背景:多囊卵巢綜合征最主要的特征之一是雄激素、雌激素合成異常。微小RNA（miRNA）是內(nèi)源性非編碼RNA,在多種生物過程中發(fā)揮重要作用。前期研究提示PCOS患者外周血清中miR-125b-5p表達(dá)明顯降低,但其調(diào)控卵泡激素生成的內(nèi)在分子機(jī)制尚不清楚。方法:檢測PCOS患者及健康對照組人群血清中的miR-125b-5p表達(dá)水平的差異。體外分離培養(yǎng)小鼠竇前卵泡,對miR-125b-5p抑制或過表達(dá)后檢測靶基因Pak3、ERK磷酸化水平、下游甾體激素合成酶以及睪酮、雌二醇的變化。通過熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn),驗(yàn)證miR-125b-5p和Pak3間的直接靶向調(diào)節(jié)。聯(lián)合應(yīng)用miR-125b-5p抑制劑及Pak3抑制劑,開展挽救試驗(yàn),同時(shí)檢測POCS患者及對照組卵巢組織中Pak3的表達(dá)水平,再次驗(yàn)證miR-125b-5p調(diào)節(jié)雄激素生成的分子機(jī)制。結(jié)果:miR-125b-5p在高雄激素PCOS患者血清中的表達(dá)水平顯著下降。在小鼠竇前卵泡中,抑制miR-125b-5p的表達(dá),雄激素合成相關(guān)基因如CYP17A1、CYP11A1的表達(dá)上調(diào)從而促進(jìn)雄激素的分泌,雌激素合成相關(guān)基因如CYP19A1、及雌激素的水... 

【文章來源】：南京醫(yī)科大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：46 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

miR-125b-5p在PCOS高雄激素血癥婦女血清中表達(dá)減少

圖 3.miR-125b-5p 通過靶向于 Pak3 的 3'UTR 負(fù)向調(diào)控 Pak3 的表達(dá)(A) 通過在線 miRNA 靶基因預(yù)測軟件，Pak3 3’UTR 包含 miR125b-5p 的結(jié)合位點(diǎn)。(B)轉(zhuǎn)染 miR125b-5p 抑制劑后檢測 Pak3 的 mRNA 水平。(C)轉(zhuǎn)染 miR125b-5p 抑制劑后檢測 Pak3 的蛋白水平。(D,E)轉(zhuǎn)染 miR125b-5p 類似物后檢測 Pak3 的 mRNA 及蛋白水平。(F)miR125b-5p 和 Pak3 的 3’UTR 的序列比對。Pak3 的突變型 3’UTR(下劃線標(biāo)記的 CCU)用來構(gòu)建突變型熒光報(bào)告載體。野生型和突變型 3’UTR 分別克隆至 pGL3 熒光素酶報(bào)告載體上。(G)熒光素酶報(bào)告分析顯示，過表達(dá) miR125b-5p 能抑制野生型 3’UTR組的熒光素酶活性，而不影響突變組的活性。*p<0.05。4、抑制 Pak3 的表達(dá)影響小鼠卵泡中激素合成相關(guān)基因的表達(dá)以及睪酮、雌二醇的分泌

南京醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文進(jìn)一步研究 Pak3 在卵泡中激素合成相關(guān)基因的表達(dá)以及睪酮、雌二醇的分泌中的作用。與如圖 4A 所示，與對照組相比，HA-PCOS 中 Pak3 的 mRNA 水平明顯增加，其蛋白水平呈現(xiàn)相同的趨勢(圖 4B)。，使用 Pak3 抑制劑處理卵泡，進(jìn)一步探討 Pak3 在卵泡類固醇激素合成中作用。結(jié)果顯示小鼠卵泡中 Pak3 抑制后，顯著降低了 LHCGR, CYP11A1 and CYP17A1 的表達(dá)，睪酮分泌減少(圖4C、E 和 F)；相反，雌激素相關(guān)基因以及雌二的分泌顯著增加(圖 4D、E 和 F)。因此，我們得出相關(guān)結(jié)論：Pak3 在卵泡激素合成中的作用與 mir-125b-5p 相反，促進(jìn)了睪酮的釋放同時(shí)減少雌二醇的產(chǎn)生。


本文編號：3127049