目的卵巢癌在女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤中的發(fā)生率排在第三位,病死率位居首位,且發(fā)病率逐年上升。卵巢癌細(xì)胞活性較強(qiáng),轉(zhuǎn)移速度快,缺乏特異性的癥狀和體征,早期準(zhǔn)確的分子標(biāo)志物預(yù)警較少,診斷困難。緊密連接蛋白家族claudins屬于膜蛋白家族,是構(gòu)成細(xì)胞緊密連接(tight junctions,TJs)的重要組成成分之一。claudins在多種疾病中均出現(xiàn)表達(dá)異常,且與子宮頸癌、卵巢癌、子宮內(nèi)膜癌等婦科腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。目前研究認(rèn)為claudin-6在卵巢癌病理組織中高表達(dá),提示claudin-6可能在卵巢癌中有表達(dá)差異。通過(guò)檢測(cè)claudins的表達(dá)水平和細(xì)胞空間定位,可使其作為診斷和預(yù)測(cè)婦科惡性腫瘤預(yù)后的實(shí)用指標(biāo)。本課題擬從細(xì)胞水平探索claudin-6在卵巢癌中的表達(dá)水平,進(jìn)一步揭示過(guò)表達(dá)claudin-6對(duì)卵巢癌細(xì)胞增殖、遷移、侵襲、凋亡等生物學(xué)特性的影響,從基因、蛋白水平驗(yàn)證claudin對(duì)卵巢癌細(xì)胞進(jìn)展轉(zhuǎn)歸的作用,為進(jìn)一步探索claudin-6在卵巢癌進(jìn)展中的作用和機(jī)制奠定基礎(chǔ)。方法1.熒光定量 PCR 法和 Western Blot 檢測(cè) claudin-6 在 SKOV3、A2780 和OVCAR3卵巢癌細(xì)胞株,以及IOSE80卵巢正常上皮細(xì)胞株中的表達(dá)量:2.構(gòu)建過(guò)表達(dá)claudin-6的真核表達(dá)質(zhì)粒pEGFP-N1-CLDN6,并轉(zhuǎn)染SKOV3細(xì)胞;3.過(guò)表達(dá)claudin-6的卵巢癌SKOV3細(xì)胞的Western Blot鑒定與細(xì)胞免疫熒光鑒定;4.CCK8法和二維三維克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)claudin-6過(guò)表達(dá)對(duì)SKOV3細(xì)胞增殖能力的影響;5.細(xì)胞劃痕和Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)claudin-6過(guò)表達(dá)對(duì)SKOV3細(xì)胞遷移、侵襲能力的影響;6.流式細(xì)胞儀檢測(cè)claudin-6過(guò)表達(dá)對(duì)SKOV3細(xì)胞凋亡的影響;結(jié)果1.claudin-6 在 A2780、SKOV3、OVCAR3 卵巢癌細(xì)胞株和 IOSE80 正常卵巢上皮細(xì)胞株中均有表達(dá),在SKOV3細(xì)胞株中表達(dá)量較高。2.構(gòu)建并鑒定了表達(dá)EGFP熒光蛋白的pEGFP-N1-CLDN6質(zhì)粒,測(cè)序結(jié)果符合設(shè)計(jì)預(yù)期。3.在SKOV3細(xì)胞中轉(zhuǎn)染pEGFP-N1-CLDN6質(zhì)粒,G418篩選過(guò)表達(dá)細(xì)胞株,通過(guò)熒光顯微鏡挑取、Western blot法篩選出過(guò)表達(dá)claudin-6的SKOV3單克隆細(xì)胞株。細(xì)胞免疫熒光染色后,在細(xì)胞膜及核膜上可見(jiàn)claudin-6的分布。4.CCK8實(shí)驗(yàn)、二維克隆形成實(shí)驗(yàn)和三維克隆形成實(shí)驗(yàn)顯示,過(guò)表達(dá)claudin-6的SKOV3細(xì)胞增殖速度、克隆形成能力較空載組細(xì)胞及未轉(zhuǎn)染細(xì)胞顯著增強(qiáng)。5.劃痕實(shí)驗(yàn)及Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示過(guò)表達(dá)claudin-6顯著增強(qiáng)SKOV3細(xì)胞的遷移和侵襲。6.流式細(xì)胞儀結(jié)果顯示過(guò)表達(dá)claudin-6對(duì)卵巢癌SKOV3細(xì)胞有凋亡抑制作用結(jié)論1.Claudin-6在SKOV3和OVCAR3卵巢癌細(xì)胞株中高表達(dá),在A(yíng)2780卵巢癌細(xì)胞株和IOSE80卵巢正常上皮細(xì)胞株中表達(dá)量較低;2.過(guò)表達(dá)claudin-6促進(jìn)卵巢癌SKOV3細(xì)胞增殖;3.過(guò)表達(dá)claudin-6增強(qiáng)卵巢癌SKOV3細(xì)胞遷移和侵襲能力;4.過(guò)表達(dá)claudin-6對(duì)卵巢癌SKOV3細(xì)胞有凋亡抑制作用。
【學(xué)位單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類(lèi)】：R737.31
【部分圖文】：

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間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（ＰＯ．ＯＯｌ），ｖｅｃｔｏｒ組與ｃｏｎｔｒｏｌ組之間無(wú)統(tǒng)訃學(xué)差異（／Ｍ）．?１２５）。??結(jié)果顯示ｃｌａｕｄｉｎ－６過(guò)表達(dá)組與ｖｅｃｔｏｒ組、ｃｏｎｔｒｏｌ組相比，ｃｌａｕｄｉｎ－６蛋白表達(dá)強(qiáng)??度明顯增加，如表２－２，圖２－５，圖２－６。??表２－２免疫熒光檢測(cè)ＳＫ０Ｖ３細(xì)胞外組ｃｌａｉｉｄｍ－６的灰達(dá)水?＇卜??Ｔａｂｌｅ?２－２?Ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ?ｓｔａｉｎｉｎｇ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｔｈｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ｃｌａｕｄｉｎ－６?ｉｎ?ＳＫＯＶ３?ｃｅｌｌｓ?ｏｆ??ｃｌａｕｄｉｎ－６?ｇｒｏｕｐ，?ｖｅｃｔｏｒ?ｇｒｏｕｐ?ａｎｄ?ｃｏｎｔｒｏｌ?ｇｒｏｕｐ．??４９??

－ｍｕｍ??一?■■■環(huán)??圖２－５免疫熒光法檢測(cè)ｃｌａｕｄｉｎ－６在各組ＳＫＯＶ３細(xì)胞中的表達(dá)（２０〇ｘ）??Ｆｉｇｕｒｅ２－５?Ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ?ｓｔａｉｎｉｎｇ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｔｈｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ｃｌａｕｄｉｎ－６?ｉｎ
【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 白晶;李?lèi)?ài)軍;;宮頸癌干細(xì)胞的研究進(jìn)展[J];腫瘤基礎(chǔ)與臨床;2013年05期

2 范桂穎;王燕;;卵巢癌105例手術(shù)治療臨床分析[J];中國(guó)醫(yī)藥指南;2011年32期

本文編號(hào)：2871774