本文關(guān)鍵詞：羊膜載體對子宮內(nèi)膜細(xì)胞HGF、MMP-9、VEGF表達(dá)的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：近年來隨著人流、藥流手術(shù)及宮腔操作的增多,導(dǎo)致子宮內(nèi)膜基底部全部或部分缺損、變薄,使子宮前后壁粘連、宮腔閉鎖,宮腔容積減小,引起患者月經(jīng)改變和生育異常。因此,宮腔粘連已成為婦科常見病之一,并且成為不孕、流產(chǎn)、早產(chǎn)的一項(xiàng)重要原因�，F(xiàn)階段宮腔粘連尤其是重度粘連患者治愈率低下,手術(shù)分離后粘連易復(fù)發(fā),嚴(yán)重影響著廣大女性的身體及心理健康。因此宮腔粘連分離術(shù)后如何防止粘連復(fù)發(fā)、促進(jìn)子宮內(nèi)膜生長的治療是臨床工作的一大難題。目前,宮腔鏡下宮腔粘連切除術(shù)(TCRA)是宮腔粘連治療的標(biāo)準(zhǔn)術(shù)式,術(shù)后放置宮內(nèi)節(jié)育器、宮腔放置球囊、應(yīng)用生物膠及防粘連膜并配合人工周期藥物治療等方法對預(yù)防其再粘連有一定的臨床療效。然而中、重度宮腔粘連患者,宮腔內(nèi)創(chuàng)面較大,正常內(nèi)膜組織較少,更易再度形成粘連,以上方法對此類患者療效欠佳。有學(xué)者利用羊膜移植治療重度宮腔粘連,發(fā)現(xiàn)其能夠促進(jìn)子宮內(nèi)膜再生從而降低宮腔再粘連的發(fā)生率。羊膜具有抗原性低、促進(jìn)上皮化、減輕炎癥反應(yīng)、抑制纖維組織增生等作用,羊膜移植在眼表重建及皮膚移植中均有所應(yīng)用,并取得了令人滿意的效果。做為一種特殊的低免疫原性的物質(zhì),其擁有特殊的結(jié)構(gòu)及分泌功能,新鮮羊膜中含大量生物活性物質(zhì),可以促進(jìn)上皮細(xì)胞增殖分化,減少瘢痕形成及預(yù)防粘連等。目前羊膜已在各學(xué)科及手術(shù)領(lǐng)域廣為發(fā)展。近年來,羊膜的臨床應(yīng)用范圍逐漸擴(kuò)大,包括眼科、燒傷科、骨組織重建、泌尿系統(tǒng)等等,而在婦科,羊膜可以作為一種生物敷料應(yīng)用于陰道重建、宮頸形成,也有實(shí)驗(yàn)證實(shí)新鮮羊膜移植入IUA分離術(shù)后的宮腔,可以較好的降低宮腔再粘連的發(fā)生率,有很好的應(yīng)用前景。目的本課題通過在新鮮羊膜基質(zhì)面培養(yǎng)子宮內(nèi)膜細(xì)胞,觀察細(xì)胞在羊膜基質(zhì)面的生長情況,并采用Real time-PCR及ELISA兩種實(shí)驗(yàn)方法比較以羊膜為載體培養(yǎng)的子宮內(nèi)膜細(xì)胞與體外正常培養(yǎng)液培養(yǎng)的子宮內(nèi)膜細(xì)胞的肝細(xì)胞生長因子(HGF)、基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-9)及血管內(nèi)皮因子(VEGF)的表達(dá)水平,初步探索以人羊膜作為載體種植人子宮內(nèi)膜細(xì)胞的可行性,為探索子宮內(nèi)膜重建提供有效和來源豐富的移植材料,并為探討羊膜移植預(yù)防宮腔粘連分子機(jī)制積累實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。方法1.采用膠原酶消化及篩網(wǎng)過濾等方法體外分離培養(yǎng)人子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞,通過形態(tài)學(xué)觀察及免疫組化法對培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行鑒定;采用胰酶消化、機(jī)械刮除等方法制備去除羊膜上皮細(xì)胞的羊膜外基質(zhì)支架。2.將體外擴(kuò)增傳代的子宮內(nèi)膜細(xì)胞種植在去除羊膜上皮細(xì)胞的羊膜外基質(zhì)支架上作為實(shí)驗(yàn)組,以無羊膜載體培養(yǎng)的子宮內(nèi)膜細(xì)胞為空白對照組。倒置顯微鏡下觀察兩組細(xì)胞生長形態(tài)的變化,實(shí)時(shí)熒光定量PCR法測定各組細(xì)胞HGF、MMP-9、VEGF m RNA的表達(dá)水平,ELISA法測定各組細(xì)胞MMP-9蛋白表達(dá)量的變化。3.將實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,不同組間m RNA及蛋白相對表達(dá)量符合正態(tài)分布的定量資料,兩兩比較采用采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn),檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。結(jié)果1.子宮內(nèi)膜細(xì)胞形態(tài)學(xué)特點(diǎn)及免疫組化結(jié)果:培養(yǎng)出的子宮內(nèi)膜細(xì)胞多為多角形,細(xì)胞兩端有多個(gè)短小突起,細(xì)胞排列無極性,貼壁生長。隨著細(xì)胞的傳代培養(yǎng),細(xì)胞逐漸拉長成梭形,具有成纖維細(xì)胞形態(tài)。細(xì)胞生長周期一般為7-10天,第1天為潛伏生長期,第2-4天進(jìn)入對數(shù)生長期,5-6天后達(dá)平臺期,7天后逐漸萎縮消退。子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞特異的波形蛋白抗體(Vimentin)染色呈陽性,陽性細(xì)胞的胞質(zhì)呈棕黃色,角蛋白(CK19)抗體染色陰性。2.將第二代子宮內(nèi)膜細(xì)胞接種于羊膜載體2h后,細(xì)胞粘附羊膜基質(zhì),呈小圓球狀、散在分布、折光性較好,但尚未貼壁。12h后,細(xì)胞少量貼壁,逐漸聚集成團(tuán)、成片生長,與培養(yǎng)皿上生長增殖的子宮內(nèi)膜細(xì)胞形態(tài)相似,但細(xì)胞排列欠規(guī)則,細(xì)胞與細(xì)胞之間連接緊密,并有細(xì)胞拉長,相互交通呈網(wǎng)狀。l周左右可觀察到明顯成片生長的細(xì)胞。羊膜載體在培養(yǎng)的第10天左右開始出現(xiàn)皺縮,細(xì)胞出現(xiàn)凋亡。3.在羊膜基質(zhì)面培養(yǎng)的子宮內(nèi)膜細(xì)胞,HGF m RNA含量為2.033±0.922,MMP-9 m RNA含量為1.356±0.399,VEGF m RNA含量為0.976±0.597;對照組m RNA HGF含量為1.299±1.004,MMP-9含量為0.871±0.529,VEGF含量為0.426±0.193;三組因子m RNA表達(dá)實(shí)驗(yàn)組均較對照組高,差異有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4.ELISA檢測細(xì)胞裂解液MMP-9蛋白表達(dá)量,羊膜載體組為(0.762±0.085)ng/ml,對照組為(0.089±0.008)ng/ml,羊膜載體組較對照組MMP-9蛋白表達(dá)量高,差異明顯有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)結(jié)論1.子宮內(nèi)膜細(xì)胞在羊膜細(xì)胞外基質(zhì)支架上能很好地生長,以羊膜為載體培養(yǎng)子宮內(nèi)膜細(xì)胞具有一定的可行性。2.羊膜載體可以增強(qiáng)子宮內(nèi)膜細(xì)胞HGF、VEGF、MMP-9的表達(dá)。3.羊膜移植為預(yù)防TCRA后宮腔再粘連提供新的思路與方法。
【關(guān)鍵詞】：羊膜 子宮內(nèi)膜細(xì)胞 肝細(xì)胞生長因子 基質(zhì)金屬蛋白酶9 血管內(nèi)皮因子 宮腔粘連
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R711.74
【目錄】：

• 摘要4-8
• Abstract8-15
• 英文縮略詞匯表15-16
• 1 引言16-19
• 2 材料方法19-29
• 2.1 材料19-21
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)對象19
• 2.1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑19-20
• 2.1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器20-21
• 2.1.4 主要試劑配制21
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法21-29
• 2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)21-22
• 2.2.2 細(xì)胞換液22
• 2.2.3 細(xì)胞傳代22-23
• 2.2.4 細(xì)胞鑒定方法23
• 2.2.5 羊膜載體的制備23-24
• 2.2.6 細(xì)胞接種與實(shí)驗(yàn)分組24
• 2.2.7 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測兩組細(xì)胞HGF、MMP-9、VEGF mRNA表達(dá)24
• 2.2.8 ELISA檢測細(xì)胞MMP-9 蛋白的表達(dá)24-27
• 2.2.9 ELISA 檢測細(xì)胞 HGF、MMP-9、VEGF 蛋白的表達(dá)27-29
• 3 結(jié)果29-33
• 3.1 體外原代、傳代培養(yǎng)子宮內(nèi)膜細(xì)胞的觀察29
• 3.2 子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞免疫組化鑒定結(jié)果29
• 3.3 體外傳代的子宮內(nèi)膜細(xì)胞在羊膜載體上的細(xì)胞形態(tài)及生長情況29
• 3.4 兩組細(xì)胞HGF、MMP-9、VEGF mRNA表達(dá)的變化29-31
• 3.5 兩組細(xì)胞MMP-9 蛋白的表達(dá)31-33
• 4 討論33-40
• 4.1 體外原代培養(yǎng)子宮內(nèi)膜細(xì)胞的意義及本實(shí)驗(yàn)研究的優(yōu)越性33-34
• 4.2 羊膜載體的優(yōu)越性34-36
• 4.3 HGF、MMP-9、VEGF對子宮內(nèi)膜損傷修復(fù)的影響及與內(nèi)膜纖維化的關(guān)系36-39
• 4.4 問題與展望39-40
• 5 結(jié)論40-41
• 6 附圖41-43
• 7 參考文獻(xiàn)43-48
• 綜述48-66
• 參考文獻(xiàn)61-66
• 個(gè)人簡歷在學(xué)期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文與研究成果66-67
• 致謝67

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 秦海燕;王晶磊;陳加祥;;子宮內(nèi)膜細(xì)胞培養(yǎng)方法的研究[J];實(shí)用臨床醫(yī)學(xué);2007年10期

  本文關(guān)鍵詞：羊膜載體對子宮內(nèi)膜細(xì)胞HGF、MMP-9、VEGF表達(dá)的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：301627