本文關(guān)鍵詞：HPV相關(guān)細(xì)胞系的蛋白質(zhì)質(zhì)譜分析以及E7導(dǎo)致細(xì)胞周期重復(fù)復(fù)制機(jī)制的探討，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究目的宮頸癌是女性中最常見的惡性腫瘤之一,其發(fā)病率位居女性惡性腫瘤的第二位,危害性高。以往大量的流行病學(xué)調(diào)查顯示,宮頸癌發(fā)病的主要原因是由于感染人乳頭瘤病毒(human papillomavirus, HPV)所致。同時(shí)也有研究表明,HPVE7引起的細(xì)胞周期的重復(fù)復(fù)制可以促進(jìn)宮頸癌的發(fā)生。然而細(xì)胞從感染HPV到癌變所經(jīng)歷的蛋白質(zhì)表達(dá)方面的變化尚未完全闡明,并且HPVE7引起的細(xì)胞周期重復(fù)復(fù)制的具體機(jī)制也尚不清楚。另外,近年來發(fā)現(xiàn)的一種新型蛋白翻譯后修飾-琥珀�；呀�(jīng)被證實(shí)對(duì)細(xì)胞代謝、生長(zhǎng)以及癌變都有很大的作用,因此,我們也想觀察這種琥珀�；揎椩趯m頸上皮細(xì)胞癌變過程中是否也發(fā)揮著重要的作用。本研究一方面選取了HPV永生化細(xì)胞系和SiHa細(xì)胞系,分別代表感染HPV的細(xì)胞和已經(jīng)癌變的宮頸癌細(xì)胞,分析HPV永生化細(xì)胞系與SiHa細(xì)胞系之間的蛋白質(zhì)表達(dá)差異,探討從HPV感染到宮頸癌的發(fā)生之間的變化；另一方面從與細(xì)胞周期復(fù)制相關(guān)的一些信號(hào)通路入手,如Emi1,Cdt1,CDC6, Skp2等,探討E7所引起的細(xì)胞周期重復(fù)復(fù)制的原理和機(jī)制。研究方法一方面,我們用Trypsin將提取出的細(xì)胞全蛋白酶解為肽段,之后通過高效液相色譜(HPLC)與質(zhì)譜(MS)聯(lián)用技術(shù)對(duì)蛋白質(zhì)總數(shù)以及一種新型的蛋白質(zhì)翻譯后修飾-琥珀�；M(jìn)行鑒定,然后再用一些生物信息學(xué)的方法對(duì)其進(jìn)行分析總結(jié),從宏觀水平來了解細(xì)胞從感染HPV到最終癌變所經(jīng)歷的蛋白質(zhì)方面的變化。另一方面,我們主要采用在細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)染siRNA,之后用Western Blot的方法檢測(cè)一些與細(xì)胞周期相關(guān)的蛋白如Emi1, Cdt1, CDC6, Skp2等的表達(dá)情況,同時(shí)利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期的變化,最終得出一些相關(guān)的結(jié)論。結(jié)果HPLC與MS聯(lián)用,總共鑒定到的蛋白總數(shù)為10,691個(gè),琥珀酰化修飾位點(diǎn)共6342個(gè)。經(jīng)過非標(biāo)定量分析之后,共發(fā)現(xiàn)572種差異表達(dá)蛋白。Western Blot驗(yàn)證結(jié)果與非標(biāo)定量一致。通過進(jìn)一步的生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn),在HPV永生化細(xì)胞系中高表達(dá)的273種蛋白多集中在疾病的相關(guān)通路,而在宮頸癌細(xì)胞系中高表達(dá)的299種蛋白多集中在代謝通路和核糖體通路。琥珀�；揎椏偭侩m無明顯差異,但發(fā)現(xiàn)一種可信度較高但未報(bào)道過的修飾位點(diǎn)-SGK1 K41琥珀酰化。流式細(xì)胞儀所分析的細(xì)胞周期結(jié)果顯示,在用伯來霉素(bleomycin)處理的情況下,E7可以引起非常明顯的重復(fù)復(fù)制；Western Blot結(jié)果顯示E7能夠引起Emi1、Cdt1、CDC6、Skp2的高表達(dá)；轉(zhuǎn)染了Emi1 siRNA之后,CDC6和Skp2都有不同程度的下降；在HeLa細(xì)胞中轉(zhuǎn)染了Emi1 siRNA后,也可以看到一定程度的重復(fù)復(fù)制。結(jié)論與HPV永生化細(xì)胞系相比,SiHa細(xì)胞系代謝能力及翻譯蛋白能力更強(qiáng),而HPV永生化細(xì)胞中高表達(dá)蛋白則大多與疾病相關(guān),且更易發(fā)生惡化；HPV永生化細(xì)胞和SiHa細(xì)胞中新型蛋白質(zhì)翻譯后修飾-琥珀�；诤暧^水平無明顯差異,SGK1 K41琥珀酰化很有可能是一種新的蛋白修飾位點(diǎn)；Emi1在E7引起的重復(fù)復(fù)制中發(fā)揮著重要的作用；E7可能是由于影響泛素化通路APC的抑制因子Emi1的表達(dá),進(jìn)而影響一些與細(xì)胞周期相關(guān)蛋白如CDC6, Cdt1等的表達(dá),最終導(dǎo)致了細(xì)胞發(fā)生重復(fù)復(fù)制。創(chuàng)新性及意義：1.本研究首次從宏觀水平將HPV永生化細(xì)胞系和SiHa細(xì)胞系的全蛋白質(zhì)進(jìn)行了比較。2.本研究首次從細(xì)胞水平證實(shí)了宮頸癌細(xì)胞系比單純感染HPV的細(xì)胞系有著更強(qiáng)的代謝活性。3.本研究進(jìn)一步探討了HPV E7引起細(xì)胞周期重復(fù)復(fù)制的相關(guān)機(jī)制,為更好地理解宮頸癌的致病機(jī)制奠定了一定的基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：宮頸腫瘤 人乳頭瘤病毒 蛋白質(zhì)組學(xué) 質(zhì)譜 細(xì)胞周期 重復(fù)復(fù)制
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.33
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• ABSTRACT8-10
• 符號(hào)說明10-11
• 前言11-14
• 材料與方法14-21
• 1. 實(shí)驗(yàn)材料14-17
• 2. 實(shí)驗(yàn)方法17-21
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果21-32
• 1. 質(zhì)譜分析的相關(guān)結(jié)果21-28
• 2. HPV E7影響細(xì)胞周期重復(fù)復(fù)制的相關(guān)結(jié)果28-32
• 討論32-36
• 1. HPV永生化細(xì)胞與SiHa細(xì)胞差異表達(dá)蛋白質(zhì)質(zhì)譜分析的相關(guān)討論32-33
• 2. HPV E7導(dǎo)致的細(xì)胞周期重復(fù)復(fù)制機(jī)制探討的相關(guān)討論33-36
• 參考文獻(xiàn)36-39
• 致謝39-40
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄40-41
• 附件41

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 李志琴,章靜波;細(xì)胞周期及其調(diào)控——兼論2001年諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)[J];生理科學(xué)進(jìn)展;2002年02期

2 楊兆穎,李金梁;細(xì)胞周期及其周期調(diào)控研究的發(fā)展簡(jiǎn)史[J];中華醫(yī)史雜志;2004年03期

3 王立芳;徐振曄;;中藥調(diào)節(jié)細(xì)胞周期的研究進(jìn)展[J];中西醫(yī)結(jié)合學(xué)報(bào);2008年11期

4 ;《現(xiàn)代細(xì)胞周期分子生物學(xué)》已出版[J];中華實(shí)驗(yàn)和臨床感染病雜志(電子版);2010年03期

5 ;細(xì)胞周期的閥門[J];第一軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2000年06期

6 吳家睿;;細(xì)胞周期的調(diào)控[J];科學(xué);2002年01期

7 王曉玲;D類細(xì)胞周期素在細(xì)胞周期中的作用[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(分子生物學(xué)分冊(cè));2002年01期

8 佟力,歐陽紅梅,肖敏;慢性粒細(xì)胞白血病患者細(xì)胞周期各時(shí)相指標(biāo)變化的觀察[J];昆明醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2002年02期

9 ;細(xì)胞周期及其調(diào)控機(jī)制的研究[J];上海針灸雜志;2003年05期

10 張惠;施生根;王美霞;沈麗娟;張少鋒;;模擬咬合壓力對(duì)人牙周膜成纖維細(xì)胞細(xì)胞周期的影響[J];牙體牙髓牙周病學(xué)雜志;2005年12期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 程濤;;細(xì)胞周期抑制因子對(duì)干細(xì)胞的調(diào)控作用[A];第11次中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會(huì)議論文匯編[C];2007年

2 黃勛;滕虎;修志龍;馮恩民;;細(xì)胞周期調(diào)控機(jī)制的數(shù)學(xué)模型與分析[A];第一屆全國(guó)化學(xué)工程與生物化工年會(huì)論文摘要集(下)[C];2004年

3 黃敏;梁娟;魏俊寧;李朝軍;;熱休克蛋白70與鈣調(diào)蛋白的相互作用可能調(diào)控細(xì)胞周期的進(jìn)程[A];中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)第九次會(huì)員代表大會(huì)暨青年學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要集[C];2007年

4 孫黎光;李新鳴;;web2基因參與芽殖酵母S期檢查點(diǎn)調(diào)控[A];中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)會(huì)第八屆會(huì)員代表大會(huì)暨全國(guó)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2001年

5 康鐵邦;;細(xì)胞周期失調(diào)與腫瘤[A];中國(guó)病理生理學(xué)會(huì)第十三屆腫瘤、第十四屆免疫專業(yè)委員會(huì)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2012年

6 平潔;汪暉;;吲哚-3-原醇對(duì)肝星狀細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期的影響[A];第十屆全國(guó)生化與分子藥理學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要匯編[C];2007年

7 張學(xué)敏;;細(xì)胞周期與基因組不穩(wěn)定性(英文)[A];第11屆全國(guó)脂質(zhì)與脂蛋白學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2012年

8 張進(jìn)華;丁彥青;;介紹一種分步傳代消化的新方法篩選培養(yǎng)細(xì)胞周期中M期細(xì)胞[A];中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)第五次會(huì)議論文摘要匯編[C];1992年

9 張紅鋒;陳樹德;張利華;;低頻脈沖電場(chǎng)對(duì)真皮成纖維細(xì)胞細(xì)胞周期的影響[A];動(dòng)物學(xué)專輯——上海市動(dòng)物學(xué)會(huì)1997年年會(huì)論文集[C];1997年

10 季宇彬;高鵬;鄒翔;;G_2/M檢驗(yàn)點(diǎn)調(diào)控機(jī)制研究概述[A];2008年中國(guó)藥學(xué)會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)暨第八屆中國(guó)藥師周論文集[C];2008年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前9條

1 大可;細(xì)胞周期鐘如何運(yùn)行（下）[N];大眾科技報(bào);2001年

2 本報(bào)記者 彭丹;細(xì)胞周期 引爆生命科學(xué)新革命？[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2002年

3 $$點(diǎn)評(píng)人：陸佳韻（現(xiàn)為中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤研究所分子腫瘤學(xué)國(guó)家重點(diǎn)試驗(yàn)室博士生） $$吳eㄖ泄窖Э蒲г褐琢鲅芯克赴鍤抑魅�，我国医学遗传学的奠基人之一�

本文編號(hào)：288801