目的卵巢癌在女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤中的發(fā)生率排在第三位,病死率位居首位,且發(fā)病率逐年上升。卵巢癌細胞活性較強,轉移速度快,缺乏特異性的癥狀和體征,早期準確的分子標志物預警較少,診斷困難。緊密連接蛋白家族claudins屬于膜蛋白家族,是構成細胞緊密連接(tight junctions,TJs)的重要組成成分之一。claudins在多種疾病中均出現(xiàn)表達異常,且與子宮頸癌、卵巢癌、子宮內膜癌等婦科腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關。目前研究認為claudin-6在卵巢癌病理組織中高表達,提示claudin-6可能在卵巢癌中有表達差異。通過檢測claudins的表達水平和細胞空間定位,可使其作為診斷和預測婦科惡性腫瘤預后的實用指標。本課題擬從細胞水平探索claudin-6在卵巢癌中的表達水平,進一步揭示過表達claudin-6對卵巢癌細胞增殖、遷移、侵襲、凋亡等生物學特性的影響,從基因、蛋白水平驗證claudin對卵巢癌細胞進展轉歸的作用,為進一步探索claudin-6在卵巢癌進展中的作用和機制奠定基礎。方法1.熒光定量 PCR 法和 Western Blot 檢測 claudin-6 在 SKOV3、A2780 和OVCAR3卵巢癌細胞株,以及IOSE80卵巢正常上皮細胞株中的表達量:2.構建過表達claudin-6的真核表達質粒pEGFP-N1-CLDN6,并轉染SKOV3細胞;3.過表達claudin-6的卵巢癌SKOV3細胞的Western Blot鑒定與細胞免疫熒光鑒定;4.CCK8法和二維三維克隆形成實驗檢測claudin-6過表達對SKOV3細胞增殖能力的影響;5.細胞劃痕和Transwell實驗檢測claudin-6過表達對SKOV3細胞遷移、侵襲能力的影響;6.流式細胞儀檢測claudin-6過表達對SKOV3細胞凋亡的影響;結果1.claudin-6 在 A2780、SKOV3、OVCAR3 卵巢癌細胞株和 IOSE80 正常卵巢上皮細胞株中均有表達,在SKOV3細胞株中表達量較高。2.構建并鑒定了表達EGFP熒光蛋白的pEGFP-N1-CLDN6質粒,測序結果符合設計預期。3.在SKOV3細胞中轉染pEGFP-N1-CLDN6質粒,G418篩選過表達細胞株,通過熒光顯微鏡挑取、Western blot法篩選出過表達claudin-6的SKOV3單克隆細胞株。細胞免疫熒光染色后,在細胞膜及核膜上可見claudin-6的分布。4.CCK8實驗、二維克隆形成實驗和三維克隆形成實驗顯示,過表達claudin-6的SKOV3細胞增殖速度、克隆形成能力較空載組細胞及未轉染細胞顯著增強。5.劃痕實驗及Transwell實驗結果顯示過表達claudin-6顯著增強SKOV3細胞的遷移和侵襲。6.流式細胞儀結果顯示過表達claudin-6對卵巢癌SKOV3細胞有凋亡抑制作用結論1.Claudin-6在SKOV3和OVCAR3卵巢癌細胞株中高表達,在A2780卵巢癌細胞株和IOSE80卵巢正常上皮細胞株中表達量較低;2.過表達claudin-6促進卵巢癌SKOV3細胞增殖;3.過表達claudin-6增強卵巢癌SKOV3細胞遷移和侵襲能力;4.過表達claudin-6對卵巢癌SKOV3細胞有凋亡抑制作用。
【學位單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R737.31
【部分圖文】：

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【參考文獻】

相關期刊論文 前2條

1 白晶;李愛軍;;宮頸癌干細胞的研究進展[J];腫瘤基礎與臨床;2013年05期

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本文編號：2871774