子宮損傷后修復(fù)缺陷是導(dǎo)致女性不育、流產(chǎn)、早產(chǎn)、子宮破裂發(fā)生的主要原因之一,不僅破壞女性生殖能力,嚴(yán)重時(shí)甚至危及母兒生命安全。因此,促進(jìn)子宮損傷的修復(fù)愈合對(duì)維持女性生殖健康有重要意義。然而,損傷修復(fù)期的人類子宮組織獲取受限,這不僅影響子宮損傷修復(fù)及重塑機(jī)制相關(guān)研究的深入,也阻礙了子宮損傷性疾病臨床診治的進(jìn)展,因此動(dòng)物實(shí)驗(yàn)成為探索這一未知領(lǐng)域的研究工具。組織工程是一門以細(xì)胞生物學(xué)、材料科學(xué)與再生微環(huán)境相結(jié)合,進(jìn)行體外或體內(nèi)組織器官功能性修復(fù)、器官重構(gòu)研究的新興學(xué)科。組織工程的興起為人體組織缺損導(dǎo)致的功能障礙提供了理想的治療方案。近年來有關(guān)修復(fù)和再生的組織工程研究越來越多,其中膠原蛋白因良好的組織相容性、低免疫源性和易降解等生物學(xué)特性被推廣和應(yīng)用。采用膠原蛋白支架負(fù)載細(xì)胞或生物活性因子促進(jìn)損傷組織修復(fù)也收到了滿意的臨床療效。白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF)是一種具有多種生物學(xué)功能的細(xì)胞因子,近年來研究發(fā)現(xiàn),LIF有效地促進(jìn)了骨骼肌、神經(jīng)和心肌等多種組織器官的再生和修復(fù)。而LIF在子宮組織表達(dá)豐富,子宮內(nèi)膜腺上皮LIF的表達(dá)是子宮內(nèi)膜接受胚胎著床不可或缺的分子;此外,LIF在子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞和子宮肌層均有表達(dá),提示LIF可能具有促進(jìn)子宮組織損傷修復(fù)的生物學(xué)功能。本研究對(duì)此進(jìn)行了初步探索,研究第一部分,采用大鼠子宮壁全層損傷動(dòng)物模型,將負(fù)載不同劑量LIF膠原支架移植至子宮壁全層損傷的缺損區(qū)域,與PBS膠原支架修復(fù)相比較。通過術(shù)后1-2周損傷區(qū)域修復(fù)變化的對(duì)比分析,探索LIF促進(jìn)子宮損傷修復(fù)的可能性及有效劑量,通過對(duì)比分析術(shù)后1周大鼠子宮損傷修復(fù)局部的炎癥細(xì)胞和炎癥因子,研究LIF調(diào)控局部炎癥反應(yīng)與促進(jìn)損傷修復(fù)的關(guān)系;研究的第二部分,采用膠原支架負(fù)載0.5μg LIF或等容量PBS修復(fù)大鼠子宮壁全層損傷,通過對(duì)比分析術(shù)后2-12周子宮組織結(jié)構(gòu)修復(fù)和重塑改變,驗(yàn)證LIF促進(jìn)子宮壁損傷修復(fù)的有效性;進(jìn)一步通過妊娠實(shí)驗(yàn)對(duì)比分析修復(fù)子宮的功能差異。本研究發(fā)現(xiàn)和明確了LIF促進(jìn)大鼠子宮損傷修復(fù)的生物學(xué)功能,為L(zhǎng)IF應(yīng)用于子宮損傷性疾病的臨床治療提供了動(dòng)物實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。目的:1.通過移植負(fù)載LIF或PBS的膠原支架于大鼠子宮壁全層損傷模型的子宮缺損區(qū)域,對(duì)比觀察不同濃度LIF或PBS對(duì)子宮損傷修復(fù)的效應(yīng),探索LIF修復(fù)子宮損傷的可行性及最佳劑量,并進(jìn)一步對(duì)比研究LIF在損傷修復(fù)過程中的可能機(jī)制。2.采用負(fù)載LIF或PBS的膠原支架修復(fù)大鼠子宮壁全層損傷,通過術(shù)后12周的長(zhǎng)期觀察,明確LIF具有促進(jìn)損傷子宮結(jié)構(gòu)和功能修復(fù)的生物學(xué)功能。方法:1.參照本實(shí)驗(yàn)室前期建立的大鼠子宮壁全層損傷動(dòng)物模型,在大鼠子宮體中段系膜對(duì)側(cè)切除1.5 cm長(zhǎng)、0.5 cm寬(相當(dāng)于子宮周徑2/3)子宮壁全層缺損。前期研究已證明,大鼠不能自然功能性修復(fù)該大小的子宮壁損傷。2.24只成年雌性SD(Sprague-Dawley,SD)大鼠隨機(jī)分為4組:PBS/膠原支架對(duì)照組,0.25μg LIF/膠原支架組,0.5μg LIF/膠原支架組,1.0μg LIF/膠原支架組,子宮壁全層損傷后,分別將負(fù)載0.25μg、0.5μg、1.0μg LIF或PBS的1.5 cm×0.5cm膠原支架縫合于缺損區(qū)(LIF各組6只大鼠,12只子宮,n=12;PBS組6只大鼠,12只子宮,n=12,共48只子宮),術(shù)后2周對(duì)損傷子宮行大體解剖觀察、HE和免疫組織化學(xué)(immunohistochemistry,IHC)染色組織學(xué)觀察,評(píng)估子宮壁的形態(tài),計(jì)數(shù)膠原支架上的細(xì)胞和新生血管數(shù)量。IHC主要用于檢測(cè)v WF(von-Willebrand-factor,v WF)的表達(dá)。3.10只雌性SD大鼠隨機(jī)分為兩組,包括LIF/膠原支架組5只(子宮損傷后,用負(fù)載0.5μg LIF的膠原支架縫合缺損),PBS/膠原支架組5只(用PBS浸潤(rùn)的膠原支架膜縫合缺損)(PBS:n=10;LIF:n=10)。術(shù)后1周,取損傷區(qū)域子宮組織,對(duì)損傷子宮組織切片進(jìn)行HE、CD45的IHC和免疫熒光染色,對(duì)比兩組炎癥細(xì)胞變化;收集受損部位的子宮組織,提取總RNA并通過逆轉(zhuǎn)錄PCR和實(shí)時(shí)定量PCR分析檢測(cè)修復(fù)組織內(nèi)炎性細(xì)胞因子(IL-10,IL-12,IL-6,IL-1β,TNF-α和TGF-β1)m RNA水平。4.明確LIF修復(fù)損傷子宮的可行性及有效劑量后,48只雌性SD大鼠隨機(jī)分為兩組:包括LIF/膠原支架組(子宮損傷后,用負(fù)載0.5μg LIF的膠原支架縫合缺損),PBS/膠原支架組(用等容量PBS浸潤(rùn)的膠原支架縫合缺損)。分別在術(shù)后2周(PBS:n=12;LIF:n=12),4周(PBS:n=12;LIF:n=12),8周(PBS:n=12;LIF:n=12)和12周(PBS:n=12;LIF:n=12),進(jìn)行子宮通暢實(shí)驗(yàn)和大體檢查,通過組織切片IHC染色a平滑肌肌動(dòng)蛋白(alpha smooth muscle actin,a-SMA)、細(xì)胞角蛋白7(Cytokeratin 7,CK7)評(píng)估子宮平滑肌和子宮內(nèi)膜上皮再生情況。5.雌性SD大鼠25只分為兩組,包括LIF/膠原支架組15只,PBS/膠原支架組10只(LIF:n=30;PBS:n=20),子宮壁全層損傷后采用兩種不同方法修復(fù),觀察滿8周,然后將兩組動(dòng)物與雄性SD大鼠配對(duì),在妊娠15-19日剖視并計(jì)數(shù)妊娠子宮數(shù)、子宮壁損傷處的著床情況和胚胎數(shù)以評(píng)估LIF對(duì)損傷子宮妊娠能力的影響。結(jié)果:1.術(shù)后短期對(duì)比觀察:(1)子宮損傷局部細(xì)胞化和血管再生:術(shù)后2周,各組損傷區(qū)域未降解的膠原支架中可見細(xì)胞浸潤(rùn),局部無明顯炎癥反應(yīng),LIF各組的膠原支架內(nèi)細(xì)胞數(shù)明顯多于PBS組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.001);IHC血管密度:0.25μg和0.5μg LIF組血管密度均明顯高于PBS組(P0.001)。(2)膠原支架內(nèi)炎癥細(xì)胞和炎性因子變化:術(shù)后1周,HE染色顯示LIF和PBS兩組膠原支架均未降解,未發(fā)現(xiàn)周圍組織的排斥反應(yīng),此時(shí)損傷區(qū)域膠原支架中均見炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。CD45免疫組化和免疫熒光染色顯示,LIF組CD45陽性細(xì)胞(炎癥細(xì)胞)浸潤(rùn)數(shù)量少于PBS組,LIF組CD45的AOD值較PBS組減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。損傷子宮組織內(nèi)炎性因子IL-10,IL-12,IL-6,IL-1β,TNF-α和TGF-β1m RNA表達(dá)水平檢測(cè)結(jié)果:LIF/膠原支架修復(fù)子宮組織中IL-10的表達(dá)水平較對(duì)照組上調(diào)2.74倍(P0.01);而IL-12的表達(dá)下調(diào)2.09倍(P0.05)。兩組IL-6,IL-1β,TNF-α和TGF-β1的表達(dá)水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2.術(shù)后長(zhǎng)期對(duì)比觀察:(1)子宮愈合大體外觀:術(shù)后8周和12周,LIF/膠原支架修復(fù)手術(shù)區(qū)域外觀上與周圍組織相似,雖然通暢實(shí)驗(yàn)提示兩組子宮均無梗阻,但PBS/膠原支架組修復(fù)區(qū)域可見瘢痕及局部凹陷。(2)子宮平滑肌再生修復(fù):LIF組術(shù)后8、12周α-SMA陽性面積比例與術(shù)后2周比較均顯著增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);術(shù)后8和12周,LIF/膠原支架組的α-SMA陽性面積比例均顯著高于同期PBS/膠原支架組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.001)。(3)子宮內(nèi)膜再生修復(fù):各組術(shù)后4周至12周子宮內(nèi)膜厚度無明顯變化,組間比較,LIF組子宮內(nèi)膜厚度較PBS組增加,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);術(shù)后8周和12周,LIF組的子宮內(nèi)膜再生腺體數(shù)量明顯高于PBS組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.001)。3.妊娠實(shí)驗(yàn)結(jié)果兩組平均妊娠率和每個(gè)子宮妊娠的平均胚胎數(shù)目比較,LIF/膠原支架組高于PBS/膠原支架組,平均妊娠率(86.67%vs 60.00%)和平均胚胎數(shù)(3.63±0.34vs 2.35±0.51),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。LIF/膠原支架組中有10個(gè)子宮(10/30)在修補(bǔ)區(qū)域有胚胎著床,而PBS/膠原支架組在子宮手術(shù)區(qū)域僅有3個(gè)子宮(3/20)有胚胎著床,整個(gè)妊娠期兩組均無子宮破裂發(fā)生。結(jié)論:1.5×0.5cm膠原支架負(fù)載LIF 0.5μg能夠促進(jìn)大鼠子宮壁全層損傷修復(fù),在損傷修復(fù)早期,LIF主要表現(xiàn)出促進(jìn)損傷區(qū)域的細(xì)胞化、促進(jìn)局部血管再生功能,LIF的作用呈現(xiàn)劑量依賴性;LIF對(duì)子宮肌層和子宮內(nèi)膜腺體再生修復(fù)作用顯著;LIF修復(fù)的子宮組織結(jié)構(gòu)接近正常子宮,能夠接受胚胎和完成妊娠,妊娠率和胚胎數(shù)顯著提高;在子宮損傷修復(fù)的炎癥期,LIF抑制子宮損傷局部炎細(xì)胞浸潤(rùn)和促炎因子釋放,同時(shí)促進(jìn)抑炎因子在損傷組織的表達(dá),對(duì)損傷后炎癥反應(yīng)的調(diào)控可能是LIF促進(jìn)子宮壁全層損傷修復(fù)的重要機(jī)制之一。
【學(xué)位單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R711
【部分圖文】：
圖 1 組織損傷修復(fù) 3 階段研究報(bào)道了一種新型大鼠子宮壁重建模型，并采用胞生長(zhǎng)因子（basic fibroblast growth factor，bFGF）
個(gè)正常動(dòng)情周期（4-5 天）的雌鼠納入實(shí)驗(yàn)研究，并于動(dòng)情間期進(jìn)行手術(shù)處理。實(shí)驗(yàn)鼠共計(jì) 24 只(48 個(gè)子宮)，每組各 6 只（12 個(gè)子宮）。圖2 雌鼠動(dòng)情周期陰道涂片鏡下觀察我們采用前期建立的大鼠子宮壁全層損傷的動(dòng)物模型，切除大鼠子宮壁1.5cm 長(zhǎng)×0.5cm 寬(子宮周徑 1/2)，保留系膜側(cè)的全層缺損，每個(gè)子宮 1 個(gè)手術(shù)缺損創(chuàng)面，使用相應(yīng)大小的膠原支架縫合到大鼠子宮壁缺損區(qū)域，見示意圖（圖3），前期實(shí)驗(yàn)室研究結(jié)果已經(jīng)證實(shí)了膠原支架適用于細(xì)胞的粘附和維持組織的固有形態(tài)，作為子宮再生細(xì)胞外基質(zhì)的適用性。
使用相應(yīng)大小的膠原支架縫合到大鼠子宮壁缺損區(qū)域，見示意圖（圖3），前期實(shí)驗(yàn)室研究結(jié)果已經(jīng)證實(shí)了膠原支架適用于細(xì)胞的粘附和維持組織的固有形態(tài)，作為子宮再生細(xì)胞外基質(zhì)的適用性。
【相似文獻(xiàn)】
相關(guān)期刊論文 前10條
1 張聰;張艷勤;Mark Spilker;Myron Spector;李登云;魯玉梅;許和平;;應(yīng)用不同物理加強(qiáng)條件的Ⅰ型膠原支架的大白鼠動(dòng)物模型與組織學(xué)分析[J];中國(guó)組織工程研究;2016年12期
2 杜暘;金鼎;高秀秋;;復(fù)合丹參的絲素/膠原支架培養(yǎng)牙周膜成纖維細(xì)胞應(yīng)用效果觀察[J];山東醫(yī)藥;2012年38期
3 曹成波;宋國(guó)棟;吳克安;張春聯(lián);呂榮暉;王勇;;新型膠原支架材料的制備[J];現(xiàn)代化工;2006年S1期
4 王澤民;段莉;梁宇杰;王大平;;自體軟骨細(xì)胞復(fù)合Ⅰ型膠原支架體外動(dòng)態(tài)培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)研究[J];中國(guó)矯形外科雜志;2015年18期
5 陳輝;李斌;王健;李濤;張偉;林濤;楊光;滿振濤;;膠原支架復(fù)合兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外模擬的微重力培養(yǎng)[J];中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù);2010年34期
6 鄭澤峰;沈煒亮;樂輝輝;戴雪松;歐陽宏偉;陳維善;;三維平行膠原支架促進(jìn)肌腱樣胞外基質(zhì)形成的作用[J];浙江大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2016年02期
7 王敏;潘旭;毛斌;賴默溫;滕嘉雯;陳誼金;周瓊秀;馬峰;;膠原支架促進(jìn)人類多能干細(xì)胞向紅細(xì)胞的誘導(dǎo)分化[J];中國(guó)輸血雜志;2018年04期
8 徐明曦;周哲;張明;吳稼晟;李偉;孫康;王忠;趙陽;盧慕峻;;人脂肪來源干細(xì)胞與膠原支架共培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)研究[J];組織工程與重建外科雜志;2012年04期
9 杜暘;高秀秋;金鼎;;絲素膠原支架與人牙周膜成纖維細(xì)胞相容性研究[J];中國(guó)實(shí)用口腔科雜志;2009年09期
10 李文波;張春蓮;曹成波;呂榮暉;朱芳蓮;李木森;;新型膠原支架材料改性的研究[J];北京生物醫(yī)學(xué)工程;2008年06期
相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條
1 薛白;白血病抑制因子修復(fù)大鼠子宮壁全層損傷的實(shí)驗(yàn)研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2019年
2 張秀杰;膠原支架的制備及與血小板血漿復(fù)合的相關(guān)研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2014年
3 房永祥;3D膠原支架微環(huán)境對(duì)樹突狀細(xì)胞發(fā)育和生物學(xué)功能影響的研究[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2017年
4 陶亮;人工膽管構(gòu)建與應(yīng)用的實(shí)驗(yàn)研究[D];南京大學(xué);2013年
5 李新安;促進(jìn)大鼠子宮壁全層損傷后功能性修復(fù)的實(shí)驗(yàn)研究[D];南京大學(xué);2012年
6 沈煒亮;肌腱干細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞衍生因子復(fù)合蠶絲—膠原支架促進(jìn)肌腱再生的研究[D];浙江大學(xué);2011年
7 趙鑫;基于巰基化殼聚糖季銨鹽納米粒及膠原支架的基因遞釋研究[D];復(fù)旦大學(xué);2010年
8 孫津龍;仿生纖維內(nèi)硅化膠原支架材料調(diào)控單核細(xì)胞促骨原位再生的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2017年
9 王瑤;纖維內(nèi)外協(xié)同礦化膠原支架和膠原膜材料的構(gòu)建及研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2017年
10 陳偉;堿性成纖維細(xì)胞因子靶向結(jié)合膠原支架材料促進(jìn)膀胱重建的實(shí)驗(yàn)研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2010年
相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條
1 張珂珂;不同結(jié)構(gòu)膠原材料對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞生長(zhǎng)和分化影響的研究[D];中國(guó)科學(xué)院大學(xué)(中國(guó)科學(xué)院深圳先進(jìn)技術(shù)研究院);2018年
2 陳彤;巴沙魚皮膠原支架在兔顱骨缺損再生中的研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2017年
3 陳鵬飛;有序膠原支架復(fù)合SDF-1治療骨軟骨缺損的作用及機(jī)制研究[D];浙江大學(xué);2017年
4 唐國(guó)強(qiáng);有序膠原支架聯(lián)合膠原靶向神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子-3應(yīng)用于脊髓損傷修復(fù)的可行性研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2011年
5 周東明;bFGF-PRP膠原支架復(fù)合物修復(fù)骨缺損的實(shí)驗(yàn)研究[D];內(nèi)蒙古科技大學(xué)包頭醫(yī)學(xué)院;2013年
6 呂振京;人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞復(fù)合羥基磷灰石/膠原支架材料修復(fù)骨缺損的實(shí)驗(yàn)研究[D];暨南大學(xué);2013年
7 趙宏霞;組織工程人工角膜膠原支架材料的制備及其性能研究[D];暨南大學(xué);2002年
8 滕偉;Atelocollagen膠原支架上三維培養(yǎng)乳鼠心肌細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究[D];新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院;2009年
9 殷甜甜;膠原支架誘導(dǎo)肌源性干細(xì)胞分化為胰島樣細(xì)胞及其機(jī)制[D];遼寧醫(yī)學(xué)院;2013年
10 李斌;兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞復(fù)合膠原支架的生物反應(yīng)器培養(yǎng)[D];山東大學(xué);2010年
本文編號(hào)：
2863488
