本文關(guān)鍵詞：FOXM1介導(dǎo)17β-雌二醇對卵巢癌細(xì)胞增殖侵襲作用的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：上皮性卵巢惡性腫瘤(Ovarian malignant epithelial tumors),致死率多年來一直居?jì)D科惡性腫瘤之首,五年生存率始終徘徊在30%-40%。目前卵巢癌治療的標(biāo)準(zhǔn)方案是在腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)的基礎(chǔ)上施以鉑類藥物為主的聯(lián)合化療。隨著生活水平的提高及生活環(huán)境污染加劇,卵巢癌的發(fā)病率出現(xiàn)年輕化趨勢,雖然多數(shù)卵巢癌患者發(fā)生在絕經(jīng)后,但依然有40%左右的生育期患者因手術(shù)治療而導(dǎo)致人工絕經(jīng),這些年輕的生育期患者術(shù)后所面臨低雌激素引起的絕經(jīng)癥狀要比自然絕經(jīng)的婦女更為強(qiáng)烈,使患者在術(shù)后有限的生存期內(nèi)生活質(zhì)量嚴(yán)重下降,進(jìn)一步促進(jìn)了卵巢惡性腫瘤非癌癥死亡率。雖然,目前已有的臨床試驗(yàn)性治療的結(jié)果顯示,17β-雌二醇作為性激素藥物應(yīng)用于絕經(jīng)期綜合癥可獲得良好的臨床效果,但其在卵巢癌術(shù)后激素替代治療的安全性作用機(jī)制尚不明確。2013年美國婦產(chǎn)科醫(yī)師協(xié)會ACOG和中華醫(yī)學(xué)會婦產(chǎn)科學(xué)分會絕經(jīng)學(xué)組制定的指南中均指出HRT是維持圍絕經(jīng)期和絕經(jīng)后婦女健康策略的重要組成部分之一;人工絕經(jīng)者由于雌激素缺乏時間更長,HRT具有更多益處[13],MWS研究認(rèn)為激素補(bǔ)充治療時卵巢癌的風(fēng)險也會增加。故而是否可將17β-雌二醇作為輔助藥物常規(guī)運(yùn)用于生育期卵巢癌術(shù)后患者的臨床治療目前還沒有達(dá)成共識。近年來研究發(fā)現(xiàn),FOXM1轉(zhuǎn)錄因子存在于多種組織中,并且在多種腫瘤組織和細(xì)胞系中高表達(dá),包括卵巢癌。Fox M1轉(zhuǎn)錄因子在上皮性卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展中起到了重要作用,有文獻(xiàn)顯示Fox M1與ERα受體通路密切相關(guān),FOXM1與雌激素結(jié)合可能和卵巢腫瘤有關(guān),有望成為卵巢癌基因治療新的靶點(diǎn)。目的:本實(shí)驗(yàn)致力于研究雌激素對Fox M1高表達(dá)與ERα不同表達(dá)的卵巢癌細(xì)胞系的增殖生長作用的影響,并對可能機(jī)制進(jìn)行初步的探討。首先運(yùn)用了Western blot檢測方法檢測了卵巢癌細(xì)胞株A2780,SKOV3中ERα、FOXM1的表達(dá)情況,為進(jìn)一步探討ERα、FOXM1以及FOXM1阻斷劑硫鏈絲菌素在卵巢癌細(xì)胞株A2780,SKOV3體外生長中的作用及相關(guān)機(jī)制篩選出良好的細(xì)胞模型。嘗試探索17β-雌二醇體外誘導(dǎo)卵巢癌細(xì)胞生長可能存在的機(jī)制,為卵巢癌術(shù)后激素替代治療的安全性提供理論依據(jù)。方法:用含10%胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)、0.01%青霉素、鏈霉素以及25m M HEPES的RPMI1640培養(yǎng)液,在37℃,含飽和濕度5%C02的恒溫培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)人卵巢癌細(xì)胞株A2780,以及人卵巢漿液性囊腺癌細(xì)胞株SKOV3度,每日在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞密度以及細(xì)胞生長情況,每隔兩天換液一次,約每周需傳代一次,選取對數(shù)生長期的細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。各種操作均需在超凈臺中操作完成。1倒置顯微鏡:應(yīng)用倒置顯微鏡觀察A2780細(xì)胞以及SKOV3細(xì)胞的形態(tài)并拍照。2四甲基偶氮甲唑藍(lán)(MTS)法:對卵巢癌細(xì)胞系(SKOV3、A2780)進(jìn)行了不同濃度梯度(10-5M、10-7M、10-9M、10-10M、10-12M和10-14M、10-16M)的雌二醇作用不同時間(24h、48h、72h),以不加17β-雌二醇藥物含有10%胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基為空白對照組,以含有低于0.1%酒精濃度含有的10%胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基作為溶劑對照組。MTS法檢測17β-雌二醇對細(xì)胞生長的影響,篩選出藥物作用的最適濃度以及時間。3蛋白印跡法(Western blot)法:檢測A2780以及SKOV3細(xì)胞株中ER、FOXM1蛋白的表達(dá)水平以及不同濃度梯度的17β-雌二醇作用不同時間以后對A2780以及SKOV3細(xì)胞株中ER、FOXM1蛋白的表達(dá)水平影響情況。4創(chuàng)傷愈合實(shí)驗(yàn):常規(guī)培養(yǎng)A2780細(xì)胞以及SKOV3細(xì)胞使其融合形成單細(xì)胞層。用不含胎牛血清、無酚紅的RPMI1640培養(yǎng)基饑餓細(xì)胞24h使其同步化后,按照實(shí)驗(yàn)組給予不同干預(yù),在6孔培養(yǎng)板底部中央?yún)^(qū)域呈“一”字形劃痕,分別于給藥后0h、24h后在倒置顯微鏡(40X)下觀察照相,計(jì)算24h內(nèi)劃痕愈合的面積評估細(xì)胞的遷移能力。5 Transwell實(shí)驗(yàn):以10-10M、10-12M、10-14M的17β-雌二醇作用于SKOV3和A2780細(xì)胞,含有10%胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基為空白對照組。連續(xù)培養(yǎng)24h以后取出Transwell小室,使用95%的乙醇固定,用結(jié)晶紫染色,在倒置顯微鏡(200X)下計(jì)算移動到Transwell小室微孔膜下層的細(xì)胞并評估遷移與侵襲能力細(xì)胞數(shù)量及拍照。結(jié)果:1人卵巢癌細(xì)胞株A2780細(xì)胞及SKOV3細(xì)胞:倒置顯微鏡觀察卵巢癌細(xì)胞A2780、SKOV3生長狀態(tài)良好,A2780細(xì)胞形態(tài)為多角形透明,細(xì)胞鋪蓋良好,細(xì)胞橢圓形、圓形,細(xì)胞間連接緊密,SKOV3細(xì)胞呈現(xiàn)鋪路石狀排列,伴隨時間的推移,細(xì)胞接觸緊密,并且數(shù)量開始增加,為典型上皮樣細(xì)胞形態(tài)。2 Western blot檢測ERα在A2780中呈陰性表達(dá)(無表達(dá)),SKOV3細(xì)胞株中ERa呈陽性表達(dá),FOXM1在A2780、SKOV3細(xì)胞中均有表達(dá)。給予雌激素分別作用于A2780細(xì)胞與SKOV3細(xì)胞48h、72h,兩種細(xì)胞內(nèi)FOXM1表達(dá)量隨著時間的延長而隨之增加。3 MTS檢測17β-雌二醇作用于各組細(xì)胞24h、48h、72h后增殖能力,結(jié)果發(fā)現(xiàn),與對照組相比,A2780細(xì)胞株隨著時間延長與劑量濃度增加呈現(xiàn)增殖能力遞增現(xiàn)象。而在給予17β-雌二醇基礎(chǔ)上24h后加入FOXM1阻斷劑阻斷劑硫鏈絲菌素共同培養(yǎng)48h以后與對照組相比呈現(xiàn)增殖下降趨勢。SKOV3細(xì)胞株隨著時間延長與劑量濃度增加呈現(xiàn)一個增殖下降趨勢,使用高濃度或者給予低濃度17β-雌二醇以及FOXM1阻斷劑硫鏈絲菌素對SKOV3細(xì)胞株處理后表達(dá)對增殖無影響。17β-雌二醇濃度為10-5M、10-10M、10-12M、10-14M藥物作用時間為12~24h時,SKOV3細(xì)胞對藥物最為敏感,10-10M抑制細(xì)胞增殖的作用最強(qiáng);再加大藥物濃度或延長藥物作用時間不能明顯提高細(xì)胞的凋亡率。4劃痕實(shí)驗(yàn)及Transwell小室檢測腫瘤細(xì)胞遷移能力:結(jié)果發(fā)現(xiàn),與對照組相比,10-10M濃度E2作用于A2780細(xì)胞24h以后觀察結(jié)果顯示,給予17β-雌二醇刺激組劃痕愈合面積顯著小于對照組(49.32±3.12 VS 9.62)(P0.01);Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示處理組穿膜細(xì)胞個數(shù)明顯多于對照組(36±5 VS 16±3),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。結(jié)論:在A2780細(xì)胞中FOXM1可能介導(dǎo)了雌激素依賴的增殖作用。隨著雌激素濃度梯度增加對A2780細(xì)胞的的增殖作用呈濃度時間依賴性,增殖作用主要取決于17β-雌二醇的濃度和作用時間,隨著17β-雌二醇濃度增加和作用時間的延長,A2780細(xì)胞的增長率明顯升高。在SKOV3細(xì)胞中17β-雌二醇具有抑制細(xì)胞生長作用,抑制生長率隨著17β-雌二醇濃度增加和作用時間的延長而明顯。差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P0.01)。FOXM1的增殖作用可能不是通過ERα受體通路的介導(dǎo)。但是,FOXM1介導(dǎo)了17β-雌二醇刺激時A2780、SKOV3細(xì)胞的增殖;但FOXM1這一作用可以被FOXM1特異性阻斷劑硫鏈絲菌素所阻斷,因此,FOXM1可以促進(jìn)激素補(bǔ)充治療時對卵巢癌細(xì)胞的增殖,但是其功能作用取決于細(xì)胞的種類和特征,不同濃度雌激素對細(xì)胞的增殖作用不同,呈劑量時間依賴性,E2在ERα受體陽性的SKOV3卵巢癌細(xì)胞中安全性要比ERα陰性的A2780細(xì)胞中安全性更優(yōu)。
【關(guān)鍵詞】：卵巢癌 HRT FOXM1 硫鏈絲菌素 雌激素
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.31
【目錄】：

• 中文摘要4-8
• 英文摘要8-13
• 英文縮寫13-14
• 引言14-16
• 第一部分 雌激素對卵巢癌細(xì)胞株A2780、Skov3 體外生長的影響16-52
• 前言16-19
• 材料與方法19-31
• 結(jié)果31-34
• 附圖34-40
• 附表40-42
• 討論42-46
• 小結(jié)46
• 參考文獻(xiàn)46-52
• 第二部分 硫鏈絲菌素作用對A2780 SKOV3 細(xì)胞株增殖與凋亡的影響52-65
• 前言52-53
• 材料與方法53-55
• 結(jié)果55-57
• 附圖57-59
• 附表59-60
• 討論60-62
• 小結(jié)62
• 參考文獻(xiàn)62-65
• 結(jié)論65-66
• 綜述 FOXM1 在腫瘤中的作用66-80
• 參考文獻(xiàn)74-80
• 致謝80-82
• 個人簡歷82

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 丁景新,殷蓮華,金鴻雁,劉曉霞,堯良清,孫云燕,豐有吉;17β雌二醇對卵巢透明細(xì)胞癌ES-2細(xì)胞系侵襲力及Snail表達(dá)的影響[J];復(fù)旦學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2005年05期

  本文關(guān)鍵詞：FOXM1介導(dǎo)17β-雌二醇對卵巢癌細(xì)胞增殖侵襲作用的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：325564