目的探討轉(zhuǎn)染人附睪蛋白4 （HE4）基因?qū)β殉舶┘?xì)胞ES-2基因表達(dá)的影響。方法構(gòu)建HE4高表達(dá)及空質(zhì)粒對(duì)照組細(xì)胞系,通過基因芯片探尋存在差異表達(dá)的基因,并對(duì)其進(jìn)行基因本體（GO）注釋和富集分析、京都基因與基因組百科全書（KEGG）通路分析,并對(duì)芯片結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果有639個(gè)基因發(fā)生了差異表達(dá),其中上調(diào)基因283個(gè),下調(diào)基因356,實(shí)時(shí)PCR及免疫組化方法對(duì)差異表達(dá)基因FOXA2和SERPIND1進(jìn)行了RNA和蛋白水平的驗(yàn)證,結(jié)果與芯片結(jié)果相一致。GO富集分析發(fā)現(xiàn)差異基因在生物過程中,參與了生物高聚物代謝、程序性細(xì)胞死亡及凋亡等,KEGG通路分析發(fā)現(xiàn)這些基因與MAPK、性激素生物合成、癌癥、細(xì)胞周期和p53信號(hào)等有關(guān)。結(jié)論與HE4相關(guān)的基因表達(dá)譜序列的變化可以為HE4在卵巢癌中功能及作用通路等分子機(jī)制的研究提供理論基礎(chǔ)。 

【文章來源】：中國(guó)醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2020,49(05)北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：7 頁(yè)

【部分圖文】：

轉(zhuǎn)染細(xì)胞的總RNA凝膠電泳

對(duì)差異表達(dá)基因進(jìn)行KEGG通路分析，發(fā)現(xiàn)MAPK、性激素生物合成、癌癥、細(xì)胞周期、p53信號(hào)等通路顯著富集，見表5。2.5 實(shí)時(shí)PCR及免疫組織化學(xué)方法驗(yàn)證芯片結(jié)果

在差異表達(dá)基因中挑選2個(gè)表達(dá)上調(diào)的基因（FOXA2、SERPIND1）進(jìn)行了實(shí)時(shí)PCR實(shí)驗(yàn)以驗(yàn)證芯片結(jié)果的可靠性，結(jié)果顯示，基因FOXA2的mRNA相對(duì)表達(dá)在HE4轉(zhuǎn)染組細(xì)胞中為4.712±1.504，明顯高于空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組（1.177±0.264,P=0.002）及原始未處理組（1.238±0.394,P=0.002）的表達(dá)量，而后兩組的表達(dá)量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.757）；基因SERPIND1的mRNA相對(duì)表達(dá)在HE4轉(zhuǎn)染組細(xì)胞中為1.703±0.487，明顯高于空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組（0.956±0.246,P=0.006）及原始未處理組（0.959±0.080,P=0.006）的表達(dá)量，而后兩組的表達(dá)量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.977）。實(shí)時(shí)PCR的結(jié)果與基因芯片顯示的結(jié)果相一致。將經(jīng)過實(shí)時(shí)PCR驗(yàn)證的SERPIND1通過免疫組化方法進(jìn)行蛋白水平的驗(yàn)證。結(jié)果顯示，類似于HE4,SERPIND1在細(xì)胞中的表達(dá)以胞質(zhì)及胞膜中為主（圖3),HE4及SERPIND1在卵巢癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為78%及88%，高表達(dá)率分別為66%及62%。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，在50例標(biāo)本中，HE4及SERPIND1同時(shí)陰性的有4例，同時(shí)陽(yáng)性的有37例，Spearman相關(guān)性分析提示兩者表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.402,P=0.003）。以上通過基因及蛋白水平，驗(yàn)證了基因芯片結(jié)果的可靠性。見表6。3 討論

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]卵巢癌化療耐藥標(biāo)志物的研究進(jìn)展[J]. 林貴玲,康玉,徐叢劍.  實(shí)用婦產(chǎn)科雜志. 2018(12)
[2]HE4與婦科腫瘤相關(guān)性的研究進(jìn)展[J]. 李芳,吳素慧.  國(guó)際婦產(chǎn)科學(xué)雜志. 2017(04)



本文編號(hào)：3002656