zhuǎn)移的機(jī)制在改善卵巢癌患者的診斷、治療及預(yù)后有著重要的意義。已有大量研究證實(shí),炎癥參與了癌癥的發(fā)生發(fā)展[4]。環(huán)氧化酶-2(Cyclooxygenase-2, COX-2)是一種在炎癥過(guò)程中誘導(dǎo)表達(dá)升高的酶,其主要作用是將花生四烯酸轉(zhuǎn)化為前列腺素[5]。同時(shí)環(huán)氧化酶-2在人類(lèi)上皮性癌癥的侵襲、轉(zhuǎn)移和上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(Epithelial-mesenchymal Transition, EMT)的發(fā)生中起關(guān)鍵作用[6-8]。這些研究均支持將選擇性環(huán)氧化酶-2抑制劑,非甾體類(lèi)抗炎藥塞來(lái)昔布(Celecoxib)用于癌癥的治療。體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)塞來(lái)昔布可以調(diào)控細(xì)胞周期,促進(jìn)細(xì)胞凋亡和抑制血管生成[9]。在非小細(xì)胞肺癌、結(jié)直腸癌、口腔黏膜癌前病變及上皮性卵巢癌的治療中,塞來(lái)昔布作為輔助用藥已經(jīng)進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段[10-13]。然而這些臨床試驗(yàn)并未證實(shí)塞來(lái)昔布可以改善癌癥患者的預(yù)后。盡管在一項(xiàng)針對(duì)45位復(fù)發(fā)性卵巢癌患者的臨床研究中患者對(duì)塞來(lái)昔布的治療反應(yīng)較好,但是在另一項(xiàng)151位卵巢癌患者的臨床研究中,塞來(lái)昔布聯(lián)合多西紫杉醇和卡鉑的治療并未改善患者的無(wú)病生存期和總生存率[13,14]�？梢�(jiàn)塞來(lái)昔布在卵巢癌的治療中存在爭(zhēng)議,其中的機(jī)制需要進(jìn)一步闡明。目的：1、研究塞來(lái)昔布作用于人卵巢癌細(xì)胞系A(chǔ)2780和SKOV3后對(duì)細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞增殖和細(xì)胞侵襲性的影響；2、研究塞來(lái)昔布對(duì)卵巢癌細(xì)胞發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的誘導(dǎo)作用,檢測(cè)塞來(lái)昔布作用前后上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)蛋白的表達(dá)水平；3、探討ZEB 1表達(dá)在塞來(lái)昔布誘導(dǎo)卵巢癌細(xì)胞發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的作用,研究塞來(lái)昔布誘導(dǎo)卵巢癌細(xì)胞發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的機(jī)制。方法：1、MTT法檢測(cè)不同濃度塞來(lái)昔布(0,5,10,15 μM)對(duì)A2780和SKOV3的生長(zhǎng)抑制作用；2、相差倒置顯微鏡觀(guān)察塞來(lái)昔布(10 μM)對(duì)A2780和SKOV3細(xì)胞形態(tài)的改變并拍攝照片；3、Transwell侵襲小室檢測(cè)塞來(lái)昔布(10 μM)對(duì)A2780和SKOV3細(xì)胞侵襲性的影響,在相差倒置顯微鏡下計(jì)數(shù)粘附于侵襲小室底部的細(xì)胞數(shù)；4、蛋白印跡法檢測(cè)塞來(lái)昔布(0,5,10,15 μM)作用前后A2780和SKOV3細(xì)胞中上皮表型E-cadherin和Keratin、間質(zhì)表型N-cadherin和Vimentin以及p-AKT、p-ERK和ZEB 1表達(dá)的變化；5、ZEB 1小干擾NRA (Small-interfering RNA, siRNA)作用于A2780和SKOV3細(xì)胞后再檢塞來(lái)昔布對(duì)細(xì)胞的侵襲能力的影響和上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的誘導(dǎo)作用。結(jié)果：1、塞來(lái)昔布對(duì)卵巢癌細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用的研究：應(yīng)用MTT法檢測(cè)不同濃度塞來(lái)昔布(0,5,10,15μM)作用于A2780和SKOV3細(xì)胞,48小時(shí)后檢測(cè)塞來(lái)昔布對(duì)細(xì)胞的增殖的抑制情況,結(jié)果顯示：與對(duì)照組相比,各濃度組均未對(duì)細(xì)胞的增殖有明顯的抑制作用(P··0.05)。2、塞來(lái)昔布對(duì)卵巢癌細(xì)胞形態(tài)影響的研究：應(yīng)用相差倒置顯微鏡觀(guān)察塞來(lái)昔布(10μM)對(duì)細(xì)胞形態(tài)的改變,結(jié)果顯示：A2780細(xì)胞的空白對(duì)照組細(xì)胞呈現(xiàn)較規(guī)則的小三角形的上皮細(xì)胞形態(tài),而實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞則出現(xiàn)伸長(zhǎng)呈現(xiàn)梭行改變；而本身形態(tài)就不規(guī)則的SKOV3細(xì)胞形態(tài)逐漸變得規(guī)則清晰,并伸展出較長(zhǎng)觸角。3、塞來(lái)昔布對(duì)卵巢癌細(xì)胞侵襲性影響的研究：應(yīng)用Transwell侵襲小室檢測(cè)塞來(lái)昔布(10μM)對(duì)A2780和SKOV3細(xì)胞侵襲性的改變,結(jié)果顯示：與對(duì)照組相比較,實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞的侵襲性明顯增加(P ≤ 0.001)。4、塞來(lái)昔布誘導(dǎo)卵巢癌細(xì)胞發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的機(jī)制的研究：應(yīng)用蛋白免疫印跡方法檢測(cè)塞來(lái)昔布(0,5,10,15gM)對(duì)A2780和SKOV3細(xì)胞上皮E-cadherin、Keratin和間質(zhì)表型N-cadherin、Vimentin以及p-AKT、p-ERK和ZEB1表達(dá)的影響,結(jié)果顯示：與對(duì)照組相比,實(shí)驗(yàn)組的_上皮表型E-cadherin和Keratin表達(dá)明顯降低,而間質(zhì)表型N-cadherin和Vimentin表達(dá)則明顯升高,并且隨著藥物濃度的增加表型表達(dá)變化越明顯；實(shí)驗(yàn)組p-AKT、p-ERK和ZEB1表達(dá)也隨著藥物濃度的增加逐漸增加。5、塞來(lái)昔布促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的作用機(jī)制的確認(rèn)：在加入塞來(lái)昔布前應(yīng)用ZEB1小干擾NRA (Small-interfering RNA, siRNA)預(yù)先干擾A2780和SKOV3細(xì)胞,結(jié)果顯示：干擾掉ZEB1的細(xì)胞再加入塞來(lái)昔布(10μM)并不能增加細(xì)胞的侵襲性,也不能使細(xì)胞的上皮及間質(zhì)的表型表達(dá)發(fā)生改變。結(jié)論：1.塞來(lái)昔布能夠誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生形態(tài)改變,使細(xì)胞逐漸變得細(xì)長(zhǎng)呈現(xiàn)出間質(zhì)樣細(xì)胞的形態(tài)；能夠明顯增加卵巢癌細(xì)胞的侵襲性；2.塞來(lái)昔布能夠明顯促進(jìn)人卵巢癌細(xì)胞發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化,且具有濃度依賴(lài)性；3.塞來(lái)昔布誘導(dǎo)人卵巢癌上皮細(xì)胞發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化是通過(guò)激活PI3K/AKT和MEK/ERK信號(hào)通路上調(diào)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子ZEB1表達(dá)的機(jī)制完成的。
【關(guān)鍵詞】：塞來(lái)昔布 卵巢癌 上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化 ZEB1
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R737.31
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• ABSTRACT9-12
• 符號(hào)說(shuō)明12-14
• 前言14-17
• 材料與方法17-30
• 結(jié)果30-33
• 討論33-36
• 結(jié)論36-37
• 附圖37-43
• 參考文獻(xiàn)43-50
• 致謝50-51
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文51-52
• 附件52

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本文編號(hào)：331647